家蚕抗菌肽Cecropin D在食道癌治疗中的用途制造技术

本发明专利技术公开了家蚕抗菌肽Cecropin D在食道癌治疗中的用途，具体为：家蚕抗菌肽Cecropin D在制备用于治疗食道癌或抑制食道癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭的药物中的用途。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：(1)本发明专利技术所述家蚕抗菌肽Cecropin D对两种食道癌细胞均有抑制作用并呈现剂量依赖性，但对人肾原细胞293T无明显增殖抑制能力，具有特异性；(2)本发明专利技术所述家蚕抗菌肽Cecropin D能够显著抑制两种食道癌细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力；(3)本发明专利技术阐明了家蚕抗菌肽Cecropin D的作用机制，为相关抗肿瘤药物的开发提供了理论基础和实验依据。

The application of cecropin D in the treatment of esophageal cancer

【技术实现步骤摘要】
家蚕抗菌肽CecropinD在食道癌治疗中的用途
本专利技术属于肿瘤药物
，涉及家蚕抗菌肽作为肿瘤治疗药物的新用途，具体为家蚕抗菌肽CecropinD在食道癌治疗中的用途。
技术介绍
食道癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。早期食道癌主要通过手术结合放疗和化疗进行治疗，但是食道癌患者的总生存率仍然很低。化学疗法是治疗食道癌的常规手段。但是，肿瘤细胞的抗药性，化疗药物的无差别杀伤性以及化疗药物的各种毒副作用会加速疾病的发展。因此，寻找一种安全且对食道癌无耐药性的新型药物迫在眉睫。家蚕抗菌肽(BombyxmoriAntibacterialpeptides，AMPs)是家蚕先天免疫系统中一类极其重要的免疫效应因子，可杀死多种细菌和真菌。家蚕抗菌肽可以特异性杀死肿瘤细胞，但对人体正常细胞没有明显的毒性副作用。与传统的化疗药物相比，家蚕抗菌肽对肿瘤细胞具有特异的细胞毒性，并在联合治疗中具有累加作用，更重要的是，它们具有绕过过度耐药机制的能力。家蚕抗菌肽的这些特性为癌症治疗提供了新思路和新方法。传统的化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时也会杀死正常细胞，引起严重的毒副作用，同时肿瘤细胞对抗肿瘤药物产生耐药性也是化疗中存在的巨大问题，为此很多研究者尝试寻找更高效、安全的化疗或者化疗辅助药物。抗菌肽作为生物体内的一种免疫效应因子，具有抗细菌、真菌、病毒的活性，自从Moore等首次发现抗菌肽对哺乳动物的肿瘤细胞具有抗肿瘤活性，越来越多的研究表明抗菌肽对人体多种肿瘤细胞如胃癌、肝癌、乳腺癌等具有杀伤能力。抗菌肽可以通过破坏细胞膜直接杀死肿瘤细胞，也可以通过激活肿瘤细胞凋亡途径以及阻滞细胞周期等方式来杀死肿瘤细胞。研究表明，家蚕Cecropin家族抗菌肽对多种肿瘤细胞具有抑制作用。Zhang等研究证明来自于中国柞蚕的Cecropin对大鼠大肠癌细胞具有明显的抑制作用，但是对于人正常胃上皮细胞无明显毒副作用。Sang等通过用抗菌肽CecropinA及其类似物对白血病细胞进行实验，结果表明抗菌肽CecropinA及其类似物对白血病细胞有选择性细胞毒性，通过共聚焦显微镜能够观察到抗菌肽CecropinA在白血病细胞表面富集，并裂解白血病细胞，但对淋巴细胞无毒副作用，而5－氟脲嘧啶(5-FU)、阿糖胞苷(Ara-C)等传统化疗药物对正常细胞和肿瘤细胞无选择性，在肿瘤治疗方面的副作用大。Xia等人通过构建酵母表达载体成功诱导表达出家蚕抗菌肽Cecropin-XJ，发现家蚕抗菌肽Cecropin-XJ与化疗药物联用对食道癌Eca109细胞的增殖有明显的抑制作用；通过建立荷瘤小鼠模型，证明了在老鼠体内Cecropin-XJ对人食道癌Eca109细胞有显著抑杀作用且对小鼠脏器无毒害。肿瘤细胞的迁移和侵袭是肿瘤生物学行为的主要特征，是恶性肿瘤难治愈和引起治疗失败的主要原因之一。Wu等通过构建胃癌老鼠荷瘤模型，确定了家蚕抗菌肽Cecropin-XJ能够在体外和体内抑制肿瘤细胞的增殖，并且通过抑制肿瘤血管的生成，降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。Jeong等研究表明，蜂毒肽能够通过NF-jB和PI3K/Akt/mTOR途径抑制MMP-9的表达以此来降低乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移和侵袭能力。大部分化疗药物都是通过促进肿瘤细胞的凋亡来达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。抗菌肽作为一种小分子多肽，有着非常复杂的作用机制，研究表明一些抗菌肽可以通过破坏细胞膜机制来杀死肿瘤细胞，某些抗菌肽能够进入肿瘤细胞内部，作用于某些靶点来激活细胞的凋亡。