用于毛囊干细胞增殖的方法技术

本发明专利技术涉及Sonic Hedgehog(Shh)途径活化剂和Wnt激动剂的组合物，以及使用它们来诱导毛囊干细胞自我更新、包括诱导毛囊干细胞增殖、同时在子细胞中维持分化为毛囊上皮细胞的能力的方法。

Methods for hair follicle stem cell proliferation

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于毛囊干细胞增殖的方法相关申请本申请要求2018年1月23日提交的美国申请号62/620,709和2017年4月11日提交的美国申请号62/484,279的优先权，其各自的完整内容通过引用并入本文。专利
本专利技术涉及使用一种或多种sonichedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt途径活化剂用于诱导、促进或增强毛囊中的干细胞的生长、增殖和/或再生、同时在子细胞中维持分化为毛囊的上皮细胞的能力的方法。在一个实施方案中，毛囊中的干细胞是真皮乳头中的真皮乳头干细胞。在一些实施方案中，一种或多种Wnt活化剂是一种或多种糖原合酶(GSK)抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种GSK抑制剂是一种或多种1H-吡咯-2,5-二酮化合物。专利技术背景干细胞在体内展现出惊人的产生多种细胞类型的能力。除了胚胎干细胞外，组织特异性的干细胞在发育期间以及在成年人的体内稳态和损伤修复中发挥关键作用。干细胞通过增殖而自我更新，以及通过分化而产生组织特异性的细胞类型。不同干细胞的特性随组织不同而变化，并且由其固有的遗传状态和表观遗传状态决定。但是，不同干细胞在自我更新和分化之间的平衡都受到严格控制。失控的自我更新可能导致干细胞的过度生长，并可能导致肿瘤形成，而失控的分化可能耗尽干细胞库，从而导致维持组织体内稳态的能力受损。因而，干细胞持续地感知它们的环境并适当地以增殖、分化或细胞凋亡做出应答。通过控制干细胞增殖和分化的时机和程度来驱动再生将是合乎需要的。用随时间被清除的小分子来控制增殖，将允许控制干细胞增殖和分化的时机和程度。值得注意的是，来自不同组织的组织干细胞共享有限数目的调节其自我更新和分化的信号传导途径，但是以非常依赖于环境的方式。这些途径中的一些是Wnt和GSK3途径。脱发，例如秃头症，是由身体生发周期的中断引起的病症。脱发可以发生在身体的任何地方，但最通常影响头皮。平均而言，头皮具有100,000根毛发，其通过生长、静息、脱落和再生期循环。尽管不是威胁生命的病况，并且主要是‘美容’问题，但脱发影响生活质量。在图像取向的社会中，脱发对个体的情绪状态具有重大影响。脱发可以与人的遗传学相关，尽管许多医学和行为状况可中断生长周期并引起脱发。没有用于脱发的治愈疗法。当前的治疗涉及局部药物，诸如抗高血压血管扩张药米诺地尔或免疫抑制类固醇乳膏。皮质类固醇疗法也可以通过注射施用。还使用口服处方药剂，诸如非那雄胺、抗雄激素和抗真菌药剂。然而，治疗可以伴随有药剂的不良反应，并且如果中止治疗，患者可以复发。脱发也可以通过皮肤镜和假发进行美容治疗，但这些美容解决方案也无法提供治愈。因此，仍然长期需要可以保持/促进毛囊中的细胞抵抗脱发的功能的新化合物。专利技术概述本专利技术提供了使用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂来诱导毛囊中的干细胞的自我更新的方法。本专利技术还提供了一种或多种Shh途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂的药物组合物。这些组合物可用于例如治疗与脱发相关的疾病，诸如秃头症。在一个方面，本专利技术提供了扩增毛囊的干细胞的群体的方法，所述方法包括使所述干细胞与一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂接触。在另一个方面，本专利技术提供了促进毛囊上皮细胞的生成的方法，所述方法包括用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂处理毛囊的干细胞。在一个实施方案中，所述干细胞是真皮乳头干细胞。在另一个实施方案中，所述干细胞是毛囊干细胞。在一些实施方案中，所述干细胞包括角质形成细胞、黑色素细胞、真皮乳头细胞、隆突细胞或其组合。在一些实施方案中，所述干细胞在受试者中。在本文所述方法的一些实施方案中，在毛囊中的Gli1、Krt15、CD34、Lgr5、Lgr6、Lrig1、Sox2、CD133、波形蛋白、多功能蛋白聚糖和/或碱性磷酸酶的表达增加。在另一个方面，本专利技术提供了治疗具有与毛囊上皮细胞的不存在或缺乏相关的疾病或处于发展与毛囊上皮细胞的不存在或缺乏相关的疾病的风险中的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂。在一些实施方案中，所述疾病选自静止期脱发、生长期脱发、雄激素性脱发、斑秃、头癣、毛发扁平苔藓、瘢痕性脱发、盘状红斑狼疮、秃发性毛囊炎、解剖性头皮蜂窝组织炎、前额纤维化脱发、中央离心瘢痕性脱发、拔毛癖、拉扯性脱发和少毛症。在另一个方面，本专利技术提供了治疗具有秃头症或处于发展秃头症的风险中的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂。在一些实施方案中，与未施用一种或多种Shh途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂的受试者相比，施用一种或多种Shh途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂的受试者具有改善的毛发生长、改善的头发密度和/或改善的毛囊的再生循环。在又另一个方面，本专利技术提供了药物组合物，其包含：药学上可接受的载体和(i)Wnt激动剂或其药学上可接受的盐和(ii)SonicHedgehog(Shh)途径活化剂或其药学上可接受的盐。在本文公开的方法和组合物的一些实施方案中，所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh途径活化浓度的约5倍至约1000倍。在某些实施方案中，所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh途径活化浓度的约10倍至约100倍。在一些实施方案中，所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh途径活化浓度的约20倍至约50倍。在某些实施方案中，所述一种或多种Wnt激动剂的浓度为有效体外Wnt激动剂浓度的约5倍至约1000倍。在一些实施方案中，所述一种或多种Wnt激动剂的浓度为有效体外Wnt激动剂浓度的约10倍至约100倍。在一些实施方案中，所述一种或多种Wnt激动剂的浓度为有效体外Wnt激动剂浓度的约20倍至约50倍。在本文公开的方法和组合物的一些实施方案中，所述Shh途径活化剂包含Smoothened激动剂。在其他实施方案中，所述Shh途径活化剂包含Smoothened纤毛累积增强剂。在本文公开的方法和组合物的某些实施方案中，所述一种或多种Shh途径活化剂选自表1或表2。在本文公开的方法和组合物的进一步实施方案中，所述一种或多种Shh途径活化剂选自嘌吗啡胺(Purmorphamine)、SAG、20-α羟基胆固醇和SAGHCl。在本文公开的方法和组合物的一些实施方案中，所述一种或多种Wnt激动剂选自表3。在本文公开的方法和组合物的某些实施方案中，所述一种或多种Wnt激动剂是GSK3-α抑制剂或GSK3-β抑制剂。在本文公开的方法和组合物的进一步实施方案中，所述GSK3-α抑制剂选自表5。在本文公开的方法和组合物的又进一步实施方案中，所述GSK3-β抑制剂选自表4。在本文公开的方法和组合物的一些实施方案中，一种或多种Wnt激动剂是式(I)的化合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.扩增毛囊的干细胞的群体的方法，所述方法包括使所述干细胞与一种或多种SonicHedgehog (Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂接触。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170411 US 62/484279;20180123 US 62/6207091.扩增毛囊的干细胞的群体的方法，所述方法包括使所述干细胞与一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂接触。


