生成哺乳动物T细胞活化诱导型合成启动子(SYN+PRO)以改善T细胞疗法制造技术

本文描述的本发明专利技术的方面涉及制造和使用用于转基因表达的诱导型启动子的方法。所述诱导型启动子衍生自NFAT‑RE诱导型系统，并且用于改善或增强T细胞存活和增殖。

Generation of mammalian T cell activation inducible synthesis promoter (syn + Pro) to improve T cell therapy

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生成哺乳动物T细胞活化诱导型合成启动子(SYN+PRO)以改善T细胞疗法相关申请的交叉引用本申请要求2017年5月17日提交的美国临时专利申请号62/507,565的优先权的权益。将前述申请的全部公开整体以引用的方式明确地并入。对序列表的参考本申请与电子格式的序列表一起提交。将序列表作为2018年5月15日创建的名为SCRI.152WO.TXT的22kb大小的文件提供。将序列表的电子格式中的信息以引用的方式整体并入本文。
本文描述了制造和使用用于转基因表达的诱导型启动子的方法。所述诱导型启动子衍生自NFAT-RE诱导型系统，并且用于改善或增强T细胞存活和增殖。
技术介绍
在T细胞疗法中已使用了许多不同的诱导型启动子。仍持续需要显示出强信号的启动子，并且特别地，显现出对显示出高信噪比并且可反复开启的启动子的需求。
技术实现思路
在第一方面，提供了制造诱导型合成启动子文库的方法，其中，所述方法包括：筛选启动子，其中，筛选在CART细胞活化后被活化的启动子，从而产生一组经筛选的启动子；筛选转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制造诱导型合成启动子文库的方法，所述方法包括：/n筛选启动子，其中，筛选在CAR T细胞活化后被活化的启动子，从而产生经筛选的启动子；/n筛选转录因子应答元件，从而产生经筛选的转录因子应答元件；/n制造诱导型合成启动子文库，所述诱导型合成启动子文库包含在转录因子应答元件的CAR T细胞活化后被活化的启动子；以及/n合成寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含编码经筛选的转录因子应答元件的第一序列以及编码经筛选的启动子的第二序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170517 US 62/507,5651.一种制造诱导型合成启动子文库的方法，所述方法包括：
筛选启动子，其中，筛选在CART细胞活化后被活化的启动子，从而产生经筛选的启动子；
筛选转录因子应答元件，从而产生经筛选的转录因子应答元件；
制造诱导型合成启动子文库，所述诱导型合成启动子文库包含在转录因子应答元件的CART细胞活化后被活化的启动子；以及
合成寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含编码经筛选的转录因子应答元件的第一序列以及编码经筛选的启动子的第二序列。


2.一种诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子包含：
编码转录因子应答元件的第一序列；以及
编码启动子序列的第二序列，
任选地，其中，所述诱导型合成启动子包含SEQIDNO:1-SEQIDNO:33中的一个或多个。


3.如权利要求2所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过嵌合抗原受体活化来诱导。


4.如权利要求3所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过所述嵌合抗原受体结合至配体来诱导。


5.如权利要求2-4中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过与抗CD3/抗CD28相互作用来诱导。


6.如权利要求2-5中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子可通过化学物质来诱导。


7.如权利要求6所述的诱导型合成启动子，其中，所述化学物质为PMA或罗奴霉素。


8.如权利要求2-8中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述启动子包含内源性IL2最小启动子序列。


9.如权利要求2-8中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述诱导型合成启动子包含SEQIDNO:1-SEQIDNO:33中任一项所示的序列。


10.如权利要求2-9中任一项所述的诱导型合成启动子，其中，所述转录因子应答元件为E2F1、EGR1、HIF1A、NFAT、LEF1、SP1、PU.1、NFKB、JUN、FOS和/或STAT4。


11.一种用于分子表达的细胞，所述细胞包含：
载体，其中，所述载体包含如权利要求2-9中任一项所述的诱导型合成启动子；编码分子的基因；以及
编码嵌合抗原受体的序列。


12.如权利要求11所述的细胞，其中，所述分子为蛋白质、抗体、促增殖分子或可根除肿瘤的分子。


13.如权利要求11或12所述的细胞，其中，所述细胞为造血干细胞。


14.如权利要求11-13中任一项所述的细胞，其中，所述嵌合抗原受体对CD19而言是特异性的。


15.如权利要求11-14中任一项所述的细胞，其中，所述细胞为CD8+或CD4+。


16.如权利要求11-15中任一项所述的细胞，其中，所述分子的表达是可诱导的。


17.如权利要求11-16中任一项所述的细胞，其中，所述CAR包含信号转导结构域。


18.如权利要求17所述的细胞，其中，所述信号转导结构域为1G、2G或3G。


19.如权利要求2-18中任一项所述的细胞，其中，所述载体为慢病毒载体、基于转座酶的微环或纳米质粒。


20.如权利要求11-19中任一项所述的细胞，其中，所述细胞进一步包含用于CAR特异性活化的TCR敲除系统。


21.如权利要求11-19中任一项所述的细胞，其中，所述分子为CCR(CD122)、CASTAT5、PD1:CD28和/或miRNA。


22.如权利要求11-20中任一项所述的细胞，其中，所述分子为嵌合细胞因子受体。


23.如权利要求22所述的细...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏佳，迈克尔·C·延森，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院DBA西雅图儿童研究所，
类型：发明
国别省市：美国;US