脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，试剂盒包括：核酸快速提取试剂、PCR扩增试剂、脑炎脑膜炎核酸检测试剂、阳性对照品、阴性对照品；脑炎脑膜炎核酸检测试剂包括：肺炎链球菌基因的扩增引物和探针；脑膜炎奈瑟菌基因的扩增引物和探针；流感嗜血杆菌基因的扩增引物和探针；内参RNP基因的扩增引物和探针。同时还提供了脑炎脑膜炎核酸分型检测方法。本发明专利技术引入了脑炎脑膜炎特异性的多通道引物探针，既可减少工作量，又避免其他检测方法特异性不高、容易漏诊和误诊的问题，还能实现同一体系多重同时检测三种病原体且各通道引物探针相互无干扰，具有敏感性好、特异性高、准确可靠、快速方便等优势，从而快速诊断是否感染三种病原体。

Detection kit and method of nucleic acid typing for meningitis

【技术实现步骤摘要】
脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，涉及一种RT-PCR扩增技术，具体涉及一种脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
脑膜炎和脑炎是一类可由细菌，病毒，酵母菌引起的主要威胁儿童生命的综合征。发病率和死亡率很高，尤其是细菌真菌类脑膜炎。我国五岁以下的儿童中的急性细菌脑膜炎的发病率为(6.95～22.3)/10,000，脑膜炎和脑炎都是由于中枢神经系统的感染所致，有40％的病人感染后，病程进展较快，直接导致死亡，存活者也会留下神经功能方面的缺陷。脑炎和脑膜炎可能同时存在，成为脑炎脑膜炎，或者有相同的症状，例如头痛发热。据报道，肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌，是最为流行的三种病原菌。肺炎链球菌(pneumococcus)属于革兰染色阳性菌，肺炎球菌主要的致病物质是肺炎球菌溶血素及荚膜。荚膜具有抗原性，是肺炎链球菌分型的依据。此菌可引起大叶性肺炎、脑膜炎、支气管炎等疾病，是世界范围内引起儿童和成人感染脑膜炎的主要病原菌，澳大利亚在2016年共有1636例肺炎球菌的病例，被诊断为脑膜炎的共有12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：/n所述试剂盒包括核酸快速提取试剂、PCR扩增试剂、脑炎脑膜炎核酸检测试剂、阳性对照品、阴性对照品。/n

【技术特征摘要】
1.一种脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：
所述试剂盒包括核酸快速提取试剂、PCR扩增试剂、脑炎脑膜炎核酸检测试剂、阳性对照品、阴性对照品。


2.根据权利要求1所述的脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：
所述核酸快速提取试剂包括：pH为10.0的400mMTris-HCl、5vol％的Tween20、500mM异硫氰酸胍、40mMKCl、pH为8.0的4mMEDTA。


3.根据权利要求1所述的脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：
所述PCR扩增试剂包括：1.5×PCRbuffer、4mMMgCl2、pH为10.0的50mMTris-HCl、0.5mMdNTP、0.02U/μlDNA聚合酶、5wt％BSA。


4.根据权利要求1所述的脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：
所述阳性对照品包括：将肺炎链球菌的特异性扩增片段、脑膜炎奈瑟菌的特异性扩增片段、流感嗜血杆菌的特异性扩增片段和内参RNP的特异性扩增片段分别连接到四个pUC57质粒载体上，四个质粒分别用DEPC水进行106倍稀释，然后将四个稀释后的质粒等体积混合，作为最终的阳性对照。


5.根据权利要求1所述的脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：
所述阴性对照品为DEPCH2O。


6.根据权利要求1所述的脑炎脑膜炎核酸分型检测试剂盒，其特征在于：
所述脑炎脑膜炎核酸检测试剂包括：肺炎链球菌基因的扩增引物F1、R1和探针P1；脑膜炎奈瑟菌基因的扩增引物F2、R2和探针P2；流感嗜血杆菌基因的扩增引物F3、R3和探针P3；内参RNP基因的扩增引物F4、R4和探针P4；
探针P1的5’端标记有报告荧光染料FAM，3’端标记有淬灭荧光染料BHQ；
探针P2的5’端标记有报告荧光染料VIC，3’端标记有淬灭荧光染料BHQ；
探针P3的5’端标记有报告荧光染料CY5，3’端标记有淬灭荧光染料BHQ；
探针P4的5’端标记有报告荧光染料ROX，3’端标记有淬灭荧光染料BHQ；
引物探针序列为：
肺炎链球菌-F1：5’-AAGCCGTTCTCAATATCATGCTTA-3’
肺炎链球菌-R1：5’-CACGTTGACCCTTATCCATATCTTG-3’
肺炎链球...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨孙孝，朱兆奎，
申请(专利权)人：上海伯杰医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31