用于内毒素清除的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于内毒素清除的嵌合抗原受体多肽，具有(a)细胞外结构域，包括一个或多个内毒素特异性结合区；(b)跨膜结构域；(c)吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域的至少一个拷贝。其中，内毒素特异性结合区包括：(1)模式识别受体的细胞外结构域或其功能变体或片段；(2)内毒素特异性抗体或其功能片段。进一步，本发明专利技术还提供编码多肽的多核苷酸、基因载体、携带用于内毒素清除的嵌合抗原受体的重组细胞和组合物。本发明专利技术提供的针对内毒素的嵌合多肽，其胞外结构域能够特异性识别内毒素，同时其胞内信号结构域能够激活介导细胞吞噬清除内毒素，且这一过程并不介导细胞因子的释放不介导组织损伤。

【技术实现步骤摘要】
用于内毒素清除的嵌合抗原受体及其应用
本专利技术涉及一种用于内毒素清除的嵌合抗原受体(ChimericAntigenReceptor，CAR)设计方案和用途，该嵌合抗原受体CAR特异性的结合病原菌内毒素，同时激活其胞内的吞噬细胞特异性吞噬信号，介导重组细胞吞噬清除内毒素。
技术介绍
内毒素指革兰氏阴性细菌破裂后释放的毒素因子，是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。在细菌未破裂时并不从病原微生物中释放，只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。内毒素对宿主是有毒性的，在患者遭受感染时，由于抗生素、免疫细胞等作用，造成菌体大量的死亡破坏，内毒素大量进入血液，持续激活免疫细胞，引起患者免疫系统紊乱和多种病理生理紊乱，因此，领域内亟需要能特异性清除的治疗方法。
技术实现思路
本专利技术是为解决上述技术问题进行的，对用于内毒素清除的嵌合抗原受体以及应用进行探索。本专利技术的第一方面，公开了一种嵌合多肽，其包括：(a)细胞外结构域，其包括一个或多个内毒素特异性结合区；(b)跨膜结构域；(c)噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域的至少一个拷贝。在某些情况下，该嵌合多肽还包括信号肽，所述信号肽衍生自跨膜结构域的信号肽，可通过基因工程方法连接在细胞外结构域的上游，例如多肽链的N端。细胞外结构域中，内毒素特异性结合区包括：(1)模式识别受体的细胞外结构域或其功能变体或片段；(2)内毒素特异性抗体或其功能片段。所述抗体或其功能片段包括抗原结合片段(Fab)，单链可变片段(scFv)、纳米抗体、VH结构域、VL结构域、单域抗体(singledomainantibody，sdAb)、VNAR结构域和VHH结构域、双特异性抗体、双体(diabody)或上述结构的功能性片段。术语“模式识别受体”是免疫学概念，模式识别受体(patternrecognitionreceptor，PRR)是一类主要表达于固有免疫细胞表面、非克隆性分布、可识别一种或多种病原体相关分子模式(pathogen-associatedmolecularpattern，PAMP)。是固有免疫中免疫受体的代表，由有限数量的胚系基因编码，进化上十分保守，也表明此类受体对生物体的生存极为重要。其与PAMP的相互识别和作用是启动固有免疫应答的关键。任何模式识别受体均适用于本专利技术所述的嵌合多肽的结构方案。在本专利技术的某些优选的实施方案中，模式识别受体包括TLR1(GeneID:7096)，TLR2(GeneID:7097)，TLR3(GeneID:7098)，TLR4(GeneID:7099)，TLR5(GeneID:7100)，TLR6(GeneID:10333)，TLR7(GeneID:51284)，TLR8(GeneID:51311)，TLR9(GeneID:54106)，TLR10(GeneID:81793)，Dectin-1(GeneID:64581)，Dectin-2(GeneID:93978)，Mincle(GeneID:26253)，CLEC2(GeneID:51266)，CLEC5A(GeneID:23601)，CLEC12A(GeneID:160364)，DCIR(GeneID:50856)，CLECSF8(GeneID:338339)，CD14(GeneID:929)，MD-2(GeneID:23643)，和LBP(GeneID:3929)。在本专利技术的某些优选的实施方案中，内毒素特异性抗体包括WN1222-5、S25-39、Ab-52、S55-3、S1-15或S25-23。跨膜结构域中，跨膜结构域源自CD8、TYRO3、AXL、MERTK、ADGRB1、ADGRB3、HAVCR1、TIMD4、Stabilin-1、Stabilin-2、Integrinsubunitαv、Integrinsubunitβ3、Integrinsubunitβ5、SCARF1、AGER、CD300LF、CD36、LRP1、MRC1、或TREM2的茎(stalk)和/或跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域可通过基因工程的方法连接在胞外结构域的下游和胞内信号结构域上游。信号肽包括衍生自CD8、TYRO3、AXL、MERTK、ADGRB1、ADGRB3、HAVCR1、TIMD4、Stabilin-1、Stabilin-2、Integrinsubunitαv、Integrinsubunitβ3、Integrinsubunitβ5、SCARF1、AGER、CD300LF、CD36、LRP1、MRC1、和TREM2的信号肽。细胞内结构域中，吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域指以单核细胞为代表的的吞噬细胞特有的吞噬信号受体，该类受体天然状况下介导吞噬细胞发生吞噬事件。在一些实施方案中，吞噬细胞特异性吞噬信号受体包括TAM家族受体受体酪氨酸激酶(TAMfamilyofreceptortyrosinekinases)、磷脂酰丝氨酸受体家族(Phosphatidylserinereceptors)、低密度脂蛋白受体相关蛋白家族(Prolow-densitylipoproteinreceptor-relatedproteins)、甘露糖受体家族(mannosereceptors)、清道夫受体家族(scavengerreceptors)、TREM受体家族(Triggeringreceptorexpressedonmyeloidcells)。优选包括TYRO3(Uniport：Q06418)、AXL(Uniport：P30530)、MERTK(Uniport：Q12866)、ADGRB1(Uniport：O14514)、ADGRB3(Uniport：O60242)、HAVCR1(Uniport：Q96D42)、TIMD4(Uniport：Q96H15)、Stabilin-1(Uniport：Q9NY15)、Stabilin-2(Uniport：Q8WWQ8)、Integrinsubunitαv(Uniport：P06756)、Integrinsubunitβ3(Uniport：P05106)Integrinsubunitβ5(Uniport：P18084)、SCARF1(Uniport：Q14162)、AGER(Uniport：Q15109)、CD300LF(Uniport：Q8TDQ1)、CD36(Uniport：P16671)、LRP1(Uniport：Q07954)、MRC1(Uniport：P22897)、和TREM2(Uniport：Q9NZC2)。吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域不含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(immunoreceptortyrosin-basedactivationmotifs,ITAMs)。最优选TYRO3(Uniport：Q06418)、AXL(Uniport：P30530)、MERTK(Uniport：Q12866)，该三个胞内信号结构域属于TAM受体家族，不含有ITAM基序。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于内毒素清除的嵌合抗原受体，其特征在于，具有：(a)细胞外结构域，包括一个或多个内毒素特异性结合区；(b)跨膜结构域；(c)吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域的至少一个拷贝，/n其中，所述内毒素特异性结合区包括：(1)模式识别受体的细胞外结构域或其功能变体或片段；(2)内毒素特异性抗体或其功能片段，/n所述吞噬细胞特异性吞噬信号受体包括：TAM家族受体酪氨酸激酶、磷脂酰丝氨酸受体家族、低密度脂蛋白受体相关蛋白家族、甘露糖受体家族、清道夫受体家族或TREM受体家族。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于内毒素清除的嵌合抗原受体，其特征在于，具有：(a)细胞外结构域，包括一个或多个内毒素特异性结合区；(b)跨膜结构域；(c)吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域的至少一个拷贝，
其中，所述内毒素特异性结合区包括：(1)模式识别受体的细胞外结构域或其功能变体或片段；(2)内毒素特异性抗体或其功能片段，
所述吞噬细胞特异性吞噬信号受体包括：TAM家族受体酪氨酸激酶、磷脂酰丝氨酸受体家族、低密度脂蛋白受体相关蛋白家族、甘露糖受体家族、清道夫受体家族或TREM受体家族。


