一种甘薯薯瘟病菌的RPA检测引物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供一种甘薯薯瘟病菌的RPA检测引物、试剂盒及检测方法，专用于甘薯薯瘟病菌的特异性快速检测，所述RPA检测引物，包括上游引物F，如SEQ ID No:1所示；下游引物R，如SEQ ID No:2所示；试剂盒含有所述RPA检测引物检测用成套核酸；该方法通过提取甘薯薯瘟病菌的DNA、利用试剂盒进行RPA恒温扩增，扩增20min，扩增后进行琼脂糖凝胶电泳，产生一条313bp特异性条带为阳性扩增。本发明专利技术具有扩增快速高效、特异性好、操作简便、不需要特殊仪器、无需对样品进行复杂处理、适合现场检测等优点，为甘薯薯瘟病早期诊断提供技术依据。

RPA detection primer, kit and detection method of sweet potato blast

【技术实现步骤摘要】
一种甘薯薯瘟病菌的RPA检测引物、试剂盒及检测方法
本专利技术涉及农作物病害检测、鉴定及防治
，具体涉及一种甘薯薯瘟病菌的RPA检测引物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
由甘薯青枯菌(Ralstoniasolanacearum)引起的甘薯薯瘟病是甘薯生产上一种重要的土传细菌性病害，主要分布在我国的南方甘薯产区(福建、广东、广西、台湾)，甘薯薯瘟病能使甘薯减产30-80％，严重时可达100％，全田绝收。在我国，甘薯薯薯瘟别列为检疫性植物病害。近年来甘薯薯瘟病在我国国南方甘薯主产区不断扩大和蔓延，严重威胁甘薯的生产。甘薯薯瘟病菌对甘薯的侵染过程普遍为从甘薯根茎部伤口或自然孔口侵入，先在皮层、细胞间隙等处定殖，随后在植物导管及附近组织内大量繁殖，并分泌胞外多糖堵塞导管并破坏周围组织，最终使植物萎蔫死亡，典型症状就是植株在萎蔫的状态下依然保持青绿颜色。但是，在发病中后期，甘薯茎秆变为褐色、黑褐色，植株萎蔫，与其他甘薯病害症状类似，如黑腐病、茎腐病等，且植物组织中微生物种类繁多。由于目前缺乏有效的病害早期诊断技术，发病后盲目大量使用药本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘薯薯瘟病菌的RPA检测引物，其特征在于：所述RPA检测引物包括如下一个引物对：/n上游引物F：5'-TTACCAGTTAAAGAATGACCCAAGACATCCAGTG-3'，如SEQ ID No:1所示；/n下游引物R:5'-TCCTATTACAAGAGCAATCAACCAACCTCCAAGA-3'，如SEQ ID No:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种甘薯薯瘟病菌的RPA检测引物，其特征在于：所述RPA检测引物包括如下一个引物对：
上游引物F：5'-TTACCAGTTAAAGAATGACCCAAGACATCCAGTG-3'，如SEQIDNo:1所示；
下游引物R:5'-TCCTATTACAAGAGCAATCAACCAACCTCCAAGA-3'，如SEQIDNo:2所示。


2.一种RPA检测甘薯薯瘟菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述RPA检测引物的成套核酸。


3.根据权利要求2所述的一种RPA检测甘薯薯瘟菌的试剂盒，其特征在于：所述上游引物F、下游引物R的浓度分别为10μM。


4.根据权利要求2或3所述的一种RPA检测甘薯薯瘟菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括TwistAmpTMbasicKit试剂，所述TwistAmpTMbasicKit试剂包括无DNase和RNase的H2O、缓冲液、醋酸镁溶液、阳性DNA、以及含有冻干酶粉的反应管。


5.根据权利要求4所述的一种RPA检测甘薯薯瘟菌的试剂盒，其特征在于：所述醋酸镁溶液浓度为280mM；所述冻干重组酶粉由45000nggp32、7500nguxsX和1500nguvsY构成。


6.根据权利要求4所述的一种RPA检测甘薯薯瘟菌的试剂盒在检测生产中的甘薯薯瘟病菌的应用。


7.一种甘薯薯瘟病菌的RPA快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤(1)、取新鲜采集的薯瘟病害...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱思鑫，李华伟，张鸿，刘中华，罗文彬，纪荣昌，邱永祥，许泳清，李国良，林赵淼，许国春，汤浩，
申请(专利权)人：福建省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35