表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种表达非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）p54蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的基因工程疫苗及构建方法。对rPRRSV‑p54感染孔进行间接免疫荧光，发现视野下出现了抗PRRSV N蛋白的特异性荧光及抗ASFV p54蛋白的特异性荧光。说明该表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组PRRSV可以保证外源蛋白ASFV的p54蛋白得到良好的高效的稳定的表达。而有研究表明p54是重要的抗原蛋白，能够用于ASF的疫苗研制。

Construction and application of recombinant porcine reproductive and respiratory syndrome virus expressing African swine fever virus P54 protein

【技术实现步骤摘要】
表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法及其应用
本专利技术属于生物工程领域，具体地说，涉及一种病毒的重组质粒和基因工程疫苗，更具体地说，涉及一种能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白的PRRS病毒重组质粒和基因工程疫苗。
技术介绍
ASFV是ASFV感染家猪或者野猪引起的一种急性、烈性、出血性，高度接触性传染病。其特征是病程短、高热和出血性病变，急性感染死亡率高达100%。严重威胁全球养猪业。目前尚没有有效的疫苗和治疗方法。自2018年8月中国辽宁沈阳首次发生ASF疫情，随后迅速蔓延至全国二十多个省份，给中国的养猪业造成了迄今最为惨重的经济损失。一年时间内，我国32个省、市、自治区均发生ASF疫情。ASF疫情使我国生猪存栏量和出栏量下降20%-50%，许多猪场因ASF疫情完全覆没，严重削弱了我国猪肉的有效供给，导致我国生猪和猪肉价格均出现翻番。从ASF在中国流行的总体情况来看，ASF疫情防控效果不容乐观，疫情仍然处于持续扩散的状态。因此疫苗研发刻不容缓。大量的ASFV疫苗研究结果表明，灭活疫苗对ASFV没有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述方法为根据ASFV p54蛋白的编码基因E183L的核苷酸序列以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的基因序列设计SOE PCR引物，在HuN4-F112的ORF1b和ORF2之前插入ASFV p54蛋白的编码基因E183L的序列，并在外源基因3’端下游插入此病毒的转录调控序列6（TRS6）；将扩增出的嵌合p54蛋白的编码基因片段通过Asc I和EcoR V双酶切，然后回收PCR产物连接到HuN4-F112的Asc I和EcoR V双酶切载体上，从而获得了嵌合重组质粒pA-ASFV-p54。/...

【技术特征摘要】
1.一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述方法为根据ASFVp54蛋白的编码基因E183L的核苷酸序列以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的基因序列设计SOEPCR引物，在HuN4-F112的ORF1b和ORF2之前插入ASFVp54蛋白的编码基因E183L的序列，并在外源基因3’端下游插入此病毒的转录调控序列6（TRS6）；将扩增出的嵌合p54蛋白的编码基因片段通过AscI和EcoRV双酶切，然后回收PCR产物连接到HuN4-F112的AscI和EcoRV双酶切载体上，从而获得了嵌合重组质粒pA-ASFV-p54。


2.如权利要求1所述的一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述嵌合重组质粒pA-ASFV-p54是能够稳定表达ASFVp54蛋白的高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112重组病毒。


3.如权利要求1所述的一种表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法，所述嵌合重组质粒pA-ASFV-p54的全长序列如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：童光志，高飞，童武，李国新，姜一峰，郑浩，周艳君，虞凌雪，李丽薇，刘长龙，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：上海;31