【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】遗传修饰的自然杀伤细胞任何优先申请的按引用并入本申请要求2016年12月30日提交的美国临时专利申请No.62/440,909的优先权权益。将上述申请的全部公开内容以整体通过引用明确地并入本文。I.
本文描述了遗传修饰(GM)的自然杀伤(NK)细胞和产生包括GMNK细胞的细胞群体的方法。还公开了使用这些包括GMNK细胞的细胞群体来例如抑制肿瘤细胞的增殖、调节病原体感染(如细菌感染或病毒感染)或抑制病原体感染(例如，细菌感染或病毒感染)的方法。在某些可选方案中，包括GMNK细胞的细胞群体缺乏CBLB、NKG2A和/或TGFBR2的表达和/或呈现出降低的CBLB、NKG2A和/或TGFBR2的表达和/或功能。在某些可选方案中，所述细胞群体包括GMNK细胞(其包含修饰的CD16)。II.
技术介绍
自然杀伤(NK)细胞是构成先天免疫系统的主要成分的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞响应于干扰素或巨噬细胞衍生的细胞因子而激活。NK细胞的细胞毒性活性很大程度上受两种类型的表面受体调节，它们可被认为是“激活性受体”或“抑制性受体...
【技术保护点】
1.一种自然杀伤细胞群体，其中所述自然杀伤(NK)细胞经遗传修饰以使其缺乏NK抑制性分子的表达或呈现出降低的NK抑制性分子的表达。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161230 US 62/440,9091.一种自然杀伤细胞群体，其中所述自然杀伤(NK)细胞经遗传修饰以使其缺乏NK抑制性分子的表达或呈现出降低的NK抑制性分子的表达。
2.权利要求1的群体，其中所述NK抑制性分子是选自CBLB、NKG2A和TGFBR2的一种或多种NK抑制性分子。
3.权利要求1或2的群体，其中所述遗传修饰的NK细胞与其中所述NK抑制性分子的表达未被敲除或降低的NK细胞相比具有更高的对抗肿瘤细胞的细胞毒性。
4.权利要求3的群体，其中所述肿瘤细胞选自多发性骨髓瘤细胞、急性髓性白血病(AML)细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、肉瘤细胞、导管癌细胞、白血病细胞、急性T细胞白血病细胞、慢性髓性淋巴瘤细胞、慢性髓细胞性白血病(CML)细胞、多发性骨髓瘤(MM)、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、结肠直肠癌细胞、结直肠腺癌细胞和视网膜母细胞瘤细胞。
5.权利要求4的群体，其中所述肿瘤细胞是实体肿瘤细胞。
6.权利要求5的群体，其中所述实体肿瘤细胞选自肝肿瘤细胞、肺肿瘤细胞、胰腺肿瘤细胞、肾肿瘤细胞和多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞。
7.权利要求1的群体，其中所述NK抑制性分子的表达被敲除。
8.权利要求7的群体，其中所述NK抑制性分子的表达通过CRISPR/CAS9系统、锌指核酸酶或TALEN核酸酶敲除。
9.权利要求7的群体，其中所述NK抑制性分子的表达通过CRISPR相关技术敲除。
10.权利要求1或2的群体，其中所述NK抑制性分子是CBLB。
11.权利要求7-10任一项的群体，其中CBLB表达的敲除产生在用ICAM-1和MICA刺激时比其中CBLB未被敲除的NK细胞具有更高的IFNγ分泌的NK细胞群体。
12.权利要求7-10任一项的群体，其中CBLB表达的敲除产生在用ICAM-1和MICA刺激时与其中CBLB未被敲除的NK细胞相比具有更高的脱粒的NK细胞群体。
13.权利要求12的群体，其中所述脱粒通过CD107a的增加来测量。
14.权利要求7-10任一项的群体，其中CBLB表达的敲除产生与其中CBLB未被敲除的NK细胞相比具有GM-CSF、可溶性CD137(sCD137)、IFNγ、MIP1α、MIP1β、TNFα和穿孔素中一种或多种的分泌的变化的NK细胞。
15.权利要求1或2的群体，其中所述NK抑制性分子是NKG2A。
16.权利要求15-19任一项的群体，其中NKG2A表达的敲除产生在NKG2A激动剂抗体存在下用ICAM-1和MICA刺激时与其中NKG2A未被敲除的NK细胞相比具有更高的脱粒的NK细胞群体。
