一种无乳链球菌检测方法及其检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了无乳链球菌检测方法，包括设计了如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的引物对序列和生物素标记的一号探针和氨基修饰连接磁珠的二号探针序列，通过对样品中的DNA进行PCR扩增、核酸外切酶酶切、与一号探针进行链接、与二号探针进行杂交、进行发光检测的方式，可以高效、高特异性地检测无乳链球菌，具有较广的应用空间。

A detection method and kit for Streptococcus lactis

【技术实现步骤摘要】
一种无乳链球菌检测方法及其检测试剂盒
本专利技术涉及体外检测
，具体涉及无乳链球菌检测方法及其检测试剂盒。
技术介绍
无乳链球菌，又称为B组链球菌(GroupBStreptococcus,GBS)，是一种严重威胁新生儿的细菌，其主要存在于孕妇阴道的下1/3处，阴道入口处和肛门周围，而在阴道上1/3处和宫颈部相对较少。平时取阴道内分泌物做病原微生物培养时，一般都是取宫颈内口的分泌物做标本，但做无乳链球菌培养时，应该取阴道下1/3处的分泌物做标本检测，否则容易漏检。对于孕妇来说，这个细菌可以引起产前，产后的生殖道感染，主要表现为急性绒毛膜羊膜炎、产后子宫内膜炎、肺炎、脑膜炎、肝脓肿和败血症等。目前常用的检测无乳链球菌的方法是CAMP法，在血琼脂平板上，先以β-溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将被检查部位所取出的培养液中的待检菌与前一划线作垂直接种，两者应相距1cm，于35℃孵育18-24h，观察结果。在两种细菌划线交接处出现箭头型溶血区为阳性。该检测方法所需成本较低，操作简单的优势，但是检测所需的工作量较大，且不同培养基影响较大，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无乳链球菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)选取无乳链球菌特异性DNA序列片段140-160bp，设计引物序列和探针序列：/n包括设计上游引物、下游引物、一号探针和二号探针；/n上游引物的序列如SEQ ID No.1所示；下游引物的序列如SEQ ID No.2所示：/n一号探针为生物素标记探针，二号探针为氨基修饰探针且与磁珠连接；/n2)使用上游引物和下游引物PCR扩增DNA并用核酸外切酶酶切，得到酶切产物：/n3)向步骤2)的酶切产物中，加入吖啶酯溶液和一号探针的反应液，杂交，得到一次杂交产物；/n4)向步骤3)的一次杂交产物中，加入二号探针，反应后并于冰上冷却，在磁力架上...

【技术特征摘要】
1.一种无乳链球菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)选取无乳链球菌特异性DNA序列片段140-160bp，设计引物序列和探针序列：
包括设计上游引物、下游引物、一号探针和二号探针；
上游引物的序列如SEQIDNo.1所示；下游引物的序列如SEQIDNo.2所示：
一号探针为生物素标记探针，二号探针为氨基修饰探针且与磁珠连接；
2)使用上游引物和下游引物PCR扩增DNA并用核酸外切酶酶切，得到酶切产物：
3)向步骤2)的酶切产物中，加入吖啶酯溶液和一号探针的反应液，杂交，得到一次杂交产物；
4)向步骤3)的一次杂交产物中，加入二号探针，反应后并于冰上冷却，在磁力架上使用清洗液将多余的吖啶酯溶液和一号探针的反应液洗去；得到二次杂交产物；
5)向二次杂交产物中加入激发液，检测光信号值：所述激发液为含有过氧化氢的NaOH溶液。


2.如权利要求1所述的无乳链球菌检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述下游引物的5’端连接有Phos磷酸基团。


3.如权利要求1所述的无乳链球菌检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述一号探针序列如SEQIDNo.3所示。


4.如权利要求3所述的无乳链球菌检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述一号探针的3’端连接有生物素。


5.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：广州中科抗体生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44