一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株及其应用，所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株为Fungal属菌EF028，保藏编号为CCTCC NO:M2018780，保藏时间为2018年11月12日。本发明专利技术提供的代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，通过培养、筛选以及纯化等步骤，从新鲜湖北麦冬植物块根中分离筛选出产生湖北麦冬多糖的菌株，Fungal属菌EF028，用分离筛选出代谢产生湖北麦冬多糖的菌株发酵制备湖北麦冬多糖，能够有效解决现有湖北麦冬多糖生产受湖北麦冬生长影响的问题，可以根据湖北麦冬多糖的具体需求量，改变相应参数，制备湖北麦冬多糖，条件可控、稳定性强。

A strain producing polysaccharide from Ophiopogon hupehensis and its application

【技术实现步骤摘要】
一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株及其应用
本专利技术涉及微生物
，特别涉及一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株及其应用。
技术介绍
湖北麦冬多糖，是国家地理标志产品、湖北道地中药材植物——湖北麦冬Liriopespicatavar.proliferaY.T.Ma块根的主要活性成分之一，研究表明：湖北麦冬多糖具有抗心肌缺血、抗血栓、耐缺氧、抗衰老、降血糖等多方面的药理作用，此外，它对改善机体免疫系统、增进胃肠运动机能等方面都有着积极的影响，最新的研究表明它还具有抗肿瘤作用。现有的湖北麦冬多糖生产，主要是通过直接分离湖北麦冬块根提取物获得。但是，在湖北麦冬多糖实际生产中，存在着诸如受连作障碍导致种植面积相对较小、受气候条件影响较大、块根生产周期长、麦冬多糖提取成本高等问题，导致湖北麦冬多糖的市场受到限制。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提出一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株及其应用，旨在提供一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，解决现有湖北麦冬多糖生产受湖北麦冬生长影响的技术问题。为实现上述目的，本专利技术提出一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株已被送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国.武汉.武汉大学，分类名为Fungal属菌EF028，其保藏编号为CCTCCNO:M2018780，保藏时间为2018年11月12日。上述的代谢产生湖北麦冬多糖的菌株通过以下步骤筛选得到：将新鲜湖北麦冬植物块根清洗干净，依次分别用体积分数为75％乙醇、有效氯含量为4％～6％次氯酸钠溶液浸泡后，除去表面水分得干净湖北麦冬块根，所述浸泡时间为1～3min；将所述干净湖北麦冬块根除去褐变部分后切成薄片，将所述薄片置于PDA培养基上，于25～30℃下密封培养5～7天，所述PDA培养基还包含终浓度为50ug/mL的氨苄青霉素；挑取所述PDA培养基上块根薄片周边长出的灰蓝色、边缘泛白的菌落顶端菌丝，转移到新的PDA培养基上进行多次纯化培养直至仅出现单一纯菌落，即得所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株。可选地，所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株的18SrRNA基因序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提出一种利用如上所述的代谢产生湖北麦冬多糖的菌株在的制备湖北麦冬多糖中的应用，采用所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株通过发酵制备得到湖北麦冬多糖。上述发酵制备湖北麦冬多糖具体包括以下步骤：在无菌条件下将上述Fungal属菌EF028接种至PDA培养基，在28℃下活化培养72h，得活化菌种；将所述活化菌种接种至液体马铃薯种子培养基，在28℃、180rpm下震荡培养72h，得种子；按照10％的接种量，将种子接入事先配制的液体发酵培养基中，在28℃、180rpm下震荡培养7天，得发酵混合物；将所述发酵混合物冷冻干燥，之后研成粉末，用95％的乙醇洗涤、烘干，得烘干物；向所述烘干物中加水，80℃下水浴加热2h后过滤，得滤液；将所述滤液离心，取上清液透析48h，取截留液浓缩，得浓缩液；将所述浓缩液进行醇沉处理，将醇沉产物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，最后干燥，得到湖北麦冬多糖。