Cecropin家族可以通过诱导细胞凋亡来抑制多种肿瘤细胞。低浓度的Cecropin-XJ可以激活caspase-3的活性来诱导细胞凋亡，最终杀死人胃癌细胞AGS；Xia等研究了家蚕抗菌肽Cecropin-XJ对肝癌细胞Huh-7的抑制作用，实验证明Cecropin-XJ通过诱导肝癌细胞中的S细胞周期停滞和凋亡，以及线粒体膜电位的丧失来抑制肝癌细胞，Cecropin-XJ通过激活caspase-3和poly聚合酶诱导肝癌细胞凋亡。Cerón等研究表明家蚕天蚕素CecropinA可诱导人早幼粒白血病细胞凋亡，其机制可能是由于CecropinA促进细胞内活性氧增加，导致磷脂酰丝氨酸外翻以及DNA片段化，使细胞凋亡程序被激活。
技术实现思路
解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，获得一种家蚕抗菌肽CecropinD的新用途，本专利技术提供了家蚕抗菌肽CecropinD在食道癌治疗中的用途。本专利技术通过CCK-8法、流式细胞术等手段检测了固相合成法合成的CecropinD对人食道癌细胞Eca109、T13的增殖抑制作用，并深入探究其抑制机制。技术方案：家蚕抗菌肽CecropinD在制备用于治疗食道癌或抑制食道癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭的药物中的用途。优选的，所述家蚕抗菌肽CecropinD由固相合成法获得。优选的，所述家蚕抗菌肽CecropinD的C端经过酰胺化处理。优选的，所述家蚕抗菌肽CecropinD的序列为SEQIDNO.1(GNFFKDLEKMGQRVRDAVISAAPAVDTLAKAKALGQ)。使用高效液相色谱(HPLC)，测定抗菌肽CecropinD纯度达到94.67％。同时进行ESI质谱法检测以确保合成的抗菌肽序列是正确的。现有技术中的研究表明，化学合成的CecropinD在体外和家蚕体内均具有抗菌活性。优选的，所述食道癌细胞为Eca109或T13。人食道癌细胞系Eca109、T13细胞以及人胚胎肾细胞293T由东南大学医学院病理研究室提供。其中，人胚胎肾细胞293T作为对照组。三种细胞采用以下方法培养：人食道癌细胞系Eca109、T13和人胚胎肾细胞293T接种在含有10％胎牛血清、105U·L-1青霉素和链霉素双抗的DMEM培养基中，在含有5％CO2的37℃恒温培养箱中培养。优选的，所述家蚕抗菌肽CecropinD通过激活线粒体凋亡途径来抑制食道癌细胞的生长、增殖、迁移和侵袭。有益效果：(1)本专利技术所述家蚕抗菌肽CecropinD对两种食道癌细胞均有抑制作用并呈现剂量依赖性，但对人肾原细胞293T无明显增殖抑制能力，具有特异性；(2)本专利技术所述家蚕抗菌肽CecropinD能够显著抑制两种食道癌细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力；(3)本专利技术阐明了家蚕抗菌肽CecropinD的作用机制，为相关抗肿瘤药物的开发提供了理论基础和实验依据。附图说明图1是家蚕抗菌肽CecropinD对两种食道癌细胞以及人肾原细胞293T的增殖影响；其中，A为不同浓度的CecropinD对食道癌细胞Eca109和T13细胞分别处理12，24，48小时后的增殖抑制率，B为CecropinD和Dox(阿霉素)对两种食道癌细胞Eca109、T13分别处理12，24，48小时后的增殖抑制率，C为CecropinD处理两种食道癌细胞Eca109、T13，培养一周后的克隆形成以及克隆形成率*P<0.05,**P<0.01与对照组(0μg/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.家蚕抗菌肽Cecropin D在制备用于治疗食道癌或抑制食道癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭的药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.家蚕抗菌肽CecropinD在制备用于治疗食道癌或抑制食道癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭的药物中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述家蚕抗菌肽CecropinD由固相合成法获得。


3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述家蚕抗菌肽CecropinD的C端经过酰胺化处理。


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【专利技术属性】
技术研发人员：吕丁丁，徐平，郭锡杰，卢兵，万爱军，
申请(专利权)人：镇江市高等专科学校，
类型：发明
国别省市：江苏;32