【技术实现步骤摘要】
打靶载体及构建白喉毒素调控清除巨噬细胞的F4/80-DTR转基因小鼠的方法和应用
本专利技术涉及动物模型构建领域，主要是一种打靶载体及构建白喉毒素调控清除巨噬细胞的F4/80-DTR转基因小鼠的方法和应用。
技术介绍
单核巨噬细胞系统包括骨髓中的前单核细胞，外周血中的单核细胞和组织中的巨噬细胞。近年来研究发现，大部分组织中的巨噬细胞是组织固有的，而且早在胚胎发育时期就形成了，并且在组织中自我更新和维持稳态，而与成年后外周血中单核细胞无关。不同组织中的巨噬细胞可以有组织特异性的功能，如脑中的巨噬细胞(即小胶质细胞)能够在发育过程中修剪突触，脾红髓巨噬细胞能够吞噬红细胞回收血红素，腹腔巨噬细胞通过与腹膜B细胞相互作用调节肠道免疫球蛋白IgA的产生。在癌症的发生发展中，肿瘤相关巨噬细胞也发挥了重要作用。因此，研究组织中的组织固有巨噬细胞的功能具有重要意义。研究巨噬细胞，一个很重要的实验就是在体内清除巨噬细胞。现有的较为成熟的巨噬细胞清除体系主要有氯化钆和氯膦酸二钠脂质体法，其主要原理是巨噬细胞吞噬氯化钆或氯膦酸二钠...
【技术保护点】
1.一种打靶载体，其特征在于：所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.8所示，命名为F4/80 5HA L-IRES-DTR-PGK-EM7-NEO-F4/80 3HA L-MCL-HSV TK载体。/n
【技术特征摘要】
1.一种打靶载体，其特征在于：所述靶向打靶载体序列如SEQIDNO.8所示，命名为F4/805HAL-IRES-DTR-PGK-EM7-NEO-F4/803HAL-MCL-HSVTK载体。
2.一种用于构建如权利要求1所述打靶载体的提取载体，其特征在于：所述提取载体序列如SEQIDNO.7所示，命名为载体retrieval5HA-retrieval3HA-MCL-HSVTK。
3.一种提取载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)以RP23-212F14BACDNA为模板，利用序列如SEQIDNO.1所示的正向引物和序列如SEQIDNO.2所示的反向引物进行PCR，扩增出序列如SEQIDNO.3所示的基因片段F4/805’侧同源臂；以RP23-212F14BACDNA为模板，利用序列如SEQIDNO.4所示的正向引物和序列如SEQIDNO.5所示的反向引物进行PCR，扩增出序列如SEQIDNO.6所示的基因片段F4/803’侧同源臂；
(2)将retrieval5HA和retrieval3HA克隆至带阴性选择标记的载体MCL-HSVTK，得到序列如SEQIDNO.7所示的打靶载体retrieval5HA-retrieval3HA-MCL-HSVTK。
4.一种打靶载体的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
(1)电穿孔法将质粒pRED/ET转化入BACCloneF4/80-IRES-DTR-PGK-EM7-Neo，并用L-阿拉伯糖诱导Red/ET表达；
(2)电穿孔法将利用SpeI酶切线性化的retrieval5HA-retrieval3HA-MCL-HSVTK提取载体转化入上述表达RED/ET的BACCloneF4/80-IRES-DTR-PGK-EM7-Neo，同源重组得到序列如SEQIDNO.8所示的带有F4/805’同源臂(～20kb)和3’同源臂(～2kb)的打靶载体，命名为打靶载体F4/805HAL-IRES-DTR-PGK-EM7-NEO-F4/803HAL-MCL-HSV...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛剑鹏，汤江辉，白雪莉，梁廷波，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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