电子媒介体天青C的提纯方法技术

本发明专利技术提供了一种电子媒介体天青C的提纯方法，包括以下步骤：称取低纯度的天青C，用芴甲氧羰酰氯作为氨基保护试剂与天青C反应，得氨基保护的电子媒介体，经脱保护后，得高纯度的天青C。本发明专利技术所述提纯方法，单次处理量大，获得的高纯度产物的产量也大，可有效满足血糖检测用等生物传感器的制备需求，提高生产效率。率。率。

【技术实现步骤摘要】
电子媒介体天青C的提纯方法


[0001]本专利技术涉及一种电子媒介体的提纯方法，特别涉及用于生物传感器制备的电子媒介体天青C的提纯方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷或生物效应降低引起的一种疾病。目前还没有能彻底根治糖尿病的医学方法，积极地通过早期筛查以及对应的预防治疗是控制血糖升高的有效手段。利用酶电极法的血糖仪进行日常的血糖值监测，是目前普遍采用的方法。
[0003]在酶电极法的血糖生物传感器（又被称为血糖测试试纸）中，采用的酶是大分子，其氧化还原活性中心被包被在酶蛋白分子里，它与电极表面之间的直接地的电子传递很难进行，即使直接电子传递能够进行，其电子传递速率也比较慢。因此，在酶电极法的测试试纸上会添加电子媒介体，形成基于电子媒介体的生物传感器。
[0004]天青C（AZURE C）是一种生物染色剂，同时也是一种氧化还原指示剂和电子媒介体,被广泛应用于生物化学和电化学研究，例如天青C作为电子媒介体用于血糖生物传感器。市售的天青C纯度较低，市售的天青C纯度基本上都在40
‑
50%之间，并还含有天青A、天青B、硫堇等一系列结构相近的物质，不同生产厂家出品的天青C各组分含量的比例差异较大，即使是同一厂家也存在较大的批间差异，导致市售天青C在实际应用过程中存在很大的不确定因素。为了使天青C的用量更加精确，提高使用效果，获得高纯度的天青C迫在眉睫。
[0005]市售天青C以盐酸盐的形式存在，但其在水或有机溶剂中的溶解度都很差，而且其他组分的极性与天青C非常接近，导致天青C的纯化非常困难。鉴于天青C的化学特性，可以选择HPLC制备进行纯化，获得纯度大于等于99%的高纯度天青C。但由于天青C溶解度的问题，以及HPLC制备的上样量低，一般单次上样量约5mg，单次纯化可获得1
‑
2mg天青C，导致HPLC的提纯效率很低，制备纯化的成本很高。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种利用Fmoc
‑
Cl作为氨基保护试剂对天青C进行提纯的提纯方法，包括以下步骤：将低纯度的天青C与碳酸钠、二恶烷配成混合液；向所述混合液中加入芴甲氧羰酰氯，反应得粘稠产物；粘稠产物溶于有机溶剂，滤去不溶性杂质，干燥，得天青C的中间体(Fmoc)2
‑
Azure C；中间体(Fmoc)2
‑
Azure C溶解于DMF，加入二乙胺反应，加入乙醚，析出黑色固体，干燥，得高纯度的天青C。
[0007]进一步的，所述混合液在冷却至10℃后加入芴甲氧羰酰氯。
[0008]进一步的，加入芴甲氧羰酰氯，先在冰水浴下反应，再转入室温反应。
[0009]进一步的，将所述粘稠产物溶于二氯甲烷。
[0010]进一步的，中间体(Fmoc)2
‑
Azure C溶解于DMF，冰水浴下加入二乙胺，冰水浴下反应。
[0011]更为具体的，称取碳酸钠，在水中搅拌溶解，再加入二恶烷和低纯度的Azure C，冰
水浴冷却至10℃，分批加入芴甲氧羰酰氯，冰水浴下反应，再转入室温反应，生产粘稠产物；倾去上清液，粘稠产物用二氯甲烷溶解，滤去不溶性杂质，滤液用水洗涤；无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得到中间体(Fmoc)2
‑
Azure C；(Fmoc)2
‑
Azure C溶解于DMF中，冰水浴下慢慢滴加入二乙胺，冰水浴下反应，加入乙醚，析出黑色固体，抽滤，乙醚洗涤，室温下真空干燥，得高纯度的天青C。
[0012]进一步的，分批加入芴甲氧羰酰氯，冰水浴下反应1小时，再转入室温反应2小时，生产粘稠产物。
[0013]进一步的，(Fmoc)2
‑
Azure C溶解于DMF中，冰水浴下慢慢滴加入二乙胺，冰水浴下反应1小时。
[0014]本专利技术的有益效果是：本专利技术利用Fmoc
‑
Cl作为氨基保护剂使市售低纯度的天青C形成易溶于有机溶剂的中间体(Fmoc)2
