一种链置换引物介导不对称PCR生成单链DNA的方法技术

本发明专利技术属于分子生物技术领域，具体公开了一种链置换引物介导不对称PCR生成单链DNA的方法，本发明专利技术通过双链引物介导的链置换反应，将上游引物设计为双链引物，该引物末端分别标记荧光基团和淬灭基团，这样设计减少了体系的复杂性，增加了引物的特异性并提高了单链DNA的产量，通过荧光强度的积累可以直观的判断出不对称PCR的指数扩增期和线性扩增期。

A method of single strand DNA generation by asymmetric PCR mediated by strand replacement primers

【技术实现步骤摘要】
一种链置换引物介导不对称PCR生成单链DNA的方法
本专利技术涉及分子生物
，特别是涉及一种链置换引物介导不对称PCR生成单链DNA的方法。
技术介绍
单核苷酸多态性(SNPs)是单个核苷酸的改变所引起的DNA序列多态性，是人类基因组中最常见、最稳定的变异形式。人类基因组中存在着约30-1000万个SNPs位点，这些SNPs影响着人类对疾病的易感性以及对病原体、化学品、药品、疫苗等的反应。因此SNPs的检测在疾病的风险性评估、诊断、治疗，实现精准医疗等方面均有巨大的价值。近年来发展的基于核酸扩增和杂交的核酸快速检测技术为SNPs的检测、精准医疗的实施提供了新的契机，其核心包括：获得大量具有杂交活性的靶基因以实现临床样本的高灵敏检测；获得与靶基因相匹配的特异检测探针以实现检测信号的准确输出。核酸扩增是获得大量具有杂交活性靶基因的主要技术，如聚合酶链式反应(PCR)，依赖解旋酶的等温扩增(HDA)，环介导核酸等温扩增(LAMP)，链替代扩增(SDA)，切刻内切酶核酸恒温扩增(NAR)等。这些技术的发展为从低拷贝样本中获得大量靶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种链置换引物介导不对称PCR生成单链DNA的方法，其特征在于，将上游引物探针设计为双链引物，采用双链引物介导的链置换反应进行不对称PCR，生成单链DNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种链置换引物介导不对称PCR生成单链DNA的方法，其特征在于，将上游引物探针设计为双链引物，采用双链引物介导的链置换反应进行不对称PCR，生成单链DNA。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述上游引物探针的末端分别标记有荧光基团和淬灭基团。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述不对称PCR扩增程序包括如下步骤：
(1)预变性；(2)若干个变性、引物退火和引物延伸的PCR扩增。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述上游引物探针的荧光基团标记序列为：5’-FAM-ATTACAGGGTCAACTGCTATGA-3’，所述上游引物探针的淬灭基团标记序列为：5’-CAGTTGACCCTGTAAT-BHQ-3’；所述下游引物的序列为：5’-CCCAATCCCCCAGCAGGCTCCG-3’；
检测探针的序列为：
5’-SH(CH2)6-CAGGCAAACTCTGAACTGA-methyleneblue-3’。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述扩增产物的长度为150-300nt；
和/或，所述上游引物探针与下游引物的摩尔比为(4-10)∶1。


6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的循环数为30-50个。


7.根据权利要求1-6任一项所述的方法在鉴定乙醛脱氢酶2上的应用，其特征在于：包括如下步骤：
(1)人全血基因组核酸的提取；
(2)设计并合成ALDH2的特异性引物和探针：
上游引物探针为末端标记有荧光基团和淬灭基团的双链引物，所述上游引物探针的荧光基团标记序列为：5’-FAM-ATTACAGGGTCAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：张章，姚娟，张皛珺，
申请(专利权)人：西南医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：四川;51