针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术或免疫学技术领域，涉及针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体的应用。所述的单域抗体的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:77‑ SEQ ID NO:95所示；所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:96‑SEQ ID NO:124所示；所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:125‑SEQ ID NO:141以及SEQ ID NO:195‑SEQ ID NO:206所示。本发明专利技术的有益效果是：单域抗体作为BSA检测抗体，与传统单克隆抗体相比，其亲和力更高；与现有检测试剂盒中多克隆抗体相比，其成分更加单一，批间稳定性更好，质量控制更容易实施，从而使实际的BSA含量检测结果可信度更高。

Application of single domain antibody against BSA

【技术实现步骤摘要】
针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体的应用
本专利技术涉及生物技术或免疫学
，涉及针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体的应用。
技术介绍
抗体(Antibody,Ab)即免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是血液和组织液中的一类糖蛋白，由B细胞接收抗原刺激后增殖分化生成的浆细胞产生，主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，是介导体液免疫的重要效应分子。抗体除了因其作为重要效应分子介导特异性体液免疫应答外，抗体在疾病的防治特别是感染性疾病的防治方面扮演者重要角色，Behring创立血清疗法因此获得医学与生理学诺贝尔将。此后，以多克隆、单克隆及基因工程抗体技术人工制备的抗体逐步应用于临床。仅2011年抗体药物就以480亿美元的销售额领跑全球药品市场，占整个生物制药市场的34.4％。至2017年，美国FDA和欧盟EMA批准的治疗性抗体药物有76个，主要用于肿瘤、自身免疫病等疾病的治疗。抗体作为可以特异性识别某一个蛋白(抗原)的分子，除了在疾病预防和治疗方面的作用强大之外，其作为检测工具在检验、科学研究方面的用途也不言而喻。酶联免疫吸附实验(ELISA)正是利用抗体/抗原结合以实现检测目的一个重要方法。目前常用的ELISA检测方法有直接法、间接法、竞争法等，其基本原理均为抗原抗体结合反应。以此方法为基础ELISA试剂盒在检验检疫等场合的用途也十分广泛。部分检验检疫方法对于抗体的亲和力和稳定性要求非常苛刻，这就要求所使用的抗体在与其特异性结合的抗原亲和力要非常高，稳定性要非常好，并且这些抗体的使用和储存环境要更为广泛才更有利于检测方法的推广。传统单抗在抗原亲和力方面表现良好，并且虽然现在可以通过添加保护剂或改变缓冲液的方法提升其稳定性，但是其储存条件要求依然相对苛刻，一般应在低温运输或保存。而单域抗体在亲和力和稳定性方面就表现的更为优秀，单域抗体在未进行亲和力成熟之前，其与抗原的亲和力可达到pM级别，并且其室温稳定性良好，可以降低运输和储存成本。此外，单域抗体可以在原核表达系统中可以大量可溶性表达，降低生产成本，并且提高抗体批件稳定性。牛血清白蛋白(BSA)，又称牛血清第五组分，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在蛋白免疫印迹实验(westernblot)中作为封闭液(blockingagent)；在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性。牛血清是哺乳动物细胞培养基中的重要添加成分，其占培养基的比例可以达到10％甚至更高，例如人用狂犬疫苗生产所用到的Vero细胞在培养时需要添加10％的胎牛血清。BSA是胎牛血清中的重要组分，所以上述培养基中BSA的含量非常高，人用狂犬疫苗的一个重要的质控环节就是检测疫苗制品中的BSA含量，因为BSA对于人体属于异物，会引起注射者强烈的免疫反应，从而导致其他不良反应，所以，将疫苗制品中的BSA降到最低就成为疫苗生产商的必须要达到的标准，而定量或定性分析疫苗制品中BSA的具体含量则是这一过程的必经之路。目前，国内外对于生物制品中BSA含量检测的最低限为5ng/mL，并且这些检测试剂中用到的抗体均为多克隆抗体(兔源)，与鼠单抗相比，兔多抗虽然制备周期短、亲和力稍强的优点外，其缺点也非常明显：1)单批次制备量有限，并且对于单批次效果好的抗体不能长期获得；2)批间差异性太大；3)组分相对复杂，质量控制较难把控。所以，既能保证抗体质量和组分的质控，又能保证抗体本身与抗原的亲和力以达到目前的BSA检测下限，就成为目前针对BSA检测抗体开发的两个重要目标。
技术实现思路
为了克服上述缺陷，本专利技术的目的是提供特异性针对BSA蛋白的单域抗体的应用，首先，在获得高特异性的单域抗体后通过原核表达或者酵母表达便可以获得，产量和纯化效率高并且批间质量稳定，其次，单域抗体的亲和力比传统抗体有一定优势，可以提升抗原捕获能力和检测效果，提高检测的灵敏度，此外，单域抗体属于单克隆抗体，这就能保证检测试剂的单一性和可控性，更好的控制检测试剂盒的检测标准。单域抗体作为单克隆抗体的一类，其比传统单抗的亲和力普遍更高，稳定性更好，并且它也具备传统单抗的优点。因此，本专利技术就是利用上述优势，获得针对BSA的抗体，这些获得的抗体既能够在普通的ELISA实验中作为检测工具对各类生物制品中的BSA进行定性分析，也可以被开发成ELISA检测试剂盒，对人用生物制品(包括但不限于人用狂犬疫苗)中的BSA进行定量分析。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体在检测生物制品中BSA含量的应用，所述的单域抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:77-SEQIDNO:95中的任意一条所示；所述的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:96-SEQIDNO:124中的任意一条所示；所述的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:125-SEQIDNO:141以及SEQIDNO:195-SEQIDNO:206中的任意一条所示。优选的，所述的单域抗体的互补决定区CDR的序列为下述(1)-(34)中的一种：(1)SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:127所示的CDR3(对应于SEQIDNO.1)；(2)SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:109所示的CDR2，SEQIDNO:126所示的CDR3(对应于SEQIDNO.2)；(3)SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3(对应于SEQIDNO.3)；(4)SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:117所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3(对应于SEQIDNO.4)；(5)SEQIDNO:94所示的CDR1，SEQIDNO:106所示的CDR2，SEQIDNO:128所示的CDR3(对应于SEQIDNO.5)；(6)SEQIDNO:88所示的CDR1，SEQIDNO:105所示的CDR2，SEQIDNO:129所示的CDR3(对应于SEQIDNO.6)；(7)SEQIDNO:88所示的CDR1，SEQIDNO:104所示的CDR2，SEQIDNO:130所示的CDR3(对应于SEQIDNO.7)；(8)SEQIDNO:86所示的CDR1，SEQIDNO:118所示的CDR2，SEQIDNO:131所示的CDR3(对应于SEQIDNO.8-9)；(9)SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:96所示的CDR2，SEQIDNO:132所示的CDR3(对应于SEQIDNO.10)；(10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体在检测生物制品中BSA含量的应用，其特征在于，所述的单域抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:77- SEQ ID NO:95中的任意一条所示；所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:96-SEQ ID NO:124中的任意一条所示；所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:125-SEQ ID NO:141以及SEQ ID NO:195-SEQ ID NO:206中的任意一条所示。/n

