【技术实现步骤摘要】
针对WuXiBody进行特异性细胞株筛选的HTRF方法
本专利技术涉及抗体其表达细胞株筛选领域，尤其涉及采用动物细胞表达WuXiBody双特异性抗体的细胞株筛选领域。
技术介绍
WuXiBody是指基于WuXiBodyTM双特异性抗体开发平台开发的在常规Mab的基础上额外引入非Fab结构的一类双特异性抗体，这些抗体药物具有良好的前展性。WuXiBody的结构特点之一就是额外引入一段或几段非Fab序列，其副产物之一主要是此额外的非Fab结构掉了一条链(副产物3/4抗体)并且较难纯化去除。HTRF(均相时间分辨荧光，HomogeneousTime-ResolvedFluorescence)技术是将荧光共振能量转移和时间分辨检测相结合。该技术通过双波长检测可大幅度降低缓冲液和培养基对检测结果的干扰，使其最终检测信号与产物的浓度成正比。此外，相对于Westernblot和Elisa，其检测也具有高通量和高灵敏度的特点。因此，在采用动物细胞表达抗体的领域，HTRF已经成为一种常用的细胞株筛选方法。目前，已有的HTRF商...
【技术保护点】
1.一种针对WuXiBody进行特异性细胞株筛选的HTRF方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)根据所述WuXiBody的结构来检索相应的anti-WuXiBody抗体，通过检索确定至少两种anti-WuXiBody抗体，分别定义为antibody 1和antibody 2；其中，所述antibody 1的抗原决定部位为所述WuXiBody额外引入的非Fab结构的其中一种亚基，用A亚基表示；所述antibody 2的抗原决定部位为WuXiBody额外引入的非Fab结构的其中另一种亚基，用B亚基表示；所述A亚基与B亚基的结构不同；所述WuXiBody是指基于WuXiBody
【技术特征摘要】
1.一种针对WuXiBody进行特异性细胞株筛选的HTRF方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)根据所述WuXiBody的结构来检索相应的anti-WuXiBody抗体，通过检索确定至少两种anti-WuXiBody抗体，分别定义为antibody1和antibody2；其中，所述antibody1的抗原决定部位为所述WuXiBody额外引入的非Fab结构的其中一种亚基，用A亚基表示；所述antibody2的抗原决定部位为WuXiBody额外引入的非Fab结构的其中另一种亚基，用B亚基表示；所述A亚基与B亚基的结构不同；所述WuXiBody是指基于WuXiBodyTM双特异性抗体开发平台开发的在常规Mab的基础上额外引入非Fab结构的一类双特异性抗体；
2)HTRF方法开发：将所述antibody1和antibody2抗体分别标记荧光供体铕穴状化合物DonorFluorophore:Europiumcryptate(Eu3+cryptate)，然后再分别与商品化PAbantihumanIgG-XL665组成一对，分别专一地针对A亚基和B亚基开发两种HTRF方法，用于WuXiBody表达细胞株的特异性筛选；
3)酶标仪检测HTRF信号：基于检测结果绘制HTRF比率-浓度曲线，在HTRF比率-浓度曲线的线性区间内，将HTRF比率值由高到低排名，排名靠前的WuXiBody表达细胞株作为优选细胞株。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，检索专一针对所述非Fab结构的两种不同亚基的anti-WuXiBody抗体各一种；所述检索的要求是检索到的anti-WuXiBody抗体的氨基酸序列需要识别所述非Fab结构。
3.如权利要求1所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵彬，章雨，张峥，蔡洁行，周伟昌，陈智胜，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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