CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基及其用途制造技术

本发明专利技术涉及细胞培养技术领域，具体是CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基及其用途，所述的CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基是通过将1L用量的各组分加入800ml的WFI中，室温搅拌30min后，加入一定量的氢氧化钠助溶，然后加入碳酸氢钠，用盐酸调节pH到6.9～7.3，用0.22μm无菌膜过滤，4℃长期保存备用制备而得。本发明专利技术还包括所述的CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基在大规模培养不同CHO细胞株中的应用。其优点表现在：能适用于多种不同CHO细胞株生长和稳定传代，化学成分明确，成本低廉，支持CHO细胞更好的生长和更短的细胞倍增时间，为生物制品的规模化生产提供方便。

Serum free and protein free medium for suspension culture of CHO cells and its application

【技术实现步骤摘要】
CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基及其用途
本专利技术涉及细胞培养
，具体地说，是CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基及其用途。
技术介绍
中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary，CH0)细胞广泛应用于重组蛋白药物及抗体药物的生产，其不仅能够提供稳定而准确的糖基化修饰，使表达产物最接近于天然蛋白质分子，而且具有安全性高的特点，是目前少数FDA及各国药监部门认可的合法合规的产业化工程细胞株。一般CHO细胞的培养是在商品化的培养基，如DMEM/F12基础培养基中添加5～10％的胎牛血清来完成的，血清除了供给细胞的营养成分外，还提供了体外培养细胞增殖所必需的生长因子。但血清的使用存在批次间差异大、生物危害性风险高、易被支原体和病毒等污染、成本高、不利于产物分离纯化等很多弊端，以及会影响细胞的生长及最终产物的质量，不适于大规模工业化生产。为了解决上述问题，许多"化学成分明确"的培养基被开发。这些培养基经过特别的优化以支持某单一细胞类型的培养，不包含任何未定义或者成分未明确的补充剂和替代血清的纯化的生长因子、蛋白质、脂蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基，其特征在于，由氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、碳水化合物和其他分子化合物组成；/n其中，氨基酸各成分为：甘氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-半胱氨酸、L-甘氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸；/n维生素各成分为：生物素、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、维生素B6、盐酸硫胺素、维生素B12、核黄素、氯化胆碱、肌醇；/n无机盐各成分为：氯化镁、硫酸镁、氯化钙、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸钠；/n微量元素各成分为：...

【技术特征摘要】
1.CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基，其特征在于，由氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、碳水化合物和其他分子化合物组成；
其中，氨基酸各成分为：甘氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-半胱氨酸、L-甘氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸；
维生素各成分为：生物素、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、维生素B6、盐酸硫胺素、维生素B12、核黄素、氯化胆碱、肌醇；
无机盐各成分为：氯化镁、硫酸镁、氯化钙、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸钠；
微量元素各成分为：七水硫酸锌、五水硫酸铜、九水硝酸铁、七水硫酸亚铁、亚硒酸纳、氯化镍、氯化亚锡、硝酸银、氯化钴、氯化铝、醋酸钡、硫酸铬、氟化钠、偏硅酸钠；
碳水化合物和其他分子化合物各成分为：葡萄糖、乙醇胺、腐胺、硫辛酸、亚油酸、丙酮酸钠、硫酸葡聚糖、PluronicF-68。


2.根据权利要求1所述的CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基，其特征在于，所述的氨基酸各成分终浓度分别为：甘氨酸65-200mg/L、L-精氨酸350-1200mg/L、L-天冬氨酸300-950mg/L、L-天冬酰胺745-1500mg/L、L-半胱氨酸105-450mg/L、L-甘氨酸20-110mg/L、L-谷氨酸50-250mg/L、L-组氨酸145-435mg/L、L-异亮氨酸425-850mg/L、L-亮氨酸260-780mg/L、L-赖氨酸370-1010mg/L、L-蛋氨酸65-145mg/L、L-苯丙氨酸130-460mg/L、L-脯氨酸135-670mg/L、L-丝氨酸210-820mg/L、L-苏氨酸50-300mg/L、L-色氨酸160-420mg/L、L-酪氨酸180-540mg/L、L-缬氨酸160-720mg/L；
所述的维生素各成分终浓度分别为：生物素0.09-3.62mg/L、D-泛酸钙2-12.5mg/L、叶酸9.45-34.5mg/L、烟酰胺3.25-23mg/L、维生素B61-10mg/L、盐酸硫胺素3.25-13mg/L、维生素B120.8-15mg/L、核黄素0.1-3.5mg/L、氯化胆碱18-180mg/L、肌醇10-75mg/L；
所述的无机盐各成分终浓度分别为：氯化镁10-200mg/L、硫酸镁30-200mg/L、氯化钙56-232mg/L、氯化钾212-936mg/L、碳酸氢钠1200-3600mg/L、氯化钠800-4000mg/L、磷酸钠70-600mg/L；
所述的微量元素各成分终浓度分别为：七水硫酸锌0.5-5mg/L、五水硫酸铜0.0001-0.01mg/L、九水硝酸铁0.05-0.45mg/L、七水硫酸亚铁0.4-15.5mg/L、亚硒酸纳0.01-0.8mg/L、氯化镍0.00005-0.0005mg/L、氯化亚锡0.00005-0.0005mg/L、硝酸银0.00001-0.0002mg/L、氯化钴0.0005-0.008mg/L、氯化铝0.0001-0.001mg/L、醋酸钡0.0005-0.003mg/L、硫酸铬0.001-0.006mg/L、氟化钠0.0005-0.006mg/L、偏硅酸钠0.005-0.09mg/L；
所述的碳水化合物和其他分子化合物各成分终浓度分别为：葡萄糖3000-9000mg/L、乙醇胺5-30mg/L、腐胺0.1-15mg/L、硫辛酸0.2-3mg/L、亚油酸0.01-0.9mg/L、丙酮酸钠105-600mg/L、硫酸葡聚糖10-100mg/L、PluronicF-68100-3000mg/L。


3.根据权利要求2所述的CHO细胞悬浮培养的无血清无蛋白培养基，其特征在于，所述的氨基酸各成分终浓度分别为：甘氨酸115-150mg/L、L-精氨酸650-900mg/L、L-天冬氨酸500-750mg/L、L-天冬酰胺1045-1200mg/L、L-半胱氨酸205-350mg/L、L-甘氨酸50-80mg/L、L-谷氨酸100-200mg/L、L-组氨酸245-335mg/L、L-异亮氨酸625-650mg/L、L-亮氨酸460-580mg/L、L-赖氨酸670-710mg/L、L-蛋氨酸95-115mg/L、L-苯丙氨酸230-360mg/L、L-脯氨酸335-470mg/L、L-丝氨酸410-620mg/L、L-苏氨酸150-200mg/L、L-色氨酸260-320mg/L、L-酪氨酸280-440mg/L、L-缬氨酸360-520mg/L；
所述的维生素各成分终浓度分别为：生物素1.09-2.62mg/L、D-泛酸钙6-8.5mg/L、叶酸19.45-24.5mg/L、烟酰胺8.25-18mg/L、维生素B63-8mg/L、盐酸硫胺素6.25-10mg/L、维生素B125.8-10mg/L、核黄素1.1-2.5mg/L、氯化胆碱68-...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐亮亮，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32