一种竹叶黄酮的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种竹叶黄酮的分离纯化方法，包括：将竹叶黄酮浸膏或流膏醇溶或稀释、醇沉、离心；取离心液拌聚酰胺上柱层析，以水‑醇体系梯度洗脱获得a组洗脱液，检测a组各洗脱液中黄酮总含量，其最低值为b；选取b含量黄酮上硅胶柱层析，以石油醚‑乙酸乙酯、乙酸乙酯‑醇体系梯度洗脱获c组洗脱液，检测c组各洗脱液中黄酮含量，其最低值为d；以及选取d含量黄酮，二次上硅胶或聚酰胺柱层析，获得e组洗脱液，检测e组各洗脱液中黄酮总含量，其最低值为f；采用Al(N0

A method for the separation and purification of Flavonoids from bamboo leaves

【技术实现步骤摘要】
一种竹叶黄酮的分离纯化方法
本专利技术涉及分离纯化领域，尤其涉及一种竹叶黄酮的分离纯化方法。
技术介绍
竹叶黄酮，是以竹叶为原料浸提而来。竹叶中所含的功能因子主要是黄酮苷和香豆素类内酯，其有效成分的含量和生物活性均与银杏叶成分具有可比性。竹叶中的黄酮类物质，具有明显的降血脂和降胆固醇的作用。药理研究表明，竹叶黄酮具有抗整体动物缺氧的作用，能有效扩张冠脉血管，增加冠脉流量，增加心肌收缩力，明显改善心肌缺血及缩小心梗范围，降低血小板聚集程度，有效抑制凝血和血栓形成，对脑缺血有一定的保护作用；研究又发现，富含黄酮的竹叶提取物有多种生物学功效，如清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒等功能，在保健品、化妆品及食品添加剂方面应用广泛。然而现有技术中以竹叶黄酮为对象进行的提取纯化工艺的优化还比较少，纯度相对较低，还没有实现批量化生产。因此需要提供一种能够实现高纯度且适合批量化生产的竹叶黄酮提取方法。
技术实现思路
为此，本专利技术提供了一种竹叶黄酮的分离纯化方法，以解决或至少缓解上面存在的问题。根据本专利技术的一个方面，提供了一种竹叶黄酮的分离纯化方法，包括：将竹叶黄酮浸膏或流膏用浓度大于等于90％的乙醇溶液加热溶解或稀释，静置醇沉后进行离心，得到离心液；将离心液拌聚酰胺减压浓缩，干燥拌样品，上聚酰胺柱层析分离，采用水-醇体系流动相进行梯度洗脱以获得a组梯度洗脱液，检测a组各洗脱液中的黄酮总含量，其最低含量为b；选取黄酮总含量大于等于b值的洗脱收集液上硅胶层析柱进行分离，采用石油醚-乙酸乙酯体系和乙酸乙酯-醇体系进行梯度洗脱以获得c组洗脱液，检测各份洗脱液中的黄酮含量，其最低含量为d；以及选取黄酮含量大于等于d值的洗脱液二次上硅胶层析柱或聚酰胺柱层析分离，采用所选取的层析柱所对应的流动相进行梯度洗脱获得e组洗脱液，并分别检测每份洗脱液中的黄酮含量，e组洗脱液的黄酮含量最低值为f。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，还包括步骤：选取黄酮含量大于等于f值的洗脱液上葡聚糖凝胶柱SephadexLH-20层析柱进行分离，采用水-甲醇体系作为流动相进行梯度洗脱以获得单一成分竹叶黄酮。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，竹叶为任一竹子属竹叶。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，还包括步骤：分别对a组洗脱液、c组洗脱、e组洗脱液进行浓缩和干燥，得到不同纯度的竹叶黄酮粉产品。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，根据浸膏中黄酮原始含量，b＝20.02％，d＝50.24％，硅胶层析时f＝80.11％，聚酰胺层析时f＝78.92％；单一成分竹叶黄酮包括氧苷黄酮、碳苷黄酮、黄酮苷元，当然，因原始浸膏中黄酮含量不同，分离纯化时，b，d，f值会有所不同。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，将竹叶黄酮浸膏或流膏用大于等于90％的乙醇溶液加热溶解或稀释，静置醇沉后进行离心的步骤包括：在竹叶黄酮浸膏中加入大于等于90％乙醇，加热使其溶解或稀释后，加入纯化水调节乙醇含量至大于等于80％；在40～50℃下进行静置醇沉、离心、留取离心液。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，将离心液拌聚酰胺上聚酰胺柱层析分离的步骤包括：将聚酰胺加入离心液中，减压浓缩拌样液，干燥拌样品，至拌样聚酰胺中不含乙醇，以纯化水为上柱溶剂，上聚酰胺柱层析进行分离。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，聚酰胺拌样时按照离心液中含干物质和聚酰胺的质量比1：(1～4)进行拌样；聚酰胺层析柱中的拌样聚酰胺和空白聚酰胺的柱床高比例为(1～10)：1；聚酰胺层析柱的直径范围为5～100cm，聚酰胺的粒度为100～200目。