一种奈西立肽的肽图分析方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种奈西立肽的肽图分析方法及其应用。所述方法包括如下步骤：将奈西立肽还原并烷基化，加入肽链内切酶进行酶解，之后使用LC‑UV‑MS检测，并根据采集到的肽图数据对所述奈西立肽酶解后形成的多肽片段和/或氨基酸残基进行归属。本发明专利技术提供的肽图分析方法，在将奈西立肽进行还原和烷基化之后，使用肽链内切酶将其酶解为多个多肽片段和氨基酸残基，并通过LC‑UV‑MS检测将多肽片段和氨基酸残基与肽图中的峰正确对应，从而达到准确判断奈西立肽的多肽链是否存在缺失、错连或重复等现象。

A peptide map analysis method of nesiritide and its application

【技术实现步骤摘要】
一种奈西立肽的肽图分析方法及其应用
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种重组多肽类药物的肽图分析，尤其涉及一种奈西立肽的肽图分析方法及其应用。
技术介绍
心力衰竭(HeartFailure)是由于心脏结构功能异常而导致心室充盈或射血能力受损的临床综合征，其主要临床表现为活动耐量受限以及液体潴留。传统的心衰治疗方法为“强心、利尿、扩血管”，包括利尿剂、正性肌力药物、β受体阻滞剂、硝酸酯类等药物，虽能缓解心衰患者的临床症状，但疗效有限，且并不能逆转心衰所致的心肌纤维化、心室重构等。故有必要寻找能从根本上治疗心衰的临床新药。奈西立肽(Nesiritideacetate)是利用重组DNA技术合成的重组人脑利钠肽(recombinedhumanB-typenatriureticpeptide,rhBNP)，能够与利钠钛受体结合，具有扩血管、利尿的作用，能明显改善心衰患者的血流动力学指标，逆转心室重构，从而缓解临床症状，降低住院率及死亡率。奈西立肽与心室肌分泌的天然利钠肽具有相同的32个氨基酸序列，在其第10和第26个氨基酸(均为半本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奈西立肽的肽图分析方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将奈西立肽还原并烷基化，加入肽链内切酶进行酶解，之后使用LC-UV-MS检测，并根据采集到的肽图数据对所述奈西立肽酶解后形成的多肽片段和/或氨基酸残基进行归属。/n

【技术特征摘要】
1.一种奈西立肽的肽图分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
将奈西立肽还原并烷基化，加入肽链内切酶进行酶解，之后使用LC-UV-MS检测，并根据采集到的肽图数据对所述奈西立肽酶解后形成的多肽片段和/或氨基酸残基进行归属。


2.根据权利要求1所述的肽图分析方法，其特征在于，所述肽图分析方法包括如下步骤：
(1)使用还原剂将奈西立肽还原，之后加入烷基化试剂将还原后的奈西立肽烷基化；
(2)使用肽链内切酶将烷基化的奈西立肽酶解得到多肽片段和/或氨基酸残基；
(3)使用LC-UV-MS对所述多肽片段进行检测，并根据采集到的肽图数据，对所述奈西立肽酶解后形成的多肽片段和/或氨基酸残基进行归属。


3.根据权利要求1或2所述的肽图分析方法，其特征在于，所述LC-UV-MS的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲酸水溶液，所述流动相B为甲酸乙腈溶液；
优选地，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.1-1％；
优选地，所述甲酸乙腈溶液中甲酸的体积分数为0.1-1％；
优选地，所述LC-UV-MS的检测柱温为55-60℃；
优选地，所述LC-UV-MS使用的色谱柱为烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，优选为十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱。


4.根据权利要求1-3任一项所述的肽图分析方法，其特征在于，所述LC-UV-MS采用梯度洗脱：
优选地，所述梯度洗脱的参数为：第一阶段，流动相A体积分数为95-99％，流动相B体积分数为1-5％，持续2-2.5min，第二阶段，流动相A体积分数为95-99％，流动相B体积分数为1-5％，持续6-7min，第三阶段，流动相A体积分数为50-70％，流动相B体积分数为30-50％，持续2-2.5min，第四阶段，流动相A体积分数为1-5％，流动相B体积分数为95-99％，持续4-5min，第五阶段，流动相A体积分数...

【专利技术属性】
技术研发人员：李帅，苏春所，刘美，卓芳芳，
申请(专利权)人：上海景峰制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31