一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法，所述的芫花标准汤剂的成分含量测定方法，包括如下步骤：（1）分别吸取对照品溶液和待测芫花标准汤剂样品溶液注入高效液相色谱仪，测定相应峰面积；（2）通过外标法计算芫花素的含量；（3）再通过一测多评法计算芹菜素‑7‑O‑β‑葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素的含量。本发明专利技术通过外标法计算出芫花素的含量，再通过一测多评法计算芹菜素‑7‑O‑β‑葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素的含量，能有效简化4中成分的含量测定的操作步骤，减少测定时间，提高工作效率，实现对芫花标准汤剂化学成分的定量分析。

A method for the construction of HPLC characteristic map of Yuanhua standard decoction and the determination of its components

【技术实现步骤摘要】
一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法
本专利技术属于中药鉴别领域，具体涉及一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法。
技术介绍
芫花为瑞香科植物芫花的干燥花蕾。春季花未开放时采摘，除去杂质，干燥，洗后趁鲜刮去粗皮，洗净，干燥；本品具有泻水逐饮，解毒杀虫的功效，传统用于治疗水肿胀满、痰饮积聚和气逆喘咳等症。芫花又名南芫花、芫花条、药鱼草等。始载于《神农本草经》，列为下品。现代医学研究表明，芫花的主要药效成分为黄酮类物质，具有镇咳祛痰、利尿泻下、抗炎、抗肿瘤、引产抗生育等多种药理作用。具有药理活性的化学成分为芫花素、芹菜素、木犀草素等黄酮类化合物。一测多评法（QAMS）只需测定一个成分（对照品易得）即可实现多个成分同时测定，可以有效解决质量分析过程中由于对照品短缺带来的困难。现行对该药物的质量控制方法多是采用不同的色谱条件分别测定其中一种或两种成分的含量，存在操作繁琐，检测时间长，检测成本高等缺点。芫花标准汤剂是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥而成，目前并没有建立有效控制芫花标准汤剂的质量的方法，现有技术中也尚未发现采用HPLC法同时测定芫花标准汤剂的特征图谱并结合一测多评法对芫花标准汤剂中4种化学成分进行含量测定的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱构建方法及其成分含量测定方法，采用外标法计算出了芫花素的含量，再通过一测多评法计算芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素的含量，以有效控制芫花标准汤剂的质量，保证产品的有效性和安全性。本专利技术所要解决的上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法，包含如下步骤：（1）精密称取芫花标准汤剂粉末，制备得到芫花标准汤剂供试品溶液；（2）将芫花标准汤剂供试品溶液采用高效液相色谱仪分析，得到芫花标准汤剂HPLC特征图谱。作为一种优选方案，所述高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为25~45℃，以甲醇为流动相A，以0.05~0.15%的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.6~1.4mL/min，检测波长为340~370nm，进样量为8~12μL。作为一种优选方案，所述梯度洗脱条件为：0~3min，流动相A的体积分数变化为20%~43%，流动相B的体积分数变化为80%~57%；3~25min，流动相A的体积分数变化为43%~45%，流动相B的体积分数变化为57%~55%；25~35min，流动相A的体积分数变化为45%~60%，流动相B的体积分数变化为55%~40%；35~50min，流动相A的体积分数变化为60%~95%，流动相B的体积分数变化为40%~5%。作为一种优选方案，所述的供试品溶液的制备方法为：取芫花标准汤剂，研细，取0.05~0.15g，精密称定，精密加入60%~80%乙醇20~30mL，称定重量，超声处理20~40分钟，取出，放冷，用60%~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得。本专利技术还提供了一种芫花标准汤剂的成分含量测定方法，包括如下步骤：（1）分别吸取对照品溶液和待测芫花标准汤剂样品溶液注入高效液相色谱仪，测定相应峰面积；（2）通过外标法计算芫花素的含量；（3）再通过一测多评法计算芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素的含量。作为一种优选方案，所述对照品溶液的制备方法为：分别取芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素、芫花素对照品，置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成每1mL含芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷0.04~0.08mg、芹菜素0.04~0.08mg、羟基芫花素0.01~0.03mg、芫花素为0.01~0.03mg的对照品溶液，即得。作为一种优选方案，所述待测芫花标准汤剂样品溶液的制备方法为：取芫花标准汤剂，研细，取0.05~0.15g，精密称定，精密加入60%~80%乙醇20~30mL，称定重量，超声处理20~40分钟，取出，放冷，用60%~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得。作为一种优选方案，所述高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为25~45℃，以甲醇为流动相A，以0.05~0.15%的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.6~1.4mL/min，检测波长为340~370nm，进样量为8~12μL。作为一种优选方案，所述梯度洗脱条件为：所述梯度洗脱条件为：0~3min，流动相A的体积分数变化为20%~43%，流动相B的体积分数变化为80%~57%；3~25min，流动相A的体积分数变化为43%~45%，流动相B的体积分数变化为57%~55%；25~35min，流动相A的体积分数变化为45%~60%，流动相B的体积分数变化为55%~40%；35~50min，流动相A的体积分数变化为60%~95%，流动相B的体积分数变化为40%~5%。芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法或芫花标准汤剂成分含量测定方法在检测和鉴别芫花标准汤剂中的应用。有益效果：（1）本专利技术构建了芫花标准汤剂的HPLC特征图谱，确立了6个共有峰，并对其化学成分进行了指认，确定峰1为芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、峰2为木犀草素、峰3为椴树苷、峰4为芹菜素、峰5为羟基芫花素、峰6为芫花素，充分反应样品的特征峰信息，展示了芫花标准汤剂的化学成分特征；（2）本专利技术构建的HPLC特征图谱可用于定性鉴别芫花标准汤剂，方法稳定、精密度高、重现性好；（3）本专利技术通过外标法计算出芫花素的含量，再通过一测多评法计算芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素的含量，能有效简化4种成分的含量测定的操作步骤，减少测定时间。提高工作效率，实现对芫花标准汤剂化学成分的定量分析，并制定了合格的标准汤剂的含量范围：以干燥品计：芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷和芹菜素总含量范围是29.309~49.562mg/g；羟基芫花素和芫花素总含量范围是3.509~5.197mg/g；（4）本专利技术能够有效的控制芫花标准汤剂的质量，保证产品的有效性和安全性，且含量测定方法灵敏度高，具有很好的分离度，检测方法具有专属性，其准确性、重现性、线性关系、稳定性均能达到科研和生产的要求，为芫花标准汤剂的质量控制提供快速、准确、可靠的测定方法。附图说明图1为流动相和洗脱条件1下的特征图谱。图2为流动相和洗脱条件2下的特征图谱。图3为流动相和洗脱条件3下的特征图谱。图4为流动相和洗脱条件4下的特征图谱。图5为15批芫花标准汤剂HPLC特征图谱叠加图。图6为芫花标准汤剂HPLC特征图谱。图7为芫花标准汤剂特征图谱对照品指认图。图中标记：峰1为芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、峰2为木犀草素、峰3为椴树苷、峰4为芹菜素、峰5为羟基芫花素、峰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：/n（1）精密称取芫花标准汤剂粉末，制备得到芫花标准汤剂供试品溶液；/n（2）将芫花标准汤剂供试品溶液采用高效液相色谱仪分析，得到芫花标准汤剂HPLC特征图谱。/n

