TIGIT免疫粘附素在调控肿瘤免疫及调节血管生成产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药工程技术领域，公开了TIGIT免疫粘附素在调控肿瘤免疫及调节血管生成产品中的新用途，通过实验验证，TIGIT免疫粘附素能有效增强免疫细胞杀伤、识别肿瘤细胞；增强免疫细胞对肿瘤组织的生长抑制；改善肿瘤组织内免疫抑制信号，打破肿瘤免疫抑制微环境；同时还能改善肿瘤组织缺氧状况，增加血流供应，改变肿瘤生长环境，从两方面锤击肿瘤细胞。另一方面，TIGIT免疫黏附素可以刺激血管新生，增强新生组织愈合，为血管损伤性疾病的治疗提供了一定方向，扩大了TIGIT免疫粘附素的临床应用前景和范围。

【技术实现步骤摘要】
TIGIT免疫粘附素在调控肿瘤免疫及调节血管生成产品中的应用
本专利技术涉及生物医药工程
，具体涉及TIGIT免疫粘附素在调控肿瘤免疫、调节血管生成产品中的应用
技术介绍
TIGIT蛋白(UniProtKB编号：Q495A1)是脊髓灰质炎病毒受体(PVR)/Nectin家族的成员，它由细胞外免疫球蛋白可变区(IgV)结构域，1型跨膜结构域和具有经典免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和免疫球蛋白酪氨酸尾(ITT)基序的细胞内结构域组成，可以通过本领域技术人员熟悉的免疫球蛋白Fc融合技术构建成为TIGIT免疫粘附素。TIGIT蛋白用途广泛，申请人根据研究成果已经申请了两项专利申请：专利技术专利CN109206523A公开了TIGIT免疫粘附素的制备和其在自身免疫病中的用途；专利技术专利CN110669139A公开了TIGIT免疫粘附素在调节母胎免疫耐受方面的用途。肿瘤免疫循环指的是通过适当的方式发展免疫反应以杀死癌细胞的过程。简言之，树突状细胞从死亡的癌细胞中获取抗原，然后进入淋巴结激活T细胞，激活的T细胞离开淋巴结进入循环系统，穿过血管壁浸润到肿瘤微环境中，T细胞通过特异性受体识别并杀死肿瘤细胞，然后再继续循环。在肿瘤免疫的研究中，主要对TIGIT蛋白本身的研究较多，而对于TIGIT蛋白进一步进行基因工程化形成的TIGIT免疫粘附素研究较少。
技术实现思路
申请人在研究的过程中意外的发现，TIGIT免疫粘附素在增强免疫细胞杀伤肿瘤细胞、促进调节血管生成的应用方面具有意想不到的技术效果。本专利技术所述的TIGIT免疫粘附素，指包括TIGIT天然蛋白的具有结合其天然配体能力的结构域或TIGIT蛋白的保外结构域或其功能变体或片段，TIGIT黏附素在
技术介绍
文件中已经进行详述，是本领域技术人员熟知的构建方法，此处不再赘述。在本专利技术的一些实施方案中，本专利技术所述的TIGIT免疫粘附素Fc结构域还包含LALA-PG突变体，用以去除其Fc结构域所潜在的免疫球蛋白活性。本专利技术第一方面，提供了TIGIT免疫粘附素在制备增强免疫系统和免疫细胞清除肿瘤试剂或调节血管生成试剂中的用途。具体而言，本专利技术所述的TIGIT免疫粘附素用途包括：(1)增强免疫细胞杀伤肿瘤细胞、增强肿瘤组织内免疫细胞的浸润数量、增强免疫细胞对肿瘤细胞的识别、降低肿瘤组织内免疫抑制信号活性、降低免疫细胞压力介导的肿瘤细胞的上皮-间质转化、增敏免疫检查点抑制剂介导的肿瘤清除作用的试剂。(2)促进血管新生和血管正常化，包括募集血管支持细胞、使血管网路正常化、改善组织血供、降低组织缺氧、减少组织损伤，主要体现在促进血管内皮细胞增殖、迁移以及管腔形成能力方面。本专利技术所指的肿瘤，包括实体肿瘤，如腺癌、白血病、淋巴瘤、黑色素瘤、肉瘤，肿瘤组织的来源包括但不限于肾上腺、胆囊、骨、骨髓、脑、乳腺、胆管、胃肠道、心脏、肾脏、肝脏、肺、肌肉、卵巢、胰腺、甲状旁腺、阴茎、前列腺、皮肤、唾液腺、脾脏、睾丸、胸腺、甲状腺和子宫。除了上述的实体肿瘤外，还可用于中枢神经系统的肿瘤如胶质细胞多样性瘤、星细胞瘤等；此外眼部的肿瘤包括基底细胞癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤等，还包括内分泌腺肿瘤、神经内分泌系统肿瘤、胃肠道胰腺内分泌系统肿瘤，生殖系统肿瘤，括血液系统肿瘤及头颈部肿瘤等。这里不再一一列举。TIGIT免疫黏附素调节血管生成的能力，使得本文所公开的TIGIT免疫黏附素的用途包括期望促进血管生成的多种临床疾病或病症。此类病症包括促进再生组织的血管形成、缺血性肢体疾病、子宫内膜微血管生成、促进蜕膜组织微血管生成、脑缺血、毛发生长的刺激、勃起功能障碍、动脉硬化、血管炎性坏死疾病。在本专利技术的一些实施方案中，所述期望促进血管生成的临床病症包括中风、黄斑变性、黄斑水肿、淋巴水肿、血-视网膜屏障破坏、血脑屏障破坏、细菌诱导的血管损伤再生，特别是包括肺损伤、肾损伤、肾纤维化、中风、血管性痴呆、黄斑变性和糖尿病并发症(例如，肾脏、眼睛、皮肤和/或四肢中)过程中由于微血管病变造成的血管损伤。