2.促进毛囊上皮细胞的生成的方法，所述方法包括用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂处理毛囊的干细胞。


3.治疗具有与毛囊上皮细胞的不存在或缺乏相关的疾病或处于发展与毛囊上皮细胞的不存在或缺乏相关的疾病的风险中的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂。


4.治疗具有秃头症或处于发展秃头症的风险中的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一种或多种SonicHedgehog(Shh)途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂。


5.权利要求1或2的方法，其中所述干细胞是真皮乳头干细胞。


6.权利要求1或2的方法，其中所述干细胞是毛囊干细胞。


7.权利要求1或2的方法，其中所述干细胞包括角质形成细胞、黑色素细胞、真皮乳头细胞、隆突细胞或其组合。


8.权利要求1或2的方法，其中所述干细胞在受试者中。


9.权利要求3的方法，其中所述疾病选自静止期脱发、生长期脱发、雄激素性脱发、斑秃、头癣、毛发扁平苔藓、瘢痕性脱发、盘状红斑狼疮、秃发性毛囊炎、解剖性头皮蜂窝组织炎、前额纤维化脱发、中央离心瘢痕性脱发、拔毛癖、拉扯性脱发和少毛症。


10.权利要求3或4的方法，其中与未施用一种或多种Shh途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂的受试者相比，施用一种或多种Shh途径活化剂和一种或多种Wnt激动剂的受试者具有改善的毛发生长、改善的头发密度和/或改善的毛囊的再生循环。


11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh途径活化浓度的约5倍至约1000倍。


12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh途径活化浓度的约10倍至约100倍。


13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh途径活化浓度的约20倍至约50倍。


14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂的浓度为有效体外Wnt激动剂浓度的约5倍至约1000倍。


