AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH信号轴异常活化相关疾病治疗药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH信号轴异常活化相关疾病治疗药物中的用途，尤其是在制备AMH中和剂或拮抗剂中的用途。通过稳定性实验，本发明专利技术中的AMHR2融合蛋白半衰期长，体内稳定性优异，且与AMH结合力强，具备一定的成药性。通过细胞实验以及动物模型实验，本发明专利技术提供的AMHR2重组蛋白或AMHR2融合蛋白在体内外均能有效拮抗或中和AMH，并能进一步阻断AMH信号轴，能够有效预防和治疗AMH信号轴异常活化引起的病症。

The use of amhr2 recombinant protein or fusion protein in the preparation of drugs for the treatment of diseases related to the abnormal activation of AMH signal axis

【技术实现步骤摘要】
AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH信号轴异常活化相关疾病治疗药物中的用途
本专利技术涉及生物医药工程
，具体涉及重组AMHR2及AMHR2融合蛋白、以其作为活性组分的药物组合物和其医药用途，尤其是用于AMH信号轴异常活化相关疾病的用途。
技术介绍
抗苗勒管激素(Anti-Müllerianhormone,AMH)，亦称为苗勒管-抑制物质(MüllerianInhibitingSubstance,MIS)，是一种TGF-β家族糖蛋白。AMH受体包括I型受体和II型受体的受体复合物，其中II型受体即AMHR2，多个I型受体参与信号的传导。AMH在人雄性胚胎中诱导苗勒管退化，但在生殖年龄的女性中表达，不随周期或妊娠而波动，随卵母细胞数量和质量二者降低而逐渐降低，表明AMH可用作卵巢生理学的标记物。参见文献例如[Zecetal，(2011)BiochemiaMedica21(3)：219-30]。在睾丸中，AMH通过抑制细胞色素P45017α-羟化酶/C17-20裂解酶和芳香化酶的转录来调节Leydig细胞雄激素的生成，染色体19p13位置的AMH突变或染色体12q13位置的AMHR2突变均可以引起男性常染色体隐性遗传疾病：持续性苗勒氏管综合征(PersistentMüllerianductsyndrom，PMDS)。对于女性而言，出生后AMH是由颗粒细胞产生并逐渐升高，在生育期达到高峰，与生育力的峰值吻合，然后在功能性绝经时逐渐下降。在卵巢中，AMH抑制原始卵泡募集、第二次减数分裂、颗粒细胞分裂和孕激素产生。正由于血液AMH水平与生育力的吻合性，其作为生物标志物已广泛应用于生育力的诊断。近年来的一些报道显示，AMH参与多种生理过程，如怀孕，排卵，更年期和生育力保留等。它还可能参与一些特殊疾病的病理生理过程，如多囊卵巢综合征(polycysticovariansyndrome，PCOS)和癌症等，但由于这些疾病的复杂性，AMH信号轴在其中的地位未明。目前，尚未有AMH信号轴的拮抗剂功能的新型药物问世，阻碍了进一步的研究。因此，本专利技术人创新性的认为，利用通用的蛋白质工程方法，重组AMHR2的胞外结构域获得的重组蛋白，以及再进一步制备AMHR2获得的融合蛋白，也许可以发挥AMH拮抗剂的效应。专利文献WO2015114142A1公开了一种类似的AMHR融合蛋白、其制备方法及其在检测血浆AMH水平中的用途。但并未公开或提示其拮抗/中和AMH作用，事实上，AMH和AMHR2介导的信号传导是由多个受体(如多个ALK受体)、多个接头蛋白参与的，重组AMHR2及AMHR2融合蛋白能否发挥拮抗效果是未知的，即重组蛋白和融合蛋白能否阻断AMH信号轴、能否拮抗/中和由AMH介导的生物学效应是未知的。进一步的，重组蛋白和融合蛋白能否用于机理尚未明确的疾病治疗也是完全未知的，需要技术人员进行大量创造性的工作才能得知。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，依托上述研究背景，研究AMHR2重组蛋白或AMHR2融合蛋白能否用于AMH的拮抗或中和、AMH异常相关疾病的治疗，并对发挥所述用途的AMHR2重组蛋白或AMHR2融合蛋白的具体结构、制备方法和用途进行了限定性描述，即提供了AMHR2重组蛋白或AMHR2融合蛋白、其制备方法和用途。本专利技术的第一方面，对AMHR2重组蛋白或AMHR2融合蛋白的多肽链结构进行描述。AMHR2重组蛋白的多肽链结构通式为Z1，AMHR2融合蛋白的多肽链结构通式为Z1-Z2，其中Z1为AMHR2胞外结构域或其功能变体或片段，Z2为二聚化结构域或其功能变体或片段。所述AMHR2在国际数据库编码为：EntrezGene:269；UniProtKB:Q16671。Z2二聚化结构域包括免疫球蛋白重链恒定区。