包含可检测部分的缀合物制造技术

本发明专利技术公开了可检测部分和包含一个或多个可检测部分的可检测缀合物。在一些实施方案中，所公开的可检测部分具有窄波长并且适用于多重分析。还公开了使用本文所述的任何可检测缀合物和/或可检测部分标记生物样本内的一个或多个靶标的方法。或多个靶标的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含可检测部分的缀合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年8月28日提交的美国临时专利申请第63/071,518号的权益，该申请的公开内容全文通过引用并入本文。


[0003]本公开涉及包含可检测部分的缀合物，诸如用于检测生物学样品内的一个或多个靶标的缀合物。

技术介绍

[0004]免疫组织化学(IHC)是指使用对特定抗原具有特异性的抗体检测、定位和/或定量生物学样品中的抗原(例如蛋白质)的方法。IHC具有准确鉴定组织样品中特定蛋白质的位点的实质性优点。这也是一种检查组织本身的有效的方法。原位杂交(ISH)是指检测、定位和定量核酸的方法。IHC和ISH均可用于各种生物学样品，诸如组织(例如，新鲜冷冻、福尔马林固定、石蜡包埋)和细胞学样品。无论靶标是核酸还是抗原，均可使用各种标记物(例如，发色、荧光、发光、放射标记)来检测靶标的识别。为了在临床环境中可靠地检测、定位和定量靶标，期望扩增识别事件，因为可靠地检测低丰度细胞标志物的能力对于诊断用途变得越来越重要。例如，响应于单个抗原检测事件，在标志物位点沉积数百个或数千个标记物分子，通过扩增增强了检测识别事件的能力。
[0005]扩增通常伴随有不良事件，诸如随着背景信号的增加，非特异性信号变得明显。增加的背景信号将掩盖可能与较低但有临床意义的表达相关联的微弱信号，从而干扰临床分析。因此，虽然扩增识别事件是可取的，但非常期望具有不增加背景信号的扩增方法。一种此类方法是酪酰胺信号放大(TSA)，该方法也称为催化报告沉积(CARD)。美国专利第5,583,001号公开了一种使用分析物依赖性酶活化系统检测和/或定量分析物的方法，该系统依赖催化报告沉积来放大可检测标记物信号。通过使带标记的苯酚分子与酶反应来增强CARD或TSA方法中酶的催化作用。利用TSA的现代方法有效地增加了从IHC和ISH测定中获得的信号，同时不产生显著的背景信号放大(参见例如美国申请公开第2012/0171668号，其有关与酪酰胺扩增试剂的公开内容据此通过引用全文并入本文)。用于这些扩增方法的试剂正被应用于临床上重要的靶标，以提供先前无法实现的稳定的诊断能力(VENTANA OptiView扩增试剂盒，Ventana Medical Systems，Tucson AZ，目录号760
‑
099)。
[0006]TSA利用辣根过氧化物酶(HRP)与酪酰胺之间的反应。在H2O2存在下，酪酰胺转化为高反应性和短寿命的自由基中间体，该自由基中间体优先与蛋白质上的富电子氨基酸残基反应。然后可通过各种显色可视化技术和/或荧光显微镜检测共价结合的可检测标记物。在固相免疫测定(诸如IHC和ISH)中，其中空间和形态学背景受到高度重视，自由基中间体的短寿命导致酪酰胺与靠近生成位点的组织上的蛋白质共价结合，产生离散的特异性信号。
[0007]共同在审的名称为“Quinone Methide Analog Signal Amplification”(国际申请日为2015年2月20日)的申请PCT/EP2015/053556描述了一种替代技术(
″
QMSA
″
)，其像TSA
一样，可用于在不增加背景信号的情况下增加信号放大。事实上，PCT/EP2015/053556描述了新颖的醌甲基化物类似物前体以及使用这些醌甲基化物类似物前体检测生物学样品中的一个或多个靶标的方法。其中，检测方法被描述为包括以下步骤：使样品与检测探针接触，然后使样品与包含酶的标记缀合物接触。该酶与包含可检测标记物的醌甲基化物类似物前体相互作用，形成反应性醌甲基化物类似物，其与生物学样品中的靶标近侧结合或直接结合在靶标上。然后检测可检测标记物。