由于本专利技术所公开的TIGIT免疫粘附素具有刺激血管新生的能力，其可以进一步用于增强创伤愈合的产品制备。例如与不存在所述TIGIT免疫粘附素时的创伤愈合相比创伤闭合时间加速、与未治疗相比创伤部位处的肉芽组织增加和/或与未治疗相比创伤的新血管形成增强来证明。在一个实施方案中，刺激创伤愈合的方法或用途用于治疗糖尿病性溃疡。在其他实施方案中，用于刺激创伤愈合的方法或用途可以用于涉及创伤的多种临床情况，包括但不限于褥疮性溃疡、压迫性溃疡、手术切口、创伤性组织损伤、烧伤和组织移植。在一个实施方案中，所述期望促进血管生成的临床病症还包括针对肿瘤组织的血管正常化，以改善肿瘤组织的缺氧状况、降低转移风险。因此，本专利技术的第二方面，提供了增强免疫系统和免疫细胞清除肿瘤试剂或调节血管生成试剂在制备抗肿瘤药物中的用途。本专利技术的第三方面，提供了一种促进免疫系统和免疫细胞清除肿瘤的增强剂或血管生成调节试剂，其特征在于，以TIGIT免疫粘附素、编码其的核苷酸或重组表达载体为唯一活性成分，还包括药学上可接受的载体。上述编码TIGIT免疫粘附素的多核昔酸可以是RNA或DNA的形式，其包括cDNA和合成DNA，并且其可以是双链或单链的。编码本专利技术的蛋白的编码序列可由于遗传密码的冗余或简并性而变化。编码本专利技术TIGIT免疫粘附素的多核苷酸可包括以下：仅蛋白的编码序列，蛋白的编码序列和额外编码序列(诸如前导或分泌序列或前蛋白序列)：蛋白的编码序列和非编码序列(诸如内含子或蛋白的编码序列的5’和/或3’端的非编码序列)。因此，术语“编码蛋白的多核苷酸”不仅涵盖可包括蛋白的编码序列的多核苷酸，而且涵盖包括额外编码和/或非编码序列的多核苷酸。本专利技术的第四方面，提供了一种抗肿瘤药物组合物。该组合物包括本专利技术所公开的TIGIT免疫粘附素和至少一种免疫检查点抑制剂，还包括医学上可接受的药物载体。在本专利技术的某些具体的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂包括PD1抑制剂、PD-L1抑制剂、和/或CTLA4抑制剂。本专利技术的TIGIT免疫粘附素、其他组合成分和药学上可以接受的辅料一起组成药物制剂组合物，从而更稳定地发挥疗效，这些制剂可以保证本专利技术公开的TIGIT免疫粘附素氨基酸核心序列的构像完整性，同时还要保护蛋白质的多官能团，防止其降解(包括但不限于凝聚、脱氨或氧化)。通常情况下，液体制剂可以在2℃-8℃条件下保存至少稳定一年，冻干制剂在30℃至少六个月保持稳定。制剂可为制药领域常用的混悬、水针、冻干等制剂，优选水针或冻干制剂。对于本专利技术公开的上述TIGIT免疫粘附素的水针或冻干制剂，药学上可以接受的辅料包括表面活性剂、溶液稳定剂、等渗调节剂和缓冲液之一或其组合。其中，表面活性剂包括非离子型表面活性剂如聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(吐温20或80)；poloxamer(如poloxamer188)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂硫酸钠；十四烷基、亚油基或十八烷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.TIGIT免疫粘附素在制备增强免疫系统和免疫细胞清除肿瘤试剂或调节血管生成试剂中的用途。/n

【技术特征摘要】
20200825 CN 20201086271341.TIGIT免疫粘附素在制备增强免疫系统和免疫细胞清除肿瘤试剂或调节血管生成试剂中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：
其中，所述增强免疫系统和免疫细胞清除肿瘤试剂为增强免疫细胞杀伤肿瘤细胞、增强肿瘤组织内免疫细胞的浸润数量、降低肿瘤组织内免疫抑制信号活性、降低免疫细胞压力介导的肿瘤细胞的上皮-间质转化、增敏免疫检查点抑制剂介导的肿瘤清除作用的试剂。


3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：
其中，所述调节血管生成试剂为促进血管新生和血管正常化的试剂。


4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：
其中，所述促进血管新生和血管正常化的试剂为促进血管内皮细胞增殖、迁移以及管腔形成能力的试剂。


5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：
其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅文燕，胡适，
申请(专利权)人：沣潮医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31