利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法技术

本发明专利技术涉及利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，该方法包括以下步骤：将明胶和海藻酸钠溶于水中，得到载体溶液，在载体溶液中加入蛋白酶混合液，搅拌溶解，得到复合蛋白酶溶液，将复合蛋白酶溶液滴到CaCl

Production of fish peptide by immobilized complex protease

【技术实现步骤摘要】
利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法
本专利技术属于蛋白酶解
，具体涉及一种利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法。
技术介绍
鱼类蛋白质含量高，必需氨基酸种类齐全，具有构成比例好，均衡的特点。鱼肽不仅是一种重要的氮源，而且在体内具有一系列生理功能，如能降低血液胆固醇，减少体脂，增强机体免疫力等。制备鱼肽的方法有多种，主要的方法是酶解。鱼蛋白酶解，是鱼蛋白在各种蛋白酶的作用下酶解成鱼肽。但是酶易变性、不耐高温、不易回收等缺点，可将酶固化后再进行酶解。如申请公布号为CN104531663A的专利技术专利，公开了鱿鱼碎肉制备高F值寡肽固定化酶水解方法，包括以下步骤：取壳聚糖粉末溶解于质量分数为0.1％至8％的HAc溶液，并且搅拌1小时至5小时后得到壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液加入到固定化液浸泡后低温静置；再将静置处理后的固定化液干燥处理，并收集微球；将微球放入乳酸缓冲溶液中混合均匀待用；固定化液含有NaOH和酒精；取风味酶粉溶解于0.02mol/L，pH7.0的磷酸盐缓冲溶液制成酶液；将酶液加入到海藻酸钠溶液中，充分搅拌均匀；注射器吸入上述混合液，注入3.0％的溶液中得到凝胶珠，并在继续溶液中固定化；将凝胶珠抽滤后得到硬化的凝胶珠，洗去表面的，即得到球状固定化风味酶；按重量份数取10至50份鱿鱼碎肉加入100至250份水制成匀浆，调pH至3，加入微球，在45至55℃条件下恒温水解1至5小时后制得第一步酶解多肽液；在第一步酶解多肽液中按每克加入1000至1900U的球状固定化风味酶进行第二步酶解；将步骤③处理得到的第二步酶解的产物在pH为3，流速为1BV/h进行脱芳处理后得到高F值寡肽。该方法用两种固化酶对鱿鱼碎肉进行两步酶解，酶解步骤较为复杂，酶解效率较低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，该方法提高了蛋白酶的热稳定性，蛋白酶容易收集并重复使用，且酶解效率较高。为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，包括以下步骤：1)将明胶和海藻酸钠溶于水中，得到载体溶液；2)在步骤1)中的载体溶液中加入蛋白酶混合液，搅拌溶解，得到复合蛋白酶溶液；3)将步骤2)中的复合蛋白酶溶液滴到CaCl2溶液中固定化成微粒，固定化过程中不断搅拌，固定化结束后过滤得到固定化复合酶颗粒；4)将步骤3)中的固定化复合酶颗粒与鱼浆混合，酶解并搅拌，酶解温度为40～60℃，酶解时间为2～10h，酶解结束后过筛分离出固定化复合酶颗粒。进一步地，步骤1)中所述明胶、海藻酸钠、水的质量比为(0.5～2):(1～3):100。进一步地，步骤2)中蛋白酶混合液为碱性蛋白酶和胰蛋白酶的一种或两种，碱性蛋白酶与载体溶液的质量比为0～8:100，胰蛋白酶与载体溶液的质量比为0～5:100。进一步地，步骤3)中微粒的粒径为0.5～2.5mm。进一步地，步骤3)中CaCl2溶液中CaCl2与水的质量比为(0.2～3.5):100。进一步地，步骤3)中固定化时间为30～50min。进一步地，步骤4)中鱼浆由新鲜鱼与水按质量比1:(0.5～5)打浆、蒸煮而得，固定化复合酶颗粒与新鲜鱼的质量比为(50～150):1000。进一步地，步骤4)中分离出固定化复合酶颗粒后，将酶解产物离心并经微孔膜除杂纯化，之后浓缩，再经喷雾干燥，即得鱼肽粉。进一步地，步骤4)中浓缩时将纯化后的酶解产物浓缩至固体含量为10～50％。进一步地，步骤4)中过筛分离出固定化复合酶颗粒时，先用10目筛回收固定化复合酶颗粒，再用40目分离二次使用的固定化复合酶颗粒。本专利技术的有益效果：本专利技术的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，将蛋白酶固定成固定化复合酶颗粒，之后再对鱼浆进行酶解，可提高蛋白酶的热稳定性，且固定化复合酶颗粒可回收再利用，降低生产成本。此外，使用固定化复合酶颗粒对鱼浆进行一次性酶解，酶解效率较高。本专利技术的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，将两种蛋白酶，包括碱性蛋白酶和胰蛋白酶，一同固化在固定化复合酶颗粒中，制备工艺简单，降低生产成本。本专利技术的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，将新鲜鱼打成鱼浆，可增大固定化复合酶颗粒与待酶解的鱼蛋白的接触面积，提高酶解效率。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1本实施例的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，包括以下步骤：1)取0.5kg明胶和2kg海藻酸钠，溶于100kg的温度为60℃的水中，得到载体溶液。2)在步骤1)中的载体溶液中加入蛋白酶混合液，蛋白酶混合液为碱性蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，碱性蛋白酶、胰蛋白酶与载体溶液的质量比为4:2:100，搅拌溶解，得到复合蛋白酶溶液。3)将步骤2)中的复合蛋白酶溶液滴到CaCl2溶液中固定化成粒径为0.5～2.5mm微粒，CaCl2溶液中CaCl2与水的质量比为1.5:100，固定化过程中不断搅拌，固定化时间为30min，固化温度为25℃，固定化结束后用40目筛过滤得到固定化复合酶颗粒，并用清水漂洗两次。4)将新鲜鱼与水按质量比1:3打浆、蒸煮，得到鱼浆，将步骤3)中的固定化复合酶颗粒与鱼浆混合，固定化复合酶颗粒与新鲜鱼的质量比为50:1000，酶解并搅拌，酶解温度为55℃，酶解时间为4h，酶解结束后过40目筛分离出固定化复合酶颗粒，以供二次使用。分离出固定化复合酶颗粒后，将酶解产物离心，离心转速为3000rpm，离心时间为10mim，离心除去鱼油和沉淀，并经微孔膜除杂纯化，之后在75℃条件下真空浓缩，浓缩时将纯化后的酶解产物浓缩至固体含量为30％，再经喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为180℃，出风温度90℃，即得鱼肽粉。实施例2本实施例的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，包括以下步骤：1)取0.5kg明胶和2kg海藻酸钠，溶于100kg的温度为60℃的水中，得到载体溶液。2)在步骤1)中的载体溶液中加入蛋白酶混合液，蛋白酶混合液为碱性蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，碱性蛋白酶、胰蛋白酶与载体溶液的质量比为4:2:100，搅拌溶解，得到复合蛋白酶溶液。3)将步骤2)中的复合蛋白酶溶液滴到CaCl2溶液中固定化成粒径为2～2.5mm微粒，CaCl2溶液中CaCl2与水的质量比为2:100，固定化过程中不断搅拌，固定化时间为50min，固定化温度为28℃，固定化结束后用20目筛过滤得到固定化复合酶颗粒，并用清水漂洗两次。4)将新鲜鱼与水按质量比1:3打浆、蒸煮，得到鱼浆，将步骤3)中的固定化复合酶颗粒与已经使用过一次的固定化复合酶颗粒按照质量比为1:1混合，之后再与鱼浆混合，固定化复合酶颗粒和已经使用过一次的固定化复合酶颗粒的混合物与新鲜鱼的质量比为50:1000，酶解并搅拌，酶解温度为55℃，酶解时间为4h，酶解结束后过10目筛回收粒径2-2.5mm的固定化复合酶颗粒，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将明胶和海藻酸钠溶于水中，得到载体溶液；/n2)在步骤1)中的载体溶液中加入蛋白酶混合液，搅拌溶解，得到复合蛋白酶溶液；/n3)将步骤2)中的复合蛋白酶溶液滴到CaCl