在具体的变化中，二聚化结构域Z2是IgG的Fc片段，诸如人免疫球蛋白γ1Fc片段。此外，二聚化结构域Z2还可以包含有肽接头，该肽接头由15-32个氨基酸残基组成，其中这些残基中的1-8个(例如，2个)是半胱氨酸残基。在具体变化中，Z2包含免疫球蛋白铰链区或其变体。例如，在一个具体实施方案中，Z2包含免疫球蛋白铰链变体(例如，人免疫球蛋白γ1铰链变体)，其中Fc片段的220相对应的半胱氨酸残基被丝氨酸替代。根据上述二聚化结构域Z2使用的特别合适的肽接头包括这样的肽接头：所述接头包含多个甘氨酸残基，且任选地包含至少一个丝氨酸残基。在本专利技术的某些实施方案中，二聚化结构域Z2可以是人免疫球蛋白Fc片段的活性变体，如采用IgG2、IgG3或IgG4的Fc结构域。在某些实施方案中，可以进一步采用Fc的突变体以降低免疫球蛋白诸如ADCC、补体结合等生物活性，如LALA-PG突变体、L235E；E318A；K320A；K322A突变体等。在某些实施方案中，还包括可以减少新生儿Fc受体结合的IgG突变体，如H433K/N434F突变体、I253A/H310A/H435A突变体、M428L/N434S突变体、M252Y/S254T/T256E突变体等，参见Grevys,Aetal.TheJournalofImmunology194.11(2015):5497-5508.在本专利技术的一些优选实施例中，Z1的氨基酸序列与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。在本专利技术的一些优选实施例中，Z1-Z2的氨基酸序列与SEQIDNO.2所示的氨基酸序列具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。在本专利技术的一些优选实施例中，Z1-Z2的氨基酸序列与SEQIDNO.3所示的氨基酸序列具有至少60％、优选至少65％、优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％和最优选至少99％同一性。本专利技术的第二方面，提供了编码上述多肽链的多核苷酸、运载该核苷酸的载体以及包含这种载体的细胞。本专利技术提供的表达载体包含下述可操作地连接的元件：转录启动子、编码上述多肽的DNA区和转录终止子。通过培养包含载体的细胞，用于生产如上公开的多肽，包括：(i)培养包含如上公开的表达载体的细胞，其中细胞表达由所述DNA区段编码的多肽，并生产编码的多肽；(ii)回收可溶性多肽。本专利技术的第三方面，提供了一种AMH中和剂或拮抗剂，包括活性成分以及药学上可接受的药物载体，所述活性成分包括上述的AMHR2重组蛋白或融合蛋白、编码该AMHR2重组蛋白或融合蛋白的核苷酸或运载有AMHR2重组蛋白或融合蛋白或核苷酸的载体。该药物组合物以上述多肽为主要或唯一活性成分，辅料可以保证本专利技术公开的多肽氨基酸核心序列的构像完整性，同时还要保护蛋白质的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH信号轴异常活化相关疾病治疗药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH信号轴异常活化相关疾病治疗药物中的用途。


2.根据权利要求1所述的AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH信号轴异常活化相关疾病治疗药物中的用途，其特征在于：
其中，所述AMH信号轴异常活化相关疾病包括信号轴异常活化的多囊卵巢综合征、内分泌紊乱、不孕症或良恶性肿瘤；所述治疗药物为对AMH起中和或拮抗效应的药物。


3.AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH中和剂或拮抗剂中的用途。


4.根据权利要求3所述的AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH中和剂或拮抗剂中的用途，其特征在于：
其中，所述中和剂或拮抗剂为降低AMH水平或阻断AMH信号轴的药物。


5.根据权利要求3所述的AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH中和剂或拮抗剂中的用途，其特征在于：
其中，所述中和剂或拮抗剂为中和或拮抗AMH介导的生物学效应的药物。


6.根据权利要求5所述的AMHR2重组蛋白或融合蛋白在制备AMH中和剂或拮抗剂中的用途，其特征在于：
其中，所述生物学效应包括AMH介导的细胞生长调控效应；AMH介导的生殖激素紊乱、生殖周期紊乱、卵巢组织破坏或生育能力...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅文燕，胡适，丁敏，
申请(专利权)人：沣潮医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31