脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法技术

本发明专利技术公开了脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，通过在无菌条件下脐带组织块，培养后得到脐带间充质细胞，再将脐带间充质细胞定向诱导分化为皮肤成纤维细胞，最终得到皮肤成纤维细胞，本发明专利技术取材容易，少量脐带即可获取大量具有活性的MSCs细胞，通过体外诱导分化形成皮肤成纤维细胞。本方法适宜大规模培养，对机体损伤小,无免疫排斥等优点，并且取材来源广泛，体内储备量大，适宜机体治疗或其它用途；培养过程较为简单，操作容易，成本较低，适合皮肤大面积损伤患者的辅助治疗。

The method of inducing differentiation of umbilical cord mesenchymal stem cells into skin fibroblasts

【技术实现步骤摘要】
脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法
本专利技术涉及细胞培养
，具体是脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法。
技术介绍
皮肤是人体最大、最复杂的器官，包括表皮、真皮、皮下组织和汗腺、皮脂腺等附属结构。它覆盖全身，将机体与外部环境隔离开，有效地保护了身体内的各个组织、器官等不受外界环境干扰，也保持了人体内水分不流失。此外，它还具有排汗、感觉及调节体湿等生物功能。皮肤直接与外界环境接触，因此在日常生活中最容易受到伤害。创伤、烧伤等都会引起皮肤缺损，尽管皮肤具有一定的再生能力和缺损修复功能，但一旦缺损超越了其自身修复极限，皮肤就无法正常愈合，影响美观，严重的则会引发感染，甚至死亡。一直以来，学者们都在探索修复皮肤缺损的方法，目前临床上所用的修复方法，包括自体皮肤移植、同种异体皮肤移植、异种皮肤移植和构建人工皮肤四种。自体皮肤移植能够有效治疗缺损，但对于大面积的创伤，自体皮肤供体有限，皮源供应不足，并且需要开辟第二术区，形成新的创伤，还会给患者增加痛苦。同种异体和异种皮肤移植则都避免不了免疫排斥反应和修复效果差等问题。因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将脐带组织块在含有庆大霉素的生理盐水中清洗至鲜红色，剪成肉泥状组织；/n(2)将肉泥状组织平铺于T75细胞培养瓶中；/n(3)将细胞培养瓶倒扣，加入无血清培养基，放入培养箱中放置一段时间，之后将培养瓶正置，静置培养；/n(4)七天后对培养瓶进行半量换液；/n(5)待细胞汇合度达到80％时，进行传代培养；/n(6)弃去上层溶液，收集细胞，加入传代培养基进行传代培养；/n(7)传代到P3-P4代时用预诱导液抑制其增殖，待其达到90％汇合时，用体积浓度为0.25％的胰酶消化细胞，把一瓶细胞接种于2-3瓶T75低...

【技术特征摘要】
1.脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将脐带组织块在含有庆大霉素的生理盐水中清洗至鲜红色，剪成肉泥状组织；
(2)将肉泥状组织平铺于T75细胞培养瓶中；
(3)将细胞培养瓶倒扣，加入无血清培养基，放入培养箱中放置一段时间，之后将培养瓶正置，静置培养；
(4)七天后对培养瓶进行半量换液；
(5)待细胞汇合度达到80％时，进行传代培养；
(6)弃去上层溶液，收集细胞，加入传代培养基进行传代培养；
(7)传代到P3-P4代时用预诱导液抑制其增殖，待其达到90％汇合时，用体积浓度为0.25％的胰酶消化细胞，把一瓶细胞接种于2-3瓶T75低粘附性的培养瓶中；
(8)每个培养瓶中加入诱导液，将间充质干细胞定向诱导形成皮肤成纤维细胞；
(9)间充质干细胞在9-12天诱导形成皮肤成纤维细胞。


2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述生理盐水每500ml中含2支庆大霉素。


3.根据权利要求2所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法，其特征在于，所述庆大霉素每支8万单位。


4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，培养箱的温度为37℃。
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【专利技术属性】
技术研发人员：安其标，袁卫平，汪晓敏，
申请(专利权)人：美奇创新生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11