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，在进行聚酰胺柱层析的梯度洗脱时，流动相中水和醇的体积比例为10:(0～6)，且当某一洗脱液洗脱颜色变淡时，改用另一种醇含量更高的醇溶液进行洗脱；其中，水-醇体系中水-醇体系为水-乙醇体系或水-甲醇体系。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，在进行聚酰胺柱层析的梯度洗脱时，优选流动相依次采用纯水、10％、20％、30％、60％体积比的醇溶液或任意体积比。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，将洗脱液上硅胶柱层析进行分离的步骤包括：将所选取的洗脱液和硅胶按照洗脱液中含干物质和硅胶的质量比1：(1～3)进行拌样，上硅胶柱层析进行分离。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，硅胶粒度为200～400目，硅胶层析柱中的空白硅胶和拌样硅胶的柱床高比例为1:(1～10)，空白硅胶和拌样硅胶的上柱溶剂为石油醚或石油醚-乙酸乙酯体积比为10：(1～4)的混合液，空白硅胶的柱床高范围为6～20cm，硅胶层析柱的直径范围为5～100cm。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，在进行硅胶层析柱的梯度洗脱时，流动相先后采用石油醚-乙酸乙酯体系和乙酸乙酯-醇体系进行梯度洗脱，其中，石油醚可选沸点范围为30～60℃或60～90℃或90～120℃中任何一种。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，在进行硅胶柱层析的梯度洗脱时，流动相石油醚-乙酸乙酯的体积为(1～0):1；乙酸乙酯-醇体积比为10:(0～4)，且当某一体积比例的洗脱液洗脱至颜色淡黄或接近无色时，改用另一种醇含量更高的流动相进行洗脱。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，聚酰胺拌样时按照离心液中含干物质和聚酰胺的质量比为1:(1～3)进行拌样；硅胶拌样时按照上柱收集洗脱液中含干物质和硅胶的质量比为1:(2～3)进行拌样，硅胶粒度为300～400目。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，洗脱液中的黄酮总含量通过Al(N03)3、NaNO2和NaOH显色，紫外光谱510nm处检测；单一黄酮成分通过HPLC方法检测。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，竹叶黄酮浸膏和各洗脱液中黄酮包括氧苷黄酮、碳苷黄酮、黄酮苷元，各洗脱液中的总黄酮是这几种类黄酮的总含量。可选地，在根据本专利技术的分离纯化方法中，检测各组洗脱液中的黄酮总含量的步骤包括：以芦丁为对照品，采用Al(N03)3、NaNO2和NaOH显色，在紫外510nm处检测不同浓度组份吸光度(A)，绘制标准曲线；称取各洗脱液干燥的黄酮粗品，用40％乙醇溶解并定容至50mL，分别取各样品溶液10mL至50mL容量瓶中，用40％乙醇补充至25mL，加入5mLNaNO2，然后以5mLAl(N03)3和5mLNaOH显色，并以40％乙醇定容，显色10分钟，以空白试剂为对照，在510nm下测定各溶液的吸光度(A)，对照芦丁标准曲线，计算各洗脱液黄酮总含量。根据本专利技术的竹叶黄酮的分离纯化方法，适于用任何溶媒浸提的竹叶黄酮浸膏。先通过醇沉法去除竹叶黄酮浸膏中的多糖、胶质、蛋白质、色素类等物质进行初步纯化，再采用聚酰胺柱层析分离，以水-醇体系进行梯度洗脱，获得a组洗脱液，分组收集洗脱液，紫外法检测各份洗脱液黄酮总含量。从a组洗脱液中选取大于等于b的总黄酮上硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯体系和乙酸乙酯-醇体系进行梯度洗脱，获得c组洗脱液，检测其洗脱液含量，可得本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种竹叶黄酮的分离纯化方法，包括：/n将竹叶黄酮浸膏或流膏用浓度大于等于90％的乙醇溶液加热溶解或稀释，静置醇沉后进行离心，得到离心液；/n将所述离心液拌聚酰胺得拌样品，上聚酰胺柱层析分离，采用水-醇体系流动相进行梯度洗脱，获得a组各梯度收集液，检测各梯度洗脱液中的黄酮总含量，其最低含量为b；/n选取黄酮总含量大于等于b的洗脱液上硅胶层析柱层析分离，先后采用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-醇体系流动相进行梯度洗脱，获得c组各梯度洗脱液，检测各梯度洗脱液中的黄酮含量，其最低含量为d；以及/n选取黄酮总含量大于等于d的洗脱液二次上硅胶柱层析或聚酰胺柱层析进行梯度洗脱分离，获得e组梯度洗脱液，检测各梯度洗脱液中的黄酮含量，e组洗脱液的黄酮含量最低值为f。/n