‑
Azure C，再提纯该中间体，经脱保护后，最终获得高纯度的天青C。本专利技术所述提纯方法，单次处理量大，获得的高纯度产物的产量也大，可有效满足血糖检测用等生物传感器的制备需求，提高生产效率。
[0015]附图说明
[0016]图1 是市售Azure C（提纯前，纯度较低的天青C）的LC
‑
MS谱图。
[0017]图2 是市售Azure C的LC
‑
MS谱图——质谱扫描图中，T=1.55min出峰位置对应的质谱图。
[0018]图3 是实施例1中Fmoc作为保护基提纯Azure C后的LC
‑
MS谱图。
[0019]具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细的说明。
[0021]分析天青C的LC
‑
MS（液质联用仪）分析方法如下：仪器：Waters Acquity UPLC H
‑
Class+SQD2液质联用仪,色谱柱：Acquity UPLC
®ꢀ
BEH C181.7μm，21
×
50mm Column。
[0022]流动相：乙腈/水（0.1%甲酸），乙腈%=10~90%（3min）。
[0023]流速：0.4ml/min。
[0024]检测波长：200~800nm全扫描。
[0025]柱温:40℃。
[0026]经上述LC
‑
MS分析，市售天青C的含量为40%，如图1所示。经分析天青C质谱图[M
‑
Cl]+
= 242.35，如图2所示。
[0027]实施例 1 Fmoc
‑
Cl作为氨基保护试剂提纯天青C（Azure C）芴甲氧羰酰氯（Fmoc
‑
Cl）作为氨基保护剂提纯天青C的方法。
[0028] 称取15g（141.5mmol）碳酸钠，加150ml水搅拌溶解，再加入150ml二恶烷、10g（36mmol）含量为40%的市售Azure C，冰水浴冷却至10℃。分批加入23.28g（90mmol）芴甲氧羰酰氯，冰水浴下反应1小时，再转入室温反应2小时，生成粘稠产物。倾去上清液，粘稠产物用二氯甲烷溶解，滤去不溶性杂质，滤液用水洗涤；无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得到3.4g中间体(Fmoc)2‑
Azure C。(Fmoc)2‑
Azure C即为氨基保护的天青C。
[0029]将制得的(Fmoc)2‑
Azure C溶解于75ml的DMF中，冰水浴下慢慢滴加入20ml的二乙胺，冰水浴下反应1小时。加入500ml乙醚，析出黑色固体，抽滤，乙醚洗涤。室温下真空干燥，得2.3g Azure C（纯度：84.6%），如图3所示。
[0030]实施例2 市售Azure C 用HPLC直接制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.电子媒介体天青C的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：将低纯度的天青C与碳酸钠、二恶烷配成混合液；向所述混合液中加入芴甲氧羰酰氯，反应得粘稠产物；粘稠产物溶于有机溶剂，滤去不溶性杂质，干燥，得天青C的中间体(Fmoc)2‑
Azure C；中间体(Fmoc)2‑
Azure C溶解于DMF，加入二乙胺反应，加入乙醚，析出黑色固体，干燥，得高纯度的天青C。2.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述混合液在冷却至10℃后加入芴甲氧羰酰氯。3.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，加入芴甲氧羰酰氯，先在冰水浴下反应，再转入室温反应。4.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，将所述粘稠产物溶于二氯甲烷。5.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，中间体(Fmoc)2‑
Azure C溶解于DMF，冰水浴下加入二乙胺，冰水浴下反应。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆晓峰，徐俊杰，
申请(专利权)人：英科隆生物技术杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：