【技术特征摘要】
1.利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将明胶和海藻酸钠溶于水中，得到载体溶液；
2)在步骤1)中的载体溶液中加入蛋白酶混合液，搅拌溶解，得到复合蛋白酶溶液；
3)将步骤2)中的复合蛋白酶溶液滴到CaCl2溶液中固定化成微粒，固定化过程中不断搅拌，固定化结束后过滤得到固定化复合酶颗粒；
4)将步骤3)中的固定化复合酶颗粒与鱼浆混合，酶解并搅拌，酶解温度为40～60℃，酶解时间为2～10h，酶解结束后过筛分离出固定化复合酶颗粒。


2.根据权利要求1所述的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，其特征在于，步骤1)中所述明胶、海藻酸钠、水的质量比为(0.5～2):(1～3):100。


3.根据权利要求1所述的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，其特征在于，步骤2)中蛋白酶混合液为碱性蛋白酶和胰蛋白酶的一种或两种，碱性蛋白酶与载体溶液的质量比为0～8:100，胰蛋白酶与载体溶液的质量比为0～5:100。


4.根据权利要求1所述的利用固定化复合蛋白酶生产鱼肽的方法，其特征在于，步骤3)中微粒的粒径为0.5～2.5mm。


5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：劳泰财，余忠丽，恽辉，王俊青，程林春，
申请(专利权)人：广东希普生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44