来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备抑菌剂中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了来源于鳜鱼的半乳糖凝集素‑8在制备抑菌剂中的应用，所述的半乳糖凝集素‑8的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，申请人发现鳜鱼半乳糖凝集素‑8（ScGal8）本身对典型的水产动物病原菌具有重要的抑菌活性，通过抑菌实验发现半乳糖凝集素‑8对杀鲑气单胞菌（

【技术实现步骤摘要】
来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备抑菌剂中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备抑菌剂中的应用。
技术介绍
水产养殖是人类重要的食物来源，随着集约化，规模化养殖的发展，水产病害频发成了困扰水产养殖业发展的瓶颈之一。杀鲑气单胞菌是一种条件致病菌，主要感染冷水性养殖鱼类，导致鲑鳟以及龟鳖等经济鱼类发生疖疮病或溃疡病。无乳链球菌引发罗非鱼产生链球菌病制约了罗非鱼产业链的健康发展。迟缓爱德华氏菌能引起包括牙鲆，大菱鲆和等重要经济鱼类发生出血性败血症。柱状黄杆菌引发的细菌性烂鳃病是一种危害极广的全球性水产养殖病害，对草鱼，鳜鱼等重要经济鱼类的养殖造成了巨大的经济损失。传统养殖过程中，使用抗生素是最常见的治疗细菌病的方法，但是近年来由于抗生素的滥用，越来越多的病原微生物对传统抗生素产生了耐药性。所以，遵循“预防为主”的养殖病害防控理念，应用生物技术方法研制安全性更高，有利于预防细菌病原的抗菌蛋白药物具有较高的生产意义。凝集素(lectin)通过“蛋白—碳水化合物”作用在病原识别中发挥重要的功能。本研究中，从鳜鱼上克隆得到了一种半乳糖凝集素(galectin),半乳糖凝集素是研究的较为广泛的S-凝集素，主要通过非常保守的半乳糖识别域(carbohydrate-recognitiondomains)来结合病原体和细胞表面的半乳糖苷，是生物体发挥免疫作用的重要分子之一。在当病原侵入机体后，凝集素首先识别病原体，接着激活免疫细胞的增殖和分化，最后病原体被清理出机体。截至目前，在人类中已经发现了15种半乳糖凝集素以及各种各样的功能，而鱼类中，半乳糖凝集素的报道较为有限。检索发现，来自半滑舌鳎的一种凝集素的抗菌应用专利申请(申请号为2015100784920)。半滑舌鳎属于蝶形目，进化地位比较原始，鳜鱼属于鲈形目，两者之间的亲缘关系较远，无参考价值。目前，关于鳜鱼半乳糖凝集素直接抑制细菌的功能尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8，所述的半乳糖凝集素-8的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示。本专利技术的另一个目的在于提供了一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备水产养殖动物细菌抑菌剂中的应用，所述的半乳糖凝集素-8的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示。本专利技术的最后一个目的在于提供了一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备由水产细菌感染导致的疾病的药物中的应用，所述的半乳糖凝集素-8的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示。为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备细菌抑菌剂中的应用，所述的细菌包括但不限于：无乳链球菌(S.agalactiae)或柱状黄杆菌(F.columnare)，所述的半乳糖凝集素-8的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示。一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8在制备由细菌感染导致水产动物疾病的药物中的应用，所述的水产细菌包括但不限于无乳链球菌(S.agalactiae)或柱状黄杆菌(F.columnare)，所述的半乳糖凝集素-8的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示。以编码SEQIDNO.1所示序列的核苷酸，来制备半乳糖凝集素-8，从而进行上述应用，也属于本专利技术的保护范围。