本发明专利技术提供了一种香菇‘农香5号’及其分子标记鉴定方法，属于香菇领域。本发明专利技术以香菇‘808’和香菇‘L26’为亲本进行杂交选育出菌种稳定性好、出菇温度高、出菇时间短、子实体朵形好、潮次之间短，产量高，具有很好地开发应用前景的‘农香5号’香菇菌种。该菌种已于2019年12月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:M 20191018。同时提供了该菌种专一性强、操作简便的分子标记鉴定方法。
Nongxiang 5, a mushroom strain suitable for industrial cultivation, and its molecular identification method
【技术实现步骤摘要】
一种适合工厂化栽培的香菇菌种农香5号及其分子鉴定方法
本专利技术属于香菇领域，具体涉及一种香菇‘农香5号’及其分子标记鉴定方法。
技术介绍
香菇Lentinusedodes又名花菇、冬菇、香信、香蕈等，其营养价值很高，味道鲜美，是被人们广泛所知的一种食用菌，同时也是我国产量最大的食用菌。随着近年香菇产业的不断升级以及环境气候的变化，香菇传统的栽培模式暴露出不稳定、“靠天吃饭”、产量与品质难于保证的问题越来越严重，已较难适应香菇产业日益激烈竞争的要求，以机械化生产、智能化调控、周年化栽培为特征的工厂化生产是香菇产业升级发展方向。香菇工厂化栽培成功的秘诀有4点：一是降低病菌的损耗率，二是实现短期高产，三是防止连作障碍，四是采用性能稳定的菌种（木村荣一.日本的香菇工厂化栽培.食药用菌，2015，23（3）：157~161），其中，菌种是关键、是基础。因此，本专利技术根据香菇工厂化栽培菌种的要求，杂交选育菌龄短、产量高、朵形好、抗逆性好、且稳定的香菇菌种以实现香菇的工厂化栽培。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种香菇‘农香5号’及其分子标记鉴定方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种香菇（Lentinusedodes）‘农香5号’，该菌株的分类命名为：香菇（Lentinulaedodes）农香5号，已于2019年12月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M20191018。本专利技术的香菇（Lentinusedodes）‘农香5号’，简称‘农香5号’是以香菇‘808’和香菇‘L26’为亲本进行杂交选育而成，其继承了两个亲本的优良性状。‘农香5号’菌种稳定性好，属中高温型，菌龄在75d出菇，子实体朵形好、潮次之间短，产量高，两潮平均每袋产量在310～350g，具有很好地开发应用前景。香菇‘农香5号’（CCTCCNO:M20191018）的母种培养基为马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂条20g，水1000mL；培养条件为常规的香菇培养，无特殊要求。本专利技术还提供了所述香菇‘农香5号’的分子标记鉴定方法，包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、特异片段PCR扩增和PCR产物的电泳检测。所述特异片段PCR扩增是由6对引物分别对‘农香5号’的DNA进行PCR扩增，经电泳检测分别得到单一的标记片段，6对引物序列和用这6对引物分别扩增‘农香5号’的DNA得到的标记片段大小见表1；表1特异标记扩增信息所述PCR产物的电泳检测：经电泳检测，在一个泳道上只有一个片段出现，且片段大小与对应的引物相符（各引物对应的片段大小见表1），是香菇（Lentinusedodes）‘农香5号’的标记。其中电泳条件为：取PCR产物5μL，与1μL上样缓冲液混匀，点样于1.2%的琼脂糖凝胶上，于0.5XTBE缓冲液中，5V/cm电压下电泳；所述上样缓冲液：0.1％溴酚蓝,40%蔗糖。PCR扩增反应体系：1～1.5μl含量80~150ng的DNA，12.5μlPremixTaq（带染料），1μl浓度为10μmol/L的正向引物,1μl浓度为10μmol/L的反向引物,9～9.5μlddH2O，总体积25μl；PCR扩增反应程序：94℃预变性5min；98℃变性10sec，Tm退火30sec，72℃延伸X,35个循环;72℃延伸10min。其中各引物的Tm和72℃延伸X见表2。表2特异标记产生PCR扩增反应程序信息本专利技术具有以下优点：1、香菇‘农香5号’含香菇‘808’和香菇‘L26’两个亲本的基因，其‘农香5号’菌种稳定性好，属中高温型品种，能在较高温度下出菇，菌龄短，抗杂性好，子实体朵形好，潮次之间短，产量高等优点，具有很好地开发应用前景。2、香菇‘农香5号’的分子标记鉴定方法具有真实可靠，一目了然的特点，比经典的形态鉴定误差小，不受环境条件的影响，判断更直观。