【技术特征摘要】
1.一种竹叶黄酮的分离纯化方法，包括：
将竹叶黄酮浸膏或流膏用浓度大于等于90％的乙醇溶液加热溶解或稀释，静置醇沉后进行离心，得到离心液；
将所述离心液拌聚酰胺得拌样品，上聚酰胺柱层析分离，采用水-醇体系流动相进行梯度洗脱，获得a组各梯度收集液，检测各梯度洗脱液中的黄酮总含量，其最低含量为b；
选取黄酮总含量大于等于b的洗脱液上硅胶层析柱层析分离，先后采用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-醇体系流动相进行梯度洗脱，获得c组各梯度洗脱液，检测各梯度洗脱液中的黄酮含量，其最低含量为d；以及
选取黄酮总含量大于等于d的洗脱液二次上硅胶柱层析或聚酰胺柱层析进行梯度洗脱分离，获得e组梯度洗脱液，检测各梯度洗脱液中的黄酮含量，e组洗脱液的黄酮含量最低值为f。


2.如权利要求1所述的方法，还包括步骤：
从所述e组洗脱液中选取黄酮总含量大于等于f的洗脱液上SephadexLH-20柱进一步分离纯化，采用水-甲醇体系流动相进行梯度洗脱，获得单一成分竹叶黄酮。


3.如权利要求1所述的竹叶黄酮浸膏或流膏，其中，所述竹叶为任一竹子属竹叶。


4.如权利要求2所述的方法，其中，b＝20.02％，d＝50.24％，硅胶层析时f＝80.11％，聚酰胺层析时f＝78.92％。


5.如权利要求1-4任一项中所述的方法，其中所述将竹叶黄酮浸膏或流膏用大于等于90％的乙醇溶液加热溶解或稀释，静置醇沉后进行离心的步骤包括：
在竹叶黄酮浸膏或流膏中加入大于等于90％乙醇，加热使其溶解或...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶文亮，许子竞，李洪庆，
申请(专利权)人：贵州民族大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52