技术实现思路

[0008]本公开的第一方面是一种具有式(I)的化合物：
[0009][Z]‑
[Q]m
‑
[W]ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(I)，
[0010]其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为可检测部分，并且Z为“组织反应性部分”或能够参与“点击化学”反应的部分。在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)(各自如本文所述)中任一者的部分。
[0011]在一些实施例中，W为具有式(IIA)的部分：
[0012][0013]其中各R
e
独立地为
‑
OH、
‑
O
‑
烷基或
‑
N(R
x
)(R
y
)，其中R
x
和R
y
独立地为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团，或其中R
x
与R
y
一起形成3元、4元或5元环状环，该3元、4元或5元环状环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代；
[0014]R
g
为
‑
H、
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；并且
[0015]a为0或1至4范围内的整数。
[0016]在一些实施例中，a为0。
[0017]在一些实施例中，当R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)时，则R
x
和R
y
中的至少一者包含C1‑
C4烷基基团，该烷基基团包含卤素(例如氟)原子。
[0018]在一些实施例中，如果R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)并且R
x
和R
y
中的每一个为
‑
CH2‑
CH2‑
，则式(IIA)化合物进一步包含：(i)除H之外的第二R
e
基团；或(ii)除H之外的R
g
基团。
[0019]在一些实施例中，当R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)并且R
x
和R
y
形成包括氮的杂环状环时，则该杂环状环进一步包含取代，诸如卤素取代。在一些实施例中，当R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)并且R
x
和R
y
形成包含氮的杂环时，则式(IIA)化合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有式(I)的化合物：[Z]_[Q]
m
‑
[W]
ꢀꢀꢀꢀ
(I)，其中Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；并且W具有式(IIA)：其中各R
e
独立地为
‑
OH、
‑
O
‑
烷基或
‑
N(R
x
)(R
y
)，其中R
x
和R
y
独立地为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团，或其中R
x
与R
y
一起形成3元、4元或5元环状环，所述3元、4元或5元环状环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代；R
g
为
‑
H、
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；并且a为0或1至4范围内的整数。2.根据权利要求1所述的化合物，其中W具有式(IIB)：其中R
e
为
‑
OH、
‑
O
‑
烷基或
‑
N(R
x
)(R
y
)，其中R
x
和R
y
独立地为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团，或其中R
x
与R
y
一起形成3元、4元或5元环状环，所述3元、4元或5元环状环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代；R
g
为
‑
H、
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；并且a为0或1至4范围内的整数。3.根据权利要求2所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(H)(Me)。4.根据权利要求2所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(H)CF3。5.根据权利要求2所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)，并且其中R
x
与R
y
一起形成3元、4元或5元环状环，所述3元、4元或5元环状环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代。6.根据权利要求2所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)，并且其中R
x
与R
y
一起形成4元环
状环，所述4元环状环未被取代。7.根据权利要求2所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(R
x
)(R
y
)，并且其中R
x
与R
y
一起形成4元环状环，所述4元环状环被卤素取代。8.根据权利要求1所述的化合物，其中W具有式(IIC)：其中R
e
为
‑
OH、
‑
O
‑
烷基或
‑
N(R
x
)(R
y
)，其中R
x
和R
y
独立地为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团，或其中R
x
与R
y
一起形成3元、4元或5元环状环，所述3元、4元或5元环状环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代；并且a为0或1至6范围内的整数。9.根据权利要求1所述的化合物，其中a为0。10.根据权利要求1所述的化合物，其中W选自由以下项组成的组：
11.一种具有式(I)的化合物：[Z]
‑
[Q]
m
‑
[W]
ꢀꢀꢀꢀ
(I)，
其中Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；并且W具有式(IIIA)：其中各R
f
独立地为
‑
N(R
x
)(R
y
)，其中R
x
和R
y
独立地为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；或其中任意两个R
f
基团可一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和环；R
g
为
‑
H、
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；U1为O、N或S；并且a为0或1至6范围内的整数。12.根据权利要求11所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(H)(Me)。13.根据权利要求11所述的化合物，其中R
e
为
‑
N(H)CF3。14.根据权利要求11所述的化合物，其中U1为N；并且R
f
为
‑
N(H)(Me)、
‑
NH2、
‑
N(H)CF3、
‑
N(H)
‑
CH2‑
F、
‑
N(H)
‑
CH2‑
CH2‑
F、
‑
N(H)
‑
CH(F)(F)、
‑
N(Me)CF3、
‑
N(Et)CF3或
‑
N(H)(Ipr)。15.根据权利要求14所述的化合物，其中a为0。16.根据权利要求11所述的化合物，其中U1为N。17.根据权利要求11所述的化合物，其中W具有式(IIIB)：
