一种VRE核酸提取和检测试剂及方法技术

本发明专利技术揭示了一种VRE核酸提取和检测试剂及方法，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲体系，VanA病原体、VanB病原体和VanC病原体的特异性引物及探针，以及内标质控的特异性引物及探针。本发明专利技术提供了一种针对VRE核酸的提取、纯化和检测分型的试剂，该试剂灵敏度高、使用操作简便，耗时短，对操作人员的专业要求低，且整个封装试剂可以在常温下运输和储存。

A reagent and method for VRE nucleic acid extraction and detection

【技术实现步骤摘要】
一种VRE核酸提取和检测试剂及方法
本专利技术涉及一种核酸提取纯化领域，尤其是涉及一种VRE核酸提取和检测试剂及方法。
技术介绍
耐万古霉素肠球菌(Vancomycin-ResistantEnterococci，VRE)是医院获得性感染中一种越来越常见且难以治疗的病原菌。VRE已成为全球多数国家院内感染的主要病原菌之一，临床上分离的主要为粪肠球菌和屎肠球菌。VRE的基因型有VanA、VanB、VanC等，不同基因型对万古霉素和替考拉宁的耐药程度不同：VanA型对万古霉素和替考拉宁均高水平耐药，VanB型对万古霉素不同程度耐药，对替考拉宁敏感；VanC1、vanC2/3型均低水平耐药，属天然耐药。不同的人群、医院、环境区域、时期，VanA、VanB、VanC等VRE基因型的流行率也不同。VRE耐药谱广，感染后药物控制难度大，而且能将其耐药基因转移到其他病原微生物，给院内感染的控制及预防多重耐药菌株的产生带来极大挑战。因此VRE对人类构成严重威胁的不仅是VRE本身，还包括其耐药基因转移所产生的一些难以治疗的新耐药菌株。<br>VRE感染的早本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种VRE核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，所述核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，所述核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲体系、VRE不同基因型病原体的特异性引物及探针，以及内标质控的特异性引物及探针，所述VRE不同基因型病原体包括VanA病原体、VanB病原体和VanC病原体。/n

【技术特征摘要】
1.一种VRE核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，所述核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，所述核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲体系、VRE不同基因型病原体的特异性引物及探针，以及内标质控的特异性引物及探针，所述VRE不同基因型病原体包括VanA病原体、VanB病原体和VanC病原体。


2.根据权利要求1所述的VRE核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述核酸洗涤液包括第一核酸洗涤液和第二核酸洗涤液。


3.根据权利要求2所述的VRE核酸提取和检测试剂，其特征在于，
所述细胞裂解液包括：10～20mM的Tris-HCl、4～8mMEDTA、1.5～2.5M盐酸胍，以及内质控质粒模板；
所述第一核酸洗涤液包括：10～20mM的Tris-HCl、2.5～5mM的EDTA、1～1.5M的盐酸胍；
所述第二核酸洗涤液包括：10～20mM的Tris-HCl、2～3mM的EDTA；
所述核酸洗脱液包括：10～20mM的Tris-HCl。


4.根据权利要求1所述的VRE核酸提取和检测试剂，其特征在于，
所述可冻干的多重PCR反应缓冲体系包括：50～75mM的Tris-Hcl、20～30mM的KCl、15～30mM的(NH4)2SO4、3.5～4.5mM的MgCl2、0.2mM的dATP、0.4mM的dUTP、0.2mM的dCTP、0.2mM的dGTP、1.5～3U的DNA聚合酶、0.1～0.2U的TS-UNG酶、0.4～0.5M的海藻糖、0.001～0.002M的PEG8000、0.05～0.08M甘露醇。


5.根据权利要求1所述的VRE核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述VRE不同基因型病原体的特异性引物及探针的序列，以及内标质控的特异性引物及探针的序列为：






其中，F为上游引物序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：解信美，李红东，苗保刚，李明，彭年才，
申请(专利权)人：苏州天隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32