一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒及方法。试剂盒包括反应液I～V、阳性对照品、内标、阴性对照品等。反应液I～III包括呼吸道病原菌检测引物、dN(U)TP、UDG、PCR缓冲体系、RNA酶抑制剂，反应液IV包括DNA聚合酶，反应液V包括反转录酶、DNA聚合酶，阳性性对照品包括甲型流感病毒、冠状病毒OC43假病毒及肺炎支原体重组质粒，内标包括不含靶标基因的外源性片段假病毒，阴性对照品包括人基因组DNA，荧光检测液包括链霉亲和素偶联的量子点，变性剂包括碱液，中性剂包括酸液，膜条包括含偶联特异性检测探针的尼龙膜。本发明专利技术能快速、灵敏、特性检测24种常见呼吸道感染病原菌，并能有效监控假阴性的出现。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒及方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒及方法。
技术介绍
呼吸道感染(Respiratorytractinfection，RTI)是人类最常见的一类疾病，可以在任何性别、年龄和地域中发生，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。呼吸道感染分为上呼吸道感染与下呼吸道感染。上呼吸道感染分为病毒性(70-80％)、细菌性(占20-25％)。急性上呼吸道感染：以急性鼻咽炎为主要表现的普通感冒、急性鼻窦炎、扁桃体炎、喉炎、咽炎、会厌炎等。急性下呼吸道感染：急性气管支气管炎、细支气管炎、肺炎，其中肺炎是5岁以下儿童死亡的最主要原因。普通感冒(俗称伤风)通常由鼻病毒、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒，其特征在于，包括反应液I、反应液II、反应液III、反应液IV、反应液V、阳性对照品、内标、阴性对照品、荧光检测液、变性剂、中性剂及膜条；其中，所述的膜条包括尼龙膜和偶联在尼龙膜上的特异性捕获探针；所述的荧光检测液包括用于标记捕获探针的表面偶联有链霉亲和素的量子点；变性剂包括0.01N-1.5N的氢氧化钠溶液；中性剂包括0.01N-1.5N盐酸溶液；所述的阳性对照品包括甲型流感病毒、冠状病毒OC43假病毒及肺炎支原体重组质粒，所述的内标包括不含靶标基因的外源性片段假病毒，所述的阴性对照品包括人基因组DNA；所述的反应液IV包括DNA聚合酶...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒，其特征在于，包括反应液I、反应液II、反应液III、反应液IV、反应液V、阳性对照品、内标、阴性对照品、荧光检测液、变性剂、中性剂及膜条；其中，所述的膜条包括尼龙膜和偶联在尼龙膜上的特异性捕获探针；所述的荧光检测液包括用于标记捕获探针的表面偶联有链霉亲和素的量子点；变性剂包括0.01N-1.5N的氢氧化钠溶液；中性剂包括0.01N-1.5N盐酸溶液；所述的阳性对照品包括甲型流感病毒、冠状病毒OC43假病毒及肺炎支原体重组质粒，所述的内标包括不含靶标基因的外源性片段假病毒，所述的阴性对照品包括人基因组DNA；所述的反应液IV包括DNA聚合酶；所述的反应液V包括反转录酶、DNA聚合酶，所述的反应液I、反应液II、反应液III分别包含以下检测引物：
反应液I包含以下检测引物：
引物MPF：CGGGTTAAAGGATCTACC，即SEQIDNO:1；
引物MPR：GTAAAAGACCTTGGCCTTG，即SEQIDNO:2；
引物LPF：CGTTCTTAACAAGTTTCAG，即SEQIDNO:3；
引物LPR：TCCGATTTACCGGGTTTAAC，即SEQIDNO:4；
引物BOCF:GTATTCAGTCAACACAGAGC，即SEQIDNO:5；
引物BOCR：GTTCTCTAGTGTTATCCCATC，即SEQIDNO:6；
引物ADVF:CGCAGTGGKCWTACATGCAC，即SEQIDNO:7；
引物ADVR1：CGCGGTCCACGGGGATAA，即SEQIDNO:8；
引物ADVR2：AATGTCAAAGAACGTGCTG，即SEQIDNO:9；
引物BOPF：GATTGCCCCTGAAGGCGAACC，即SEQIDNO:10；
引物BOPR：CTGCCCGACATGAAGGCGGT，即SEQIDNO:11；
引物CPF：CACAGTCCAAACCTAAAG，即SEQIDNO:12；
引物CPR：GTTTAAAACAGCTGTAGGTAG，即SEQIDNO:13；
引物ICF：TATGGTTGGGATAAGGCTGG，即SEQIDNO:14；
引物ICR：CGAGCTTAGTGATACTTGTG，即SEQIDNO:15；
反应液II包含以下检测引物：
引物IVBF:TCTTCACTGTTTATTATTCC，即SEQIDNO:16；
引物IVBR:AAGCCTTACTACACAGGAG，即SEQIDNO:17；
引物IVAF:TTCTTGTATAGTTTAACTGC，即SEQIDNO:18；
引物IVAR：CTTCTAACCGAGGTCGAAACGTA，即SEQIDNO:19；
引物H1N1F:CATTTCTTTCCATTGCGAATGC，即SEQIDNO:20；
引物H1N1R：ATGGGGAATTCACCATCCATCTA，即SEQIDNO:21；
引物H3N2F：TGGGATTACAGCTTGTTGGC，即SEQIDNO:22；
引物H3N2R：AACAAGTTCTGCTTGTATAAG，即SEQIDNO:23；