17.权利要求16的群体，其中所述脱粒通过CD107a的增加来测量。
18.权利要求16或17的群体，其中NKG2A表达的敲除产生与其中NKG2A未被敲除的NK细胞相比具有GM-CSF、可溶性CD137(sCD137)、IFNγ、MIP1α、MIP1β、TNFα和/或穿孔素中一种或多种的分泌的变化的NK细胞群体。
19.权利要求1或2的群体，其中所述NK抑制性分子是TGBFR2。
20.权利要求19的群体，其中TGBFR2表达的敲除产生与其中TGFBR2未被敲除的NK细胞相比具有对于TGFβ介导的抗肿瘤细胞NK细胞细胞毒性的抑制的抗性的NK细胞群体。
21.一种自然杀伤细胞群体，其中所述自然杀伤(NK)细胞经遗传修饰以包含修饰的CD16。
22.权利要求21的群体，其中所述修饰的CD16比野生型CD16具有更高的对于IgG的亲和力。
23.权利要求22的群体，其中所述修饰的CD16在CD16a的位置158处具有缬氨酸。
24.权利要求21的群体，其中所述修饰的CD16对ADAM17切割是抗性的。
25.权利要求24的群体，其中所述修饰的CD16在CD16a的位置197处具有脯氨酸。
26.权利要求21-25任一项的群体，其中所述修饰的CD16含有IgK信号肽。
27.权利要求21-26任一项的群体，其中所述修饰的CD16含有CD16信号肽。
28.权利要求21-27任一项的群体，其中所述修饰的CD16通过病毒感染引入所述NK细胞中。
29.权利要求28的群体，其中所述修饰的CD16通过病毒感染引入造血细胞中，随后该造血细胞分化成NK细胞。
30.权利要求28-29的群体，其中所述修饰的CD16通过慢病毒载体引入。
31.权利要求30的群体，其中所述慢病毒载体具有CMV或EF1α启动子。
32.权利要求30或31的群体，其中所述慢病毒载体包含一个或多个药物选择标记。
33.权利要求28或29的群体，其中所述修饰的CD16通过逆转录病毒载体引入。
34.权利要求33的群体，其中所述逆转录病毒载体包含一个或多个药物选择标记。
35.权利要求1-34任一项的群体，其中所述NK细胞是胎盘来源的(PNK细胞)。
36.一种抑制肿瘤细胞增殖的方法，包括将所述肿瘤细胞接触来自权利要求1-35或55-59任一项的群体的自然杀伤细胞。
37.权利要求36的方法，其中所述接触在体外进行。
38.权利要求36的方法，其中所述接触在体内进行。
39.权利要求38的方法，其中所述接触在人类个体中进行，优选选择来接受抗癌治疗的个体。
40.权利要求39的方法，其中所述方法包括将所述自然杀伤细胞施用于所述个体。
41.权利要求36-40任一项的方法，其中所述肿瘤细胞是多发性骨髓瘤细胞。
42.权利要求36-40任一项的方法，其中所述肿瘤细胞是急性髓性白血病(AML)细胞。
43.权利要求42的方法，其中所述个体患有复发性/难治性AML。
44.权利要求42的方法，其中所述个体患有对于抗AML的至少一种非先天性淋巴样细胞(ILC)治疗失败的AML。
45.权利要求40的方法，其中所述个体为65岁或更大年龄，并且处于第一缓解期。
46.权利要求40-45任一项的方法，其中在施用所述自然杀伤细胞前，所述个体已经用氟达拉滨、阿糖胞苷或两者进行了调理。
47.权利要求40-46任一项的方法，其中所述肿瘤细胞选自多发性骨髓瘤细胞、急性髓性白血病(AML)细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、肉瘤细胞、导管癌细胞、白血病细胞、急性T细胞白血病细胞、慢性髓性淋巴瘤细胞、慢性髓细胞性白血病(CML)细胞、多发性骨髓瘤(MM)、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、结肠直肠癌细胞、结直...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓奎，叶谦，李天剑，王川，M·巴拉森，U·赫兹博格，R·J·哈里里，
申请(专利权)人：细胞结构公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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