本专利技术提供的代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，通过培养、筛选以及纯化等步骤，从新鲜湖北麦冬植物块根中分离筛选出代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，Fungal属菌EF028，用分离筛选出代谢产生湖北麦冬多糖的菌株发酵制备湖北麦冬多糖，能够有效解决现有湖北麦冬多糖生产受湖北麦冬生长影响的问题，可以根据湖北麦冬多糖的具体需求量，改变相应参数，制备湖北麦冬多糖，条件可控、稳定性强。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1中Fungal属菌EF028在PDA培养基上的形态图；图2为湖北麦冬块根的提取多糖的酸解单糖的HPLC检测图；图3为本专利技术实施例2中菌株发酵液多糖提取物的酸解单糖的HPLC检测图；图4为本专利技术实施例2中菌株发酵液多糖提取物对OH、O2-、DPPH、ABTS自由基的清除活性图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。湖北麦冬多糖生产，主要是通过直接分离块根提取物获得。但是，在湖北麦冬多糖实际生产中，存在着诸如受连作障碍导致种植面积相对较小、受气候条件影响较大、块根生产周期长、湖北麦冬多糖提取成本高等问题，导致湖北麦冬多糖的市场受到限制。鉴于此，本专利技术提出一种代谢产生湖北冬多糖的菌株，所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株已被送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国.武汉.武汉大学，分类名为Fungal属菌EF028，其保藏编号为CCTCCNO:M2018780，保藏时间为2018年11月12日。如图1所示，由本专利技术实施例中Fungal属菌EF028在PDA培养基上的形态图可看出，所述Fungal属菌EF028菌落呈灰蓝色，边缘泛白。如SEQIDNO.1所示，所述Fungal属菌EF028的18SrRNA基因序列进行序列比对可得出，所述Fungal属菌EF028同Fungalsp，KT582265.1，同源性100％。本专利技术提供的代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，通过培养、筛选以及纯化等步骤，从新鲜湖北麦冬植物块根中分离筛选出产生湖北麦冬多糖的菌株，Fungal属菌EF028，用分离筛选出代谢产生湖北麦冬多糖的菌株发酵制备湖北麦冬多糖，能够有效解决现有湖北麦冬多糖生产受湖北麦冬生长影响的问题，可以根据湖北麦冬多糖的具体需求量，改变相应参数，制备湖北麦冬多糖，条件可控、稳定性强。在专利技术提供的产生湖北麦冬多糖的菌株的筛选方法中，所述产生湖北麦冬多糖的菌株的筛选方法包括如下步骤：步骤S10、将新鲜湖北麦冬植物块根清洗干净，依次分别用体积分数为75％乙醇、有效氯含量为4％～6％次氯酸钠溶液浸泡后，除去表面水分得干净湖北麦冬块根，所述浸泡时间为1～3min。以下给出步骤S10的一具体实施例：使用大量自来水充分清洗新鲜湖北麦冬植物块根表面泥土，然后装入干净的烧杯中，加入去离子水，置于超声波清洗器中反复清洗，直至清洗后的水变得极为清澈；用无菌滤纸蘸干湖北麦冬块根表面的水分后，先用75％(V/V)乙醇浸泡块根2min，用无菌水漂洗3次；再用有效氯含量4％-6％的次氯酸钠溶液浸泡2min，后用大量无菌水连续漂洗4次，再用无菌滤纸蘸干水分，得到干净湖北麦冬块根。步骤S20、将所述干净湖北麦冬块根除去褐变部分后切成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，其特征在于，所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株为Fungal属菌EF028，保藏编号为CCTCC NO:M2018780，保藏时间为2018年11月12日。/n

【技术特征摘要】
1.一种代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，其特征在于，所述代谢产生湖北麦冬多糖的菌株为Fungal属菌EF028，保藏编号为CCTCCNO:M2018780，保藏时间为2018年11月12日。


2.如权利要求1所述的代谢产生湖北麦冬多糖的菌株，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：余海忠，张得祥，黄小恋，田文清，于博，王海燕，黄升谋，阎华，孙永林，李云捷，
申请(专利权)人：湖北文理学院，
类型：发明
国别省市：湖北;42