【技术特征摘要】
1.针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体在检测生物制品中BSA含量的应用，其特征在于，所述的单域抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:77-SEQIDNO:95中的任意一条所示；所述的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:96-SEQIDNO:124中的任意一条所示；所述的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:125-SEQIDNO:141以及SEQIDNO:195-SEQIDNO:206中的任意一条所示。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的单域抗体的互补决定区CDR的序列为下述（1）-（34）中的一种：
（1）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:127所示的CDR3；
（2）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:109所示的CDR2，SEQIDNO:126所示的CDR3；
（3）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3；
（4）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:117所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3；
（5）SEQIDNO:94所示的CDR1，SEQIDNO:106所示的CDR2，SEQIDNO:128所示的CDR3；
（6）SEQIDNO:88所示的CDR1，SEQIDNO:105所示的CDR2，SEQIDNO:129所示的CDR3；
（7）SEQIDNO:88所示的CDR1，SEQIDNO:104所示的CDR2，SEQIDNO:130所示的CDR3；
（8）SEQIDNO:86所示的CDR1，SEQIDNO:118所示的CDR2，SEQIDNO:131所示的CDR3；
（9）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:96所示的CDR2，SEQIDNO:132所示的CDR3；
（10）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:98所示的CDR2，SEQIDNO:133所示的CDR3；
（11）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:123所示的CDR2，SEQIDNO:134所示的CDR3；
（12）SEQIDNO:84所示的CDR1，SEQIDNO:121所示的CDR2，SEQIDNO:125所示的CDR3；
（13）SEQIDNO:77所示的CDR1，SEQIDNO:120所示的CDR2，SEQIDNO:135所示的CDR3；
（14）SEQIDNO:77所示的CDR1，SEQIDNO:114所示的CDR2，SEQIDNO:135所示的CDR3；
（15）SEQIDNO:83所示的CDR1，SEQIDNO:122所示的CDR2，SEQIDNO:136所示的CDR3；
（16）SEQIDNO:91所示的CDR1，SEQIDNO:110所示的CDR2，SEQIDNO:137所示的CDR3；
（17）SEQIDNO:79所示的CDR1，SEQIDNO:99所示的CDR2，SEQIDNO:138所示的CDR3；
（18）SEQIDNO:87所示的CDR1，SEQIDNO:116所示的CDR2，SEQIDNO:139所示的CDR3；
（19）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:117所示的CDR2，SEQIDNO:196所示的CDR3；
（20）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:112所示的CDR2，SEQIDNO:195所示的CDR3；
（21）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:115所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3；
（22）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:198所示的CDR3；
（23）SEQIDNO:95所示的CDR1，SEQIDNO:108所示的CDR2，SEQIDNO:199所示的CDR3；
（24）SEQIDNO:81所示的CDR1，SEQIDNO:124所示的CDR2，SEQIDNO:200所示的CDR3；
（25）SEQIDNO:78所示的CDR1，SEQIDNO:100所示的CDR2，SEQIDNO:201所示的CDR3；
（26）SEQIDNO:78所示的CDR1，SEQIDNO:101所示的CDR2，SEQIDNO:138所示的CDR3；
（27）SEQIDNO:78所示的CDR1，SEQIDNO:101所示的CDR2，SEQIDNO:202所示的CDR3；
（28）SEQIDNO:80所示的CDR1，SEQIDNO:102所示的CDR2，SEQIDNO:202所示的CDR3；
（29）SEQIDNO:82所示的CDR1，SEQIDNO:107所示的CDR2，SEQIDNO:203所示的CDR3；
（30）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:103所示的CDR2，SEQIDNO:204所示的CDR3；
（31）SEQIDNO:85所示的CDR1，SEQIDNO:97所示的CDR2，SEQIDNO:205所示的CDR3；
（32）SEQIDNO:89所示的CDR1，SEQIDNO:111所示的CDR2，SEQIDNO:206所示的CDR3；
（33）SEQIDNO:90所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:140所示的CDR3；
（34）SEQIDNO:77所示的CDR1，SEQIDNO:119所示的CDR2，SEQIDNO:141所示的CDR3。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述单域抗体为SEQIDNO:1-38中的任意一条所示的抗体链。


