一种电子媒介体的提纯方法技术

本发明专利技术提供了一种用于生物传感器上的电子媒介体的提纯方法，所述电子媒介体带有氨基，提纯方法包括以下步骤：称取纯度较低的电子媒介体；用氨基保护试剂与电子媒介体反应，得氨基保护的电子媒介体，氨基保护的电子媒介体溶于有机溶剂，经提取得高纯度的氨基保护的电子媒介体；所述高纯度的氨基保护的电子媒介体与脱保护剂反应，氨基脱保护，得纯度较高的电子媒介体。利用本发明专利技术的提纯方法，单次的处理量非常大，有效提高了电子媒介体的提纯效率，降低制备成本，作为生物传感器上的试剂成分之一，利用本发明专利技术方法提纯得到的高纯度电子媒介体可用于血糖检测等生物传感器的制备。媒介体可用于血糖检测等生物传感器的制备。媒介体可用于血糖检测等生物传感器的制备。

【技术实现步骤摘要】
一种电子媒介体的提纯方法


[0001]本专利技术涉及一种电子媒介体的提纯方法，特别涉及用于血糖检测等检测试剂中的电子媒介体的提纯方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷或生物效应降低引起的一种疾病。目前还没有能彻底根治糖尿病的医学方法，积极地通过早期筛查以及对应的预防治疗是控制血糖升高的有效手段。利用酶电极法的血糖仪进行日常的血糖值监测，是目前普遍采用的方法。
[0003]在酶电极法的血糖生物传感器(又被称为血糖测试试纸)中，采用的酶是大分子，其氧化还原活性中心被包被在酶蛋白分子里，它与电极表面之间的直接地的电子传递很难进行，即使直接电子传递能够进行，其电子传递速率也比较慢。因此，在酶电极法的测试试纸上会添加电子媒介体，形成基于电子媒介体的生物传感器。
[0004]天青C(AZURE C)是一种生物染色剂，同时也是一种氧化还原指示剂和电子媒介体,被广泛应用于生物化学和电化学研究，例如天青C作为电子媒介体用于血糖生物传感器。市售的天青C纯度较低，市售的天青C纯度基本上都在40
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50％之间，并还含有天青A、天青B、硫堇等一系列结构相近的物质，不同生产厂家出品的天青C各组分含量的比例差异较大，即使是同一厂家也存在较大的批间差异，导致市售天青C在实际应用过程中存在很大的不确定因素。为了使天青C的用量更加精确，提高使用效果，获得高纯度的天青C迫在眉睫。
[0005]市售天青C以盐酸盐的形式存在，但其在水或有机溶剂中的溶解度都很差，而且其他组分的极性与天青C非常接近，导致天青C的纯化非常困难。鉴于天青C的化学特性，可以选择HPLC制备进行纯化，获得纯度大于等于99％的高纯度天青C。但由于天青C溶解度的问题，以及HPLC制备的上样量低，一般单次上样量约5mg，单次纯化可获得1
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2mg天青C，导致HPLC的提纯效率很低，制备纯化的成本很高。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中的问题，本专利技术通过氨基保护试剂保护电子媒介体上的氨基，获得易于分离的中间体，通过脱保护去除氨基上的保护基，得高纯度电子媒介体。
[0007]本专利技术提供了一种电子媒介体的提纯方法，所述电子媒介体带有氨基，包括以下步骤：称取纯度较低的电子媒介体；氨基保护试剂与所述电子媒介体反应，得氨基保护的电子媒介体，氨基保护的电子媒介体溶于有机溶剂，经提取得高纯度的氨基保护的电子媒介体；所述高纯度的氨基保护的电子媒介体与脱保护剂反应，氨基脱保护，得纯度较高的电子媒介体。
[0008]进一步的，所述电子媒介体选自天青C。
[0009]进一步的，所述氨基保护试剂选自芴甲氧羰酰氯、二碳酸二叔丁酯、三苯基氯甲烷、氯甲酸苄酯、对甲苯磺酰氯、三氟乙酸酐。
[0010]进一步的，所述氨基保护的电子媒介体的结构式为
[0011][0012]其中，R＝H或者X，X＝氨基保护基，氨基保护基X的个数1～3个不等。
[0013]进一步的，氨基保护基如：Fmoc或Boc或Trt或Cbz或Tos或TFA。
[0014]进一步的，所述脱保护剂选自二乙胺、三氟乙酸。
[0015]进一步的，所述提取高纯度的氨基保护的电子媒介体的方法为柱层析法。
[0016]电子媒介体以天青C提纯为例，本专利技术通过一种简单的化学方法提纯天青C。首先用氨基保护试剂与天青C反应，得到氨基保护的天青C，所述氨基保护试剂选自芴甲氧羰酰氯(Fmoc
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Cl)、二碳酸二叔丁酯(Boc2O)、三苯基氯甲烷(Trt
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Cl)、氯甲酸苄酯(Cbz