2.根据权利要求1所述的用于内毒素清除的嵌合抗原受体，其特征在于：
其中，所述模式识别受体包括TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、Dectin-1、Dectin-2、Mincle、CLEC2、CLEC5A、CLEC12A、DCIR、CLECSF8、CD14、MD-2或LBP，
所述内毒素特异性抗体包括WN1222-5、S25-39、Ab-52、S55-3、S1-15或S25-23。


3.根据权利要求2所述的用于内毒素清除的嵌合抗原受体，其特征在于：
其中，所述跨膜结构域包括源自CD8、TYRO3、AXL、MERTK、ADGRB1、ADGRB3、HAVCR1、TIMD4、Stabilin-1、Stabilin-2、Integrinsubunitαv、Integrinsubunitβ3、Integrinsubunitβ5、SCARF1、AGER、CD300LF、CD36、LRP1、MRC1或TREM2的茎或跨膜结构域；
所述吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域不含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序。


4.根据权利要求3所述的用于内毒素清除的嵌合抗原受体，其特征在于：
其中，所述吞噬细胞特异性吞噬信号受体的细胞内信号结构域包括FCER1G、CD3、MEGF10、TYRO3、MERTK或AXL。


5.根据权利要求1所述的用于内毒素清除的嵌合抗原受体，其特征在于：
其中，所述嵌合抗原受体的结构选自如下任一情况：
(1)细胞外结构域来源于TLR4，细胞内信号结构域来源于MERTK，氨基酸序列如SEQIDNO.1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡适，傅文燕，
申请(专利权)人：沣潮医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31