染料脱色过氧化物酶BsDyP及其在真菌毒素脱毒中的应用制造技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，具体涉及染料脱色过氧化物酶BsDyP及其编码基因和应用；本发明专利技术所涉及的染料脱色过氧化物酶BsDyP，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；本发明专利技术还公开了编码上述BsDyP的基因，其DNA序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4；本发明专利技术还公开了上述染料脱色过氧化物酶BsDyP的制备方法及其在真菌毒素脱毒上的应用，及其作为真菌毒素生物降解剂的制备方法和应用，本发明专利技术的染料脱色过氧化物酶BsDyP在真菌毒素脱毒领域具有巨大的应用前景。

Dye decolorizing peroxidase bsdyp and its application in mycotoxin detoxification

【技术实现步骤摘要】
染料脱色过氧化物酶BsDyP及其在真菌毒素脱毒中的应用
本专利技术属于农业生物
，具体涉及染料脱色过氧化物酶BsDyP及其编码基因和应用，尤其是在真菌毒素脱毒中的应用。
技术介绍
真菌毒素是真菌的次级代谢产物，具有致癌作用、遗传毒性、生殖毒性、神经毒性和免疫抑制作用，对人和各种畜禽产生极大的危害。目前已经分离和鉴定的真菌毒素有300多种，其中污染最广泛、毒性最大，研究最多的是黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)、单端孢霉烯族毒素(Trichothecenemycotoxins，包括呕吐毒素和T-2毒素等)、赭曲霉毒素(Ochratoxin)和烟曲霉毒素(Fumonisin)等。目前在食品和饲料工业用于真菌毒素脱毒的方法主要为两大类，其一是物理吸附脱毒，添加一些蒙脱石类的无机吸附剂和酯化甘露聚糖类的有机吸附剂；另一种是生物降解，通过微生物或其产生的酶对真菌毒素进行生物降解，破坏毒素的分子结构使其代谢生成无毒或低毒的代谢产物。生物降解方法安全、高效和环保，是当下真菌毒素脱毒的研究热点。目前报道的具有降解玉米赤霉烯酮活性的酶包括来源于红粉粘帚霉的内酯水解酶ZHD101以及来源于葡萄顶枯病菌的玉米赤霉烯酮降解酶ZENdease-N2；报道的具有降解黄曲霉毒素的酶包括来源于假蜜环菌的黄曲霉毒素氧化酶ADTZ、来源于分枝杆菌的F420H2依赖还原酶FDR和来源于白腐真菌的真菌漆酶，但是这些酶对毒素的降解机理及降解产物的毒性不十分清楚，限制了真菌毒素降解酶的研究和应用。越来越多证据表明，其他性质未明的酶也可能参与玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素这两种具有苯环和内酯环结构的真菌毒素的生物降解。因此，寻找和挖掘新的真菌毒素降解酶具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP及其在真菌毒素脱毒中的应用。该染料脱色过氧化物酶BsDyP能够降解真菌毒素。本专利技术的目的在于提供一种具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP。本专利技术的另一目的在于提供上述具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP的编码基因。本专利技术的另一目的在于提供含有上述编码基因的重组表达载体。本专利技术的另一目的在于提供含有上述编码基因的重组菌株或细胞。本专利技术的另一目的在于提供上述染料脱色过氧化物酶BsDyP的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种含有上述染料脱色过氧化物酶BsDyP和葡萄糖氧化酶GOD的复合酶。本专利技术的另一目的在于提供一种含有上述染料脱色过氧化物酶BsDyP和葡萄糖氧化酶的复合酶的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种含有上述染料脱色过氧化物酶BsDyP的真菌毒素生物降解剂。本专利技术的另一目的在于提供上述含有染料脱色过氧化物酶BsDyP的真菌毒素生物降解剂的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供一种降解真菌毒素的方法。本专利技术的另一目的在于提供含有上述染料脱色过氧化物酶BsDyP、染料脱色过氧化物酶BsDyP和葡萄糖氧化酶GOD的复合酶，及真菌毒素生物降解剂在真菌毒素脱毒方面的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术所述的具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP的氨基酸序列可以为：SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示序列，其中SEQIDNO.1含有信号肽，SEQIDNO.2不含信号肽；或者SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示序列中的一个或两个氨基酸残基被取代和/或缺失和/或插入；或者与SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示的氨基酸序列具有至少90％以上的序列一致性，优选95％序列一致性，并具有染料脱色过氧化物酶BsDyP的功能的序列。本专利技术还提供了编码所述染料脱色过氧化物酶BsDyP的核苷酸序列为：SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示序列；或者SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示序列中的一个或两个核苷酸残基被取代和/或缺失和/或插入；或者与SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示的核苷酸序列具有至少90％以上的序列一致性，优选95％序列一致性的核苷酸序列。SEQIDNO.1：MSDEQKKPEQIHRRDILKWGAMAGAAVAIGASGLGGLAPLVQTAAKPSKKDEKEEEQIVPFYGKHQAGITTAHQTYVYFAALDVTAKDKSDIITLFRNWTSLTQMLTSGKKMSAEQRNQYLPPQDTGESADLSPSNLTVTFGFGPGFFEKDGKDRFGLKSKKPKHLAALPAMPNDNLDEKQGGGDICIQVCADDEQVAFHALRNLLNQAVGTCEVRFVNKGFLSGGKNGETPRNLFGFKDGTGNQSTKDDTLMNSIVWIQSGEPDWMTGGTYMAFRKIKMFLEVWDRSSLKDQEDTFGRRKSSGAPFGQKKETDPVKLNQIPSNSHVSLAKSTGKQILRRAFSYTEGLDPKTGYMDAGLLFISFQKNPDNQFIPMLKALSAKDALNEYTQTIGSALYACPGGCKKGEYIAQRLLESSEQIDNO.2：IGASGLGGLAPLVQTAAKPSKKDEKEEEQIVPFYGKHQAGITTAHQTYVYFAALDVTAKDKSDIITLFRNWTSLTQMLTSGKKMSAEQRNQYLPPQDTGESADLSPSNLTVTFGFGPGFFEKDGKDRFGLKSKKPKHLAALPAMPNDNLDEKQGGGDICIQVCADDEQVAFHALRNLLNQAVGTCEVRFVNKGFLSGGKNGETPRNLFGFKDGTGNQSTKDDTLMNSIVWIQSGEPDWMTGGTYMAFRKIKMFLEVWDRSSLKDQEDTFGRRKSSGAPFGQKKETDPVKLNQIPSNSHVSLAKSTGKQILRRAFSYTEGLDPKTGYMDAGLLFISFQKNPDNQFIPMLKALSAKDALNEYTQTIGSALYACPGGCKKGEYIAQRLLESSEQIDNO.3：ATGAGCGATGAACAGAAAAAGCCAGAACAAATTCACAGACGGGACATTTTAAAATGGGGAGCGATGGCGGGGGCAGCCGTTGCGATCGGTGCCAGCGGTCTCGGCGGTCTCGCTCCGCTTGTTCAGACTGCGGCTAAGCCATCGAAAAAGGATGAAAAAGAGGAGGAGCAGATTGTTCCGTTTTACGGAAAGCATCAGGCCGGAATCACAACTGCCCATCAGACGTATGTCTATTTTGCTGCACTGGATGTAACAGCAAAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP，其特征在于，具有：/n(Ⅰ)、如SEQ ID No.1或2所示的氨基酸序列；或/n(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或/n(III)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)所述序列具有至少90％序列一致性，优选95％序列一致性，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.具有降解真菌毒素功能的染料脱色过氧化物酶BsDyP，其特征在于，具有：
(Ⅰ)、如SEQIDNo.1或2所示的氨基酸序列；或
(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或
(III)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)所述序列具有至少90％序列一致性，优选95％序列一致性，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。