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Cl)、对甲苯磺酰氯(Tos
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Cl)或三氟乙酸酐(TFAA)等。氨基保护的天青C易溶于各种有机溶剂，可以通过柱层析等提纯方法，获得高纯度的氨基保护的天青C。然后进行氨基脱保护，即可获得纯度较高的天青C。
[0017][0018]其中，R＝H或者X，X＝氨基保护基(如：Fmoc或Boc或Trt或Cbz或Tos或TFA)，使用不同的氨基保护试剂，氨基保护基X的个数1～3个不等。
[0019]其中，
[0020]天青C(Azure C)：
[0021]芴甲氧羰酰氯(Fmoc
‑
Cl)：
[0022](Fmoc)2‑
Azure C：
[0023]二碳酸二叔丁酯(Boc2O)：
[0024](Boc)2‑
Azure C：
[0025]三苯基氯甲烷(Trt
‑
Cl)：
[0026]Trt
‑
Azure C：
[0027]本专利技术的目的之一是提供了一种带氨基的电子媒介体的提纯方法，包括以下步骤：称取低纯度的电子媒介体；氨基保护试剂与电子媒介体反应，得氨基保护的电子媒介体，氨基保护的电子媒介体溶于有机溶剂，经提取得高纯度的氨基保护的电子媒介体；所述高纯度的氨基保护的电子媒介体与脱保护剂反应，氨基脱保护，得高纯度的电子媒介体。
[0028]进一步的，所述电子媒介体选自天青C。
[0029]进一步的，所述氨基保护试剂选自芴甲氧羰酰氯、二碳酸二叔丁酯、三苯基氯甲烷、氯甲酸苄酯、对甲苯磺酰氯或三氟乙酸酐。
[0030]进一步的，所述氨基保护的电子媒介体的结构式为
[0031][0032]其中，R＝H或者X，X＝氨基保护基，氨基保护基X的个数1～3个不等。
[0033]进一步的，，所述氨基保护基选自Fmoc或Boc或Trt或Cbz或Tos或TFA。
[0034]进一步的，所述脱保护剂选自二乙胺、三氟乙酸。
[0035]进一步的，所述提取高纯度的氨基保护的电子媒介体的方法为柱层析法。
[0036]本专利技术的目的之一是提供了一种利用Fmoc
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Cl作为氨基保护试剂对天青C进行提纯的提纯方法，包括以下步骤：将低纯度的天青C与碳酸钠、二恶烷配成混合液；向所述混合液中加入芴甲氧羰酰氯，反应得粘稠产物；粘稠产物溶于有机溶剂，滤去不溶性杂质，干燥，得天青C的中间体(Fmoc)2
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Azure C；中间体(Fmoc)2
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Azure C溶解于DMF，加入二乙胺反应，加入乙醚，析出黑色固体，干燥，得高纯度的天青C。
[0037]进一步的，所述混合液在冷却至10℃后加入芴甲氧羰酰氯。
[0038]进一步的，加入芴甲氧羰酰氯，先在冰水浴下反应，再转入室温反应。
[0039]进一步的，将所述粘稠产物溶于二氯甲烷。
[0040]进一步的，中间体(Fmoc)2
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Azure C溶解于DMF，冰水浴下加入二乙胺，冰水浴下反应。
[0041]进一步的，称取碳酸钠，在水中搅拌溶解，再加入二恶烷和低纯度的Azure C，冰水浴冷却至10℃，分批加入芴甲氧羰酰氯，冰水浴下反应，再转入室温反应，生产粘稠产物；倾去上清液，粘稠产物用二氯甲烷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种电子媒介体的提纯方法，所述电子媒介体带有氨基，其特征在于，包括以下步骤：称取低纯度的电子媒介体；氨基保护试剂与电子媒介体反应，得氨基保护的电子媒介体，氨基保护的电子媒介体溶于有机溶剂，经提取得高纯度的氨基保护的电子媒介体；所述高纯度的氨基保护的电子媒介体与脱保护剂反应，氨基脱保护，得高纯度的电子媒介体。2.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述电子媒介体选自天青C。3.根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述氨基保护试剂选自芴甲氧羰酰氯、二碳酸二叔丁酯、三苯基氯甲烷、氯甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆晓峰，徐俊杰，
申请(专利权)人：英科隆生物技术杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：