一种细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种革兰氏阴性细菌及革兰氏阳性细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括反应液、检测膜条、荧光检测液，所述反应液包括反应液I、反应液II、反应液III；所述荧光检测液包括用于标记捕获探针的表面偶联有链霉亲和素的量子点；所述检测膜条包含尼龙膜及固定在尼龙膜上的捕获探针；本发明专利技术的有益效果在于：提供了一种高通量，高灵敏度、高特异性的用于细菌耐药基因量子点芯片核酸检测的试剂盒及方法，比现有的显色法基因芯片步骤少，检测时间明显缩短，同时比有机荧光基因芯片设备成本低，利于临床的推广。

A DNA detection kit and method of bacterial resistance gene quantum dot chip

【技术实现步骤摘要】
一种细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒及检测方法，尤其可针对革兰氏阴性细菌及革兰氏阳性细菌耐药基因检测。
技术介绍
当前，随着抗菌药物的大量使用，导致出现大量多重耐药(MDR)、广泛耐药(XDR)和全耐药(PDR)的细菌，细菌耐药呈多重性趋势且形式多样、变化迅速，而新药的研发速度往往滞后于细菌耐药性产生的速度，因而耐药机制的快速检测具有重要意义。G-菌的耐药机制主要包含四种：酶对抗生素的修饰或破坏(主要为β-内酰胺酶)、膜通透性改变、主动泵出机制、新靶标的改变或产生，而β-内酰胺酶是一类可特异性水解β-内酰胺环的酶，是导致细菌尤其是G-菌耐药的最主要的机制，在各类耐药机制中占80％。迄今为止报道β-内酰胺酶已超过200种，目前主要将β-内酰胺酶分为四类(A/B/C/D)。A类主要包含TEM型、SHV型、CTX-M型(含四种)、KPC等；B类又称金属β-内酰胺酶，主要包含IMP型、VIM型、NDM型等；C类主要包含DHA型等；D类主要包含OXA型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测膜条、荧光检测液和反应液，所述检测膜条包含尼龙膜及固定在尼龙膜上的捕获探针；所述荧光检测液包括用于标记捕获探针的表面偶联有链霉亲和素的量子点；所述反应液包括：反应液Ⅰ、反应液Ⅱ、反应液Ⅲ；/n所述反应液I包含以下检测引物：/n引物VANAF:TGGCAAGTCAGGTGAAGATG，即SEQ No.1；/n引物VANAR:CTAGACCTCTACAGCCGAGC，即SEQ No.2；/n引物VANBF:CGTATTGACGTGGCTTTCCCG，即SEQ No.3；/n引物VANBR:CGTGGATAGCGGCTGTA...

【技术特征摘要】
1.一种细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测膜条、荧光检测液和反应液，所述检测膜条包含尼龙膜及固定在尼龙膜上的捕获探针；所述荧光检测液包括用于标记捕获探针的表面偶联有链霉亲和素的量子点；所述反应液包括：反应液Ⅰ、反应液Ⅱ、反应液Ⅲ；
所述反应液I包含以下检测引物：
引物VANAF:TGGCAAGTCAGGTGAAGATG，即SEQNo.1；
引物VANAR:CTAGACCTCTACAGCCGAGC，即SEQNo.2；
引物VANBF:CGTATTGACGTGGCTTTCCCG，即SEQNo.3；
引物VANBR:CGTGGATAGCGGCTGTACGAT，即SEQNo.4；
引物MEF:GAAATGACTGAACGTCCG，即SEQNo.5；
引物MER:CATAACCTAATAGATGTGAAGTC，即SEQNo.6；
引物NDF:AGCCGCTGCATTGATGCTGAG，即SEQNo.7；
引物NDR:CGCGGTTGCTGGTTCGACC，即SEQNo.8；
引物CT9F:GCGTTGCAGTACAGCGACAATA，即SEQNo.9；
引物CT9R:ATATCATTGGTGGTGCCGTA，即SEQNo.10；
引物CT1F:GGACGATGTCACTGGCTGAGC，即SEQNo.11；
引物CT1R:CACAACCCAGGAAGCAGGCAGTC，即SEQNo.12；
引物MCF:GGCCTGCGTATTTTAAGCG，即SEQNo.13；
引物MCR:ATAGACACCGTTCTCACCCAG，即SEQNo.14；
引物VIMF:CGAGTGGTGAGTATCCGACAG，即SEQNo.15；
引物VIMR:GTCGTCATGAAAGTGCGTG，即SEQNo.16；
引物HBBF1:TATGGTTGGGATAAGGCTGG，即SEQNo.17；
引物HBBR1:CGAGCTTAGTGATACTTGTG，即SEQNo.18；
所述反应液II包含以下检测引物：
引物O5F:GGCAACCACCACAGAAGTATT，即SEQNo.19；
引物O5R:CCAGCCTACTTGTGGGTCTAC，即SEQNo.20；
引物O2F:ATCTATATGGTAATGCTCTAAGC，即SEQNo.21；
引物O2R:ACCTCTTGAATAGGCGTAACCT，即SEQNo.22；
引物AMF:CAAAACAGCCGGTCACTG，即SEQNo.23；
引物AMR:AGCAACTGCTCATACGGCAT，即SEQNo.24；
引物KPF:AACTGACACTGGGCTCTGCACT，即SEQNo.25；
引物KPR:AATCCCTCGAGCGCGAGTCTA，即SEQNo.26；
引物IMPF:GTAGCATTGCTACCGCAGCAG，即SEQNo.27；
引物IMPR:CACTACGTTATCTGGAGTGTGT，即SEQNo.28；
引物HBBF1:TATGGTTGGGATAAGGCTGG，即SEQNo.17；
引物HBBR1:CGAGCTTAGTGATACTTGTG，即SEQNo.18；
所述反应液III为HotstartTaqDNA聚合酶。


2.根据权利要求1所述的细菌耐药基因量子点芯片核酸检测试剂盒，其特征在于，所述反应液I的组分含量为：
水：9.7μL，
10×PCRbuffer：2.5μL，
20mMdN(U)TP：0.25μL，
10μM核苷酸序列如SEQIDNo.1-16所示的引物各0.5μL，
...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹华立，俞鹏飞，裘惠良，
申请(专利权)人：杭州千基生物科技有限公司，杭州博芯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33