2.编码如权利要求1所述染料脱色过氧化物酶BsDyP的核苷酸，其特征在于，具有：
(Ⅰ)、如SEQIDNo.3或4所示的核苷酸序列；或
(Ⅱ)、如SEQIDNo.3或4所示的核苷酸序列的互补核苷酸序列；或
(Ⅲ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
(Ⅳ)、与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或两个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
(V)、与(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)所述核苷酸序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列，优选95％序列一致性的核苷酸序列。


3.一种包含如权利要求2所述的核苷酸的重组表达载体。


4.一种包含如权利要求2所述的核苷酸的重组菌株或细胞。


5.制备如权利要求1所述的染料脱色过氧化物酶BsDyP的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、用如权利要求3所述的重组表达载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
步骤2、培养所述重组菌株，诱导染料脱色过氧化物酶BsDyP表达；
步骤3、纯化所述染料脱色过氧化物酶BsDyP。


6.如权利要求1所述的染料脱色过氧化物酶BsDyP在真菌毒素脱毒中的应用。


7.一种复合酶，其特征在于，包括权利要求1所述的染料脱色过氧化物酶BsDyP和葡萄糖氧化酶GOD复合配制而成。


8.一种真菌毒素生物降解剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的染料脱色过氧化物酶BsDyP或权利要求7所述的复合酶，以及生理上可接受的配伍载体和/或介体。


9.根据权利要求8所述的真菌毒素生物降解剂，其特征在于，所述生理上可接受的配伍载体包括但不限于麦芽糖糊精、环糊精、小麦、麦麸、稻米、米糠、蔗糖、淀粉、Na2SO4、滑石粉、蒙脱石、寡糖或酵母细胞壁中的一种或多种。


10.根据权利要求8所述的真菌毒素生物降解剂，其特征在于，所述介体用于辅助染料脱色过氧化物酶BsDyP催化降解真菌毒素的天然和合成介体，其包括但不限于丁香醛、乙酰丁香酮、乙酰香草酮、对香豆酸、丁香酸甲酯、香芹酚、百里香酚、肉桂醛、柠檬醛、柠檬烯、γ-萜品烯、紫苏醛、大蒜素、丁香酚、茴香脑、薄荷酮、沉香醇、异戊醛、芳樟醇、姜油酮、异硫氰酸酯、2,2-联氨-二(3-乙基-苯...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽红，郭永鹏，马秋刚，计成，唐彧，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11