4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于，抗体链的编码序列分别如SEQIDNO：39-76所示。


5.根据权利要求1-4任意一项所述的应用，其特征在于，所述的生物制品为人用生物制品，优选为人用疫苗。


6.用于检测生物制品中BSA含量的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括针对牛血清白蛋白BSA的单域抗体，所述的单域抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；
所述的单域抗体的互补决定区CDR的序列为下述（1）-（34）中的一种：
（1）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:127所示的CDR3；
（2）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:109所示的CDR2，SEQIDNO:126所示的CDR3；
（3）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:113所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3；
（4）SEQIDNO:93所示的CDR1，SEQIDNO:117所示的CDR2，SEQIDNO:197所示的CDR3；
（5）SEQIDNO:94所示的CDR1，SEQIDNO:106所示的CDR2，SEQIDNO:128所示的CDR3；
（6）SEQIDNO:88所示的CDR1，SEQIDNO:105所示的CDR2，SEQIDNO:129所示的CDR3；
（7）SEQIDNO:88所示的CDR1，SEQIDNO:104所示的CDR2，SEQIDNO:130所示的CDR3；
（8）SEQIDNO:86所示的CDR1，SEQIDNO:118所示的CDR2，SEQIDNO:131所示的CDR3；
（9）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:96所示的CDR2，SEQIDNO:132所示的CDR3；
（10）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:98所示的CDR2，SEQIDNO:133所示的CDR3；
（11）SEQIDNO:92所示的CDR1，SEQIDNO:123所示的CDR2，SEQIDNO:134所示的CDR3；
（12）SEQIDNO:84所示的CDR1，SEQIDNO:121所示的CDR2，SEQIDNO:125所示的CDR3；
（13）SEQIDNO:77所示的CDR1，SEQIDNO:120所示的CDR2，SEQIDNO:135所示的CDR3；
（14）SEQIDNO:77所示的CDR1，SEQIDNO:114所示的CDR2，SEQIDNO:135所示的CDR3；
（15）SEQIDNO:83所示的CDR1，SEQIDNO:122所示的CDR2，SEQIDNO:136所示的CDR3；
（16）SEQIDNO:91所示的CDR1...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏志鹏，孟巾果，周耿，
申请(专利权)人：南京融捷康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32