其中R
f
为
‑
N(R
x
)(R
y
)，其中R
x
和R
y
独立地为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
g
为
‑
H、
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；U1为O、N或S；并且a为0或1至6范围内的整数。18.根据权利要求17所述的化合物，其中R
x
和R
y
中的至少一者为H。19.根据权利要求17所述的化合物，其中a为0。20.根据权利要求11所述的化合物，其中W为：21.一种具有式(I)的化合物：[Z]
‑
[Q]
m
‑
[W]
ꢀꢀꢀꢀ
(I)，其中Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；并且W具有式(IVA)：其中U1为O、N或S；U2为O或S；R
g
为
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；R
i
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；或其中R
g
与R
i
一起形成5元、6元或7元环状或芳族环，所述5元、6元或7元环状或芳族环
可任选地被卤素、C1‑
C4烷基基团取代；R
h
为H或支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
x
为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
z
为H或任选地被一个或多个卤素原子或被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；或其中R
x
与R
z
一起形成3元、4元或5元环，所述3元、4元或5元环可任选地被取代；或其中R
h
与R
x
或R
z
中的一者一起形成5元、6元或7元环状或芳族环，所述5元、6元或7元环状或芳族环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代；R
j
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；或其中R
j
与R
h
形成5元或6元环，所述5元或6元环任选地被一个或多个C1‑
C4烷基基团取代；并且a为0或1至6范围内的整数。22.根据权利要求21所述的化合物，其中a为0。23.根据权利要求21所述的化合物，其中R
x
为C1‑
C2烷基基团。24.根据权利要求21所述的化合物，其中U2为S。25.根据权利要求21所述的化合物，其中U1为N。26.根据权利要求21所述的化合物，U2为O并且R
z
为被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的非支链C1‑
C4烷基基团。27.根据权利要求21所述的化合物，U1为N，U2为O，并且R
z
为被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的非支链C1‑
C4烷基基团。28.根据权利要求21所述的化合物，其中U2为S，并且R
z
为被一个或多个卤素原子取代的非支链C1‑
C4烷基基团。29.根据权利要求21所述的化合物，其中U1为N，U2为O，并且R
z
为被一个或多个卤素原子取代的非支链C1‑
C4烷基基团。30.根据权利要求21所述的化合物，其中U1为N，U2为S，并且R
z
为被一个或多个卤素原子取代的非支链C1‑
C4烷基基团。31.根据权利要求21所述的化合物，其中W具有式(IVC)或(IVD)中的任一者：
R
g
为
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；R
i
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；或其中R
g
与R
i
一起形成5元、6元或7元环，所述5元、6元或7元环可任选地被卤素、C1‑
C4烷基基团取代；R
h
为H或支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
x
为H或任选地被一个或多个卤素原子取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
z
为H或任选地被一个或多个卤素原子或被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；或其中R
h
与R
x
或R
z
中的一者一起形成5元、6元或7元环状或芳族环，所述5元、6元或7元环状或芳族环可任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个C1‑
C2烷基基团取代；R
j
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；或其中R
j
与R
h
形成5元或6元环，所述5元或6元环任选地被一个或多个C1‑
C4烷基基团取代；并且a为0或1至6范围内的整数。32.根据权利要求21所述的化合物，其中W具有式(IVE)：其中U1为O、N或S；U2为O或S；R
g
为
‑
CH3或
‑
CH2‑
CH3；R
i
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；或其中R
g
与R
i
一起形成5元、6元或7元环，所述5元、6元或7元环可任选地被卤素、C1‑
C4烷
基基团取代；R
z
为H或任选地被一个或多个卤素原子或被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
j
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；a为0或1至6范围内的整数。33.根据权利要求32所述的化合物，其中R
i
与R
g
一起形成6元环状环，并且R
z
为C1‑
C4烷基基团。34.根据权利要求32所述的化合物，其中U2为O，R
i
与R
g
一起形成6元环状环，并且R
z
为C1‑
C4烷基基团。35.根据权利要求32所述的化合物，其中U2为S，R
i
和R
g
一起形成6元环状环，并且R
z
为C1‑
C4烷基基团。36.根据权利要求32所述的化合物，其中R
i
与R
g
一起形成6元环状环，U2为O，并且R
z
为被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的非支链C1‑
C4烷基基团。37.根据权利要求21所述的化合物，其中W具有式(IVG)和(IVH)中的任一者：其中U1为O、N或S；U2为O或S；R
z
为H或任选地被一个或多个卤素原子或被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的支链或非支链C1‑
C4烷基基团；R
j
为H或支链或非支链C1‑
C6烷基基团；a为0或1至6范围内的整数。38.根据权利要求37所述的化合物，其中R
z
为C1‑
C4烷基基团。
39.根据权利要求37所述的化合物，其中R
z
为非支链C1‑
C4烷基基团。40.根据权利要求37所述的化合物，其中R
z
为被
‑
S(O)(O)
‑
O
‑
基团取代的非支链C1‑
C3烷基基团。41.根据权利要求21所述的化合物，其中W选自由以下项组成的组：
42.一种具有式(I)的化合物：[Z]
‑
[Q]
m
‑
[W]
ꢀꢀꢀꢀ
(I)，其中Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：文塔纳医疗系统公司，
类型：发明
国别省市：