【技术特征摘要】
1.一种芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：
（1）精密称取芫花标准汤剂粉末，制备得到芫花标准汤剂供试品溶液；
（2）将芫花标准汤剂供试品溶液采用高效液相色谱仪分析，得到芫花标准汤剂HPLC特征图谱。


2.根据权利要求1所述的芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温为25~45℃，以甲醇为流动相A，以0.05~0.15%的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.6~1.4mL/min，检测波长为340~370nm，进样量为8~12μL。


3.根据权利要求2所述的芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：0~3min，流动相A的体积分数变化为20%~43%，流动相B的体积分数变化为80%~57%；3~25min，流动相A的体积分数变化为43%~45%，流动相B的体积分数变化为57%~55%；25~35min，流动相A的体积分数变化为45%~60%，流动相B的体积分数变化为55%~40%；35~50min，流动相A的体积分数变化为60%~95%，流动相B的体积分数变化为40%~5%。


4.根据权利要求1所述的芫花标准汤剂HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的供试品溶液的制备方法为：取芫花标准汤剂，研细，取0.05~0.15g，精密称定，精密加入60%~80%乙醇20~30mL，称定重量，超声处理20~40分钟，取出，放冷，用60%~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得。


5.一种芫花标准汤剂的成分含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）分别吸取对照品溶液和待测芫花标准汤剂样品溶液注入高效液相色谱仪，测定相应峰面积；
（2）通过外标法计算芫花素的含量；
（3）再通过一测多评法计算芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、芹菜素、羟基芫花素的含量。
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【专利技术属性】
技术研发人员：马瑞瑞，官永河，罗宇琴，陈向东，魏梅，孙冬梅，李国卫，王碧君，程学仁，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44