【技术实现步骤摘要】
犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆及其构建方法和应用
本专利技术涉及一种感染性cDNA克隆及其构建方法和应用，特别涉及一种犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆及其构建方法和应用，本专利技术属于生物
技术介绍
犬瘟热(CanieDistemper，CD)是由犬瘟热病毒(CanieDistemperVirus，CDV)感染犬、水貂等多种肉食动物而引起的一种高度接触性传染病。该病传染性高，发病率高，临床症状多样，感染后期容易形成继发和混合感染。近年来，犬瘟热病毒自然感染宿主不断扩大。据报道，野生动物老虎、狮子、豹和海豹，甚至大熊猫群体中都暴发过犬瘟热。2015年1月，我国陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心圈养的5只大熊猫因感染CDV强毒而死亡，冯娜等在实验室对组织病料进行了CDV分离鉴定，及其全基因组序列测定与进化分析，证实：此毒株属于AisaI型强毒株，命名为giantpanda/SX/2014(FENGNA,YUYICONG,TIECHENG.W,etal.Fatalcaninedistempervirus...
【技术保护点】
1.一种犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取冻存的犬瘟热病毒CDV-3株细胞培养悬液，提取总RNA，反转录合成cDNA；/n(2)将CDV-3的全长cDNA分成5个片段进行RT-PCR扩增，扩增产物依次命名为：F1、F2、F3、F4和F5，其中，用于扩增F1片段的引物为QF1-F以及QF1-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示，用于扩增F2片段的引物为QF2-F以及QF2-R，其核苷酸序列如SEQ IDNO.3以及SEQ ID NO.4所示，用于扩增F3片段的引物为QF3-F以及QF3-...
【技术特征摘要】
1.一种犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取冻存的犬瘟热病毒CDV-3株细胞培养悬液，提取总RNA，反转录合成cDNA；
(2)将CDV-3的全长cDNA分成5个片段进行RT-PCR扩增，扩增产物依次命名为：F1、F2、F3、F4和F5，其中，用于扩增F1片段的引物为QF1-F以及QF1-R，其核苷酸序列如SEQIDNO.1以及SEQIDNO.2所示，用于扩增F2片段的引物为QF2-F以及QF2-R，其核苷酸序列如SEQIDNO.3以及SEQIDNO.4所示，用于扩增F3片段的引物为QF3-F以及QF3-R，其核苷酸序列如SEQIDNO.5以及SEQIDNO.6所示，用于扩增F4片段的引物为QF4-F以及QF4-R，其核苷酸序列如SEQIDNO.7以及SEQIDNO.8所示，用于扩增F5片段的引物为QF5-F以及QF5-R，其核苷酸序列如SEQIDNO.9以及SEQIDNO.10所示；
(3)经酶切拼接，将5个片段顺次插入到真核载体中，获得克隆有CDV-3株全长cDNA的质粒，即犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述的真核载体为改造后的真核载体pcDNA3.1，改造后的真核载体pcDNA3.1中多克隆位点变为NheI-NotI-BsiwI-Bsp1407I-CpoI-部分丁型肝炎核酶序列，改造后的pcDNA3.1称为pcDNA3.2。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，pcDNA3.1通过以下步骤进行改造：用内切酶PmeI酶切pcDNA3.1，回收大片段后，与事先制备的双链DNA连接，其中所述的双链DNA的上链如SEQIDNO.11所示，所述的双链DNA的下链如SEQIDNO.12所示，得到改造后真核载体pcDNA3.2。
4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述的CDV-3株全长cDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示。
5.按照权利要求1-4任一项所述的方法构建得到的犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆。
6.权利要求5所述的犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆在拯救犬瘟热病毒rCDV-3株中的应用。
7.一种犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆的病毒拯救方法，其特征在于，包括以下步骤：构建表达犬瘟热病毒CDV-3株N、P、L蛋白的三个辅助质粒，利...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛向红，闫喜军，卜研，陈杰，赵建军，赵传芳，胡博，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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