本专利技术所述的半乳糖凝集素-8适用对象包括但不限于由水产细菌感染发病的鳜鱼，牙鲆，大菱鲆，鲑鳟鱼，龟鳖等。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：在本专利技术中，申请人首次在鳜鱼上克隆得到了半乳糖凝集素-8，这个分子在罗非鱼(Oreochromisniloticus)(Unajaketal.,2015)和石斑鱼(Sebastesschlegelii)(Madusankaetal.,2019)中被报道具有一些免疫学功能，本专利技术首次发现半乳糖凝集素-8具备直接抑菌功能。申请人发现鳜鱼半乳糖凝集素-8(ScGal8)本身具有重要的抑菌活性，通过抑菌实验发现半乳糖凝集素-8对柱状黄杆菌(F.columnare)具有良好的抑制效果，因此鱼类的半乳糖凝集素-8在治疗水产动物由柱状黄杆菌引起的烂鳃病治疗中具有良好的应用前景。半乳糖凝集素-8在所有检测的组织中均可以表达，且碳水化合物结合域具有很高的保守性，功能多样性优势明显，鳜鱼半乳糖凝集素-8可以较广泛的凝集细菌活性，因此来自同一种鱼类的半乳糖凝集素抑菌产品可能对不同鱼类细菌病原体具有抑制作用。半乳糖凝集素-8没有信号肽，但是我们的研究发现其属于分泌型的蛋白，其在原核表达体系中可大量分布在上清中，这对大规模制备生产抗菌药物意义重大。半乳糖凝集素-8的热稳定性较好，凝集素的免疫学功能和抗菌功能实验均在室温条件下进行，常温条件下凝集素不易失活，针对鱼类用药的特殊性，开发饲用药物具有较好的实用前景。半乳糖凝集素-8参与多种机体免疫过程，可以开发水产养殖饲用细菌病预防药物品种，还可以直接抑制细菌的生长，在生产中起到了“预防为主，防治结合”的作用。附图说明图1为鳜鱼半乳糖凝集素-8对包括杀鲑气单胞菌ATCC27013、无乳链球菌XQ-1、迟缓爱德华氏菌PPD130/91和柱状黄杆菌G4在平板上生长影响示意图。图2为杀鲑气单胞菌ATCC27013、无乳链球菌XQ-1、迟缓爱德华氏菌PPD130/91和柱状黄杆菌G4四种细菌按照表2的实验设计在不同处理组中的平板菌落统计图：其中，A为不同的处理组中杀鲑气单胞菌ATCC27013的菌落数量统计B为不同的处理组中无乳链球菌XQ-1的菌落数量统计；C为不同的处理组中迟缓爱德华氏菌PPD130-91的菌落数量统计；D为不同的处理组中柱状黄杆菌G4的菌落数量统计。图3为不同浓度的鳜鱼半乳糖凝集素-8的抑菌作用示意图。具体实施方式下面我们将通过下面实验来证明鳜鱼凝集素-8(ScGal8)的抗菌功能应用。为了更大范围内验证和使用推广，本专利技术中使用的方法如无特别说明，均为微生物研究中的常规方法。本专利技术以原核表达的方式制备了鳜鱼半乳糖凝集素-8重组蛋白，以本领域的常规方案，例如合成，其他原核表达或真核表达获得的蛋白，也可完成本专利技术。实施例1：鳜鱼半乳糖凝集素-8重组蛋白(rScGal8)的制备纯化：通过传统的Trizol(Ambion)提取法从鳜鱼的头肾组织中获得了RNA样品，使用常用的反转录试剂盒(ThermoScientific)反转获得cDNA，以上述获得的cDNA样品为模板，正向引物为:Sc-galectin8-F>CTGCTCCAAAATGTCGATTTCAAAC，反向引物为Sc-galectin8-R1>ATGTTAAAGGATCTTGACGTCCAG。使用诺唯赞公司生产的高保真DNA聚合酶进行PCR反应获得了鳜鱼半乳糖凝集素-8的ORF全长序列(SEQIDNO.2所示)。经过上海生工生物测序无误后，设计含限制性酶切位点的引物，在ScGal8的OR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8或编码半乳糖凝集素-8的核苷酸序列在制备细菌抑菌剂中的应用，所述的细菌包括但不限于：无乳链球菌（

【技术特征摘要】
1.一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8或编码半乳糖凝集素-8的核苷酸序列在制备细菌抑菌剂中的应用，所述的细菌包括但不限于：无乳链球菌（S.agalactiae）或柱状黄杆菌，所述的半乳糖凝集素-8的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示。


2.一种来源于鳜鱼的半乳糖凝集素-8或编码半乳糖凝集素-8的核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂品，梁志刚，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42