3、专一性强：本专利技术在对香菇基因测序、生物信息分析的基础上，设计香菇‘农香5号’的特异识别性的标记片段。4、香菇‘农香5号’的分子标记鉴定方法操作简单，检测时间短，经典的形态鉴定需要检测的指标多，时间长且需要综合起来分析。在一般的分子实验室即能完成检测，无需要特殊的仪器设备。附图说明图1为香菇‘农香5号’第二潮出菇时子实体形态。图2为‘农香5号’特异性识别标记电泳图。其中，1～18为泳道编号，1、4、7、10、13、16泳道代表‘808’，2、5、8、11、14、17泳道为‘农香5号’，3、6、9、12、15、18代表‘L26’；泳道1～3的引物为LeP1，标记片段大小为791bp，是香菇‘808’和‘农香5号’共有；泳道4～6的引物为LeP2，标记片段大小为939bp，是香菇‘808’和‘农香5号’共有；泳道7～9的引物为LeP3，标记片段大小为1409bp，是香菇‘808’和‘农香5号’共有；泳道10～12的引物为LeP4，标记片段大小为1742bp，是香菇是‘农香5号’和‘L26’共有；泳道13～15的引物为LeP5，标记片段大小为803bp，是香菇‘农香5号’和‘L26’共有；泳道16～18的引物为LeP6，标记片段大小为962bp，是香菇‘农香5号’和‘L26’共有；当6对引物都对‘农香5号’基因组检测时都产生对应大小的标志片段，则为香菇‘农香5号’，M表示分量为DL2000的DNAMARK。具体实施方式为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是下述的实例仅仅是本专利技术其中的例子而已，并不代表本专利技术所限定的权利保护范围，本专利技术的权利保护范围以权利要求书为准。实施例1：香菇‘农香5号’的选育香菇‘农香5号’的选育，包括以下步骤：（1）对香菇‘L26’、‘L087’、‘L.0344’、‘L0227’进行出菇实验，收集其孢子，并进行孢子萌发实验，获得4个香菇菌株的单孢菌株，每个菌株选择长势良好的单孢菌株各2个，共8个单孢菌株。（2）选择香菇菌株‘农香2号’、‘808’、‘闽丰1号’、‘Cr33’、‘申香10号’、‘L18’、‘L236’、‘武香1号’、‘L0249’、‘L.0359’10个，分别与8个单菌株进行双-单配对，配对组合数为80，获得63个杂交子。（3）对63个杂交子在PDA培养基上连续转接3次后，观察其菌丝生长速度，淘汰生长速度较慢的杂交子23个，余下40个杂交子制作菌种作出菇实验。（4）40个杂交子的出菇性状采用直观法筛选，根据出菇快慢、整齐度、子实体朵形初步筛选出5个杂交子进行下一轮筛选。（5）经第二轮出菇实验，发现杂交编号为‘LH17’的杂交子具有出菇快、整齐度好、朵形好的优点，其亲本为香菇‘808’和‘L26’。此后，香菇杂交子‘LH17’经多次出菇，性状稳定，周期短，能在较高温度下出菇，出菇时整齐度好、抗逆性较好、产量较本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种香菇（
【技术特征摘要】
1.一种香菇（Lentinulaedodes）菌株‘农香5号’，其特征在于：该菌株的分类命名为：香菇（Lentinulaedodes）农香5号，已于2019年12月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M20191018。
2.一种如权利要求1所述的香菇‘农香5号’的分子标记鉴定方法，其特征在于：包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、特异片段PCR扩增、电泳检测，显示特异条带；
特异片段PCR扩增引物LeP1～LeP6的具体核苷酸序列为：
引物LeP1的正向序列为5’-GCGGACCTTGTCCGGTATAG-3’，反向序列为5’-TCCAGCGAATGGCTTCAAAC-3’；
引物LeP2的正向序列为5’-GGGCCATGCCAACGAGTATC-3’，反向序列为5’-GCAGGCGATGCGAATTGAAG-3’；
引物LeP3的正向序列为5’-TCGGTCTCGCCATCAAGTTC-3’，反向序列为5’-CTATCGCAAGTTCGGATTCG-3’；
引物LeP4的正向序列为5’-GGCAGAGGTTGCATCTAAAG-3’，反向序列为5’-ACAGATGGCTACTACGAACC-3’；
引物LeP5的正向序列为5’-GCGACGTCATAGGTCCTTTG-3’，反向序列为5’-CAGTAAGGATCTGGGCTATG-3’；
引物LeP6的正向序列为5’-AGCGCGGACA...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘新锐，吴小平，谢宝贵，邓优锦，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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