引物MERSF：CAGGAGCAAGATGAACTCT，即SEQIDNO:24；
引物MERSR：GAGTGAAGCGAAGATTCTACAC，即SEQIDNO:25；
引物RSVAF：CACTGCACTTCTTGAGTTTAT，即SEQIDNO:26；
引物RSVAR：GACGATGACCCTGCATCACT，即SEQIDNO:27；
引物RSVBF：TACTAGGCATTTGAGCCAGC，即SEQIDNO:28；
引物RSVBR：CATATTGTTAGTGATGCGGGATC，即SEQIDNO:29；
引物RHVF：CCTTAAACCTGCAGCCATTG，即SEQIDNO:30；
引物RHVR：CTATATATTGTCACCATAAGC，即SEQIDNO:31；
反应液III包含以下检测引物：
引物PIV1F：GCTATTACAGAACATGATTTC，即SEQIDNO:32；
引物PIV1R：GTGTTAGACTACCTTCATTATC，即SEQIDNO:33；
引物PIV2F：ATGATGGTATTCTGGTGCAC，即SEQIDNO:34；
引物PIV2R：GCTTTAAAGGATATGCATACTGG，即SEQIDNO:35；
引物PIV3F：GCTGTGCCAACTTGTAGATCTTG，即SEQIDNO:36；
引物PIV3R：CAATCAGGCATCTCATAGTCC，即SEQIDNO:37；
引物NL63F：GTTCTGATTCTAACCAGTCTTCT，即SEQIDNO:38；
引物NL63R:CCCATATTGTGATTAAAATCAC，即SEQIDNO:39；
引物OC43F：ATCTACTTCGCGCACATCC，即SEQIDNO:40；
引物OC43R：TTCTTTGGCAGTATGCTTAG，即SEQIDNO:41；
引物HKU1F：CAAGGCTATTATGTTGAAGG，即SEQIDNO:42；
引物HKU1R：TTATGCCTAATTTCCTTGGC，即SEQIDNO:43；
引物229EF：CACACTTCAATCAAAAGCTCCCA，即SEQIDNO:44；
引物229ER：GATTTAAGAGCCGCAGCGACTG，即SEQIDNO:45；
引物hMPVF：GATGTCTTCCTGTGCTGAC，即SEQIDNO:46；
引物hMPVR：TCAGAATGCAGGGTCAAC，即SEQIDNO:47。


2.如权利要求1所述的一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的特异性捕获探针包含：
探针MPP:TAGCGGGTACCATTACCATGG，即SEQIDNO:48；
探针LPP：CCAAGTGGTTTGCAATAC，即SEQIDNO:49；
探针BOCP：CTAGAGATGGTACTAATTCAATC，即SEQIDNO:50；
探针ADVCP:GACGCTGCGGTTTATCCC，即SEQIDNO:51；
探针ADVBP：CCGCGCCACAGACACCTAC，即SEQIDNO:52；
探针ADVEP：CTACTTCAGTCTGGGGAAC，即SEQIDNO:53；
探针BOPP：ATACAGCCCGGCTGACGT，即SEQIDNO:54；
探针CPP：CGTTGCTTTCCCCTTGCC，即SEQIDNO:55；
探针IVBP：CTTCTAGCTCACTCAAAGAATTG，即SEQIDNO:56；
探针IVAP：CTTAGTCAGAGGTGACAAGATTGG，即SEQIDNO:57；
探针H1N1P：CACTTTGGGTCTTATTGCTATT，即SEQIDNO:58；
探针H3N2P：GATTTGGTCCTTGTCCGTA，即SEQIDNO:59；
探针MERSP：CATTGTACAAAGATGTTGATAATCC，即SEQIDNO:60；
探针RSVAP：CATTAGCTAGTTCTTTTATAAG，即SEQIDNO:61；
探针RSVBP：GACTGGAACATGGGCACCC，即SEQIDNO:62；
探针RHVP；CGTAATGAGCAATTGCGG，即SEQIDNO:63；
探针PIV1P：CCTATATCTGCACATCCTTGA，即SEQIDNO:64；
探针PIV2P：GGAGAGGTCCATATTTAGGCG，即SEQIDNO:65；
探针PIV3P：CAATTTTGGAACTGAGTTCAAGCCC，即SEQIDNO:66；
探针NL63P:TAATAAGCCTCTTTCTCAACCCAG，即SEQIDNO:67；
探针OC43P：CTGGCAATAGAACCCCTACCT，即SEQIDNO:68；
探针HKU1P:GACATTCAGATTCTATAGTAAAACC，即SEQIDNO:69；
探针229EP：CTCCTTCCCGTTCTCAGTCAAG，即SEQIDNO:70；
探针hMPVP：TCTCCTCTTGTTTCACAGTC，即SEQIDNO:71。


3.如权利要求2所述的一种同时检测24种呼吸道病原菌量子点核酸检测试剂盒，其特征在于，所述的膜条上还含有三条用于监控样本核酸提取及扩增的内控探针：
IC1P:GGAGAAGCTGTGCTACGTCG，即SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹华立，裘惠良，
申请(专利权)人：杭州千基生物科技有限公司，杭州博芯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33