15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂的浓度为有效体外Wnt激动剂浓度的约10倍至约100倍。


16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂的浓度为有效体外Wnt激动剂浓度的约20倍至约50倍。


17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述一种或多种Shh途径活化剂选自表1或表2。


18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述一种或多种Shh途径活化剂选自嘌吗啡胺、SAG、20-α羟基胆固醇和SAGHCl。


19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂选自表3。


20.权利要求1-19中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是GSK3-α抑制剂或GSK3-β抑制剂。


21.权利要求20的方法，其中所述GSK3-α抑制剂选自表5。


22.权利要求20的方法，其中所述GSK3-β抑制剂选自表4。


23.权利要求1-18和20中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是式I的化合物：



或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中：
Q1是CH或N；
Q2是C或N；
Q3是C或N；
其中Q1、Q2和Q3中的至少一者是N；
R1选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NHC(O)R1a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R1a是C1-C4烷基；
R2选自卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)2、-NHC(O)R2a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R2a是C1-C4烷基；
R3选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NHC(O)R3a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R3a是C1-C4烷基；
Ar选自




-Z-W-X-Y-是-C(RZ)2-C(RW)2-N(RX)-C(RY)2-、-C(RZ)2-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-或-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-；
每个RZ独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RZ基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；
每个RW独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RW基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；
或者RZ和RW与它们所连接的碳一起形成C3-C6环烷基；
RX选自-CORX1、-SO2RX1、杂芳基和-(C1-C4亚烷基)-(C3-C8环烷基)，且其中所述-(C1-C4亚烷基)-(C3-C8环烷基)在C1-C4亚烷基上任选地被1至4个卤素取代；
其中RX1是杂环基，其中所述杂环基任选地被1至12个独立地选自以下的取代基取代：氘、卤素、-[C(RX1a)2]p-CN、-CF3、C1-C4烷基、-(CH2)p-OH、-[C(RX1a)2]p-OH、-[C(RX1a)2]p-O-C1-C4烷基、-NHCOC1-C4烷基、-CONHC1-C4烷基、-COH、-CO2H、-[C(RX1a)2]p-COO-C1-C4烷基、-(CH2)p-NH2、-[C(RX1a)2]p-NH2、-[C(RX1a)2]p-NH-C1-C4烷基、-[C(RX1a)2]p-N-(C1-C4烷基)2；其中p是0、1、2或3；其中每个RX1a独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RX1a基团一起形成C3-C6环烷基；
每个RY独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RY基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；且
m是0、1或2；
条件是所述化合物不是




。


24.权利要求23的方法，其中RX是-CORX1。


25.权利要求24的方法，其中RX1是哌啶或8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷，其两者任选地被1至12个独立地选自以下的取代基取代：氘、卤素、C1-C4烷基、-(CH2)p-OH、-(CH2)p-NH2；其中p是1、2或3。


26.权利要求25的方法，其中RX1是哌啶，其任选地被1至2个卤代取代基取代。


27.权利要求26的方法，其中所述哌啶任选地被-(CH2)p-OH取代。


28.权利要求23的方法，其中RX是杂芳基。


29.权利要求28的方法，其中所述杂芳基是单环的或双环的。


30.权利要求28的方法，其中所述杂芳基含有1至3个氮。


31.权利要求23的方法，其中RX是-(C1-C4亚烷基)-(C3-C8环烷基)。


32.权利要求31的方法，其中所述-(C1-C4亚烷基)-(C3-C8环烷基)在C1-C4亚烷基上被1或2个卤素取代。


33.权利要求31的方法，其中所述C3-C8环烷基是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。


34.权利要求1-18和20中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是式Ia的化合物：



或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中：
Q1是CH或N；
Q2是C或N；
Q3是C或N；
其中Q1、Q2和Q3中的至少一者是N；
R1选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NHC(O)R3a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R1a是C1-C4烷基；
R2选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)2、-NHC(O)R2a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R2a是C1-C4烷基；
R3选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NHC(O)R3a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R3a是C1-C4烷基；
Ar选自




和；其中Ar任选地被氘、卤素、烷基、烷氧基和CN取代；
Q7选自S、O、CH2和NRQ7；其中RQ7是氢或任选地取代的C1-C4烷基；
-Z-W-X-Y-是-C(RZ)2-C(RW)2-N(RX)-C(RY)2-、-C(RZ)2-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-或-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-；
每个RZ独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RZ基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；
每个RW独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RW基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；
或者RZ和RW与它们所连接的碳一起形成C3-C6环烷基；
RX选自氢、RX1、-CORX1、-SO2RX1、-(C1-C4亚烷基)-RX1，且其中所述-(C1-C4亚烷基)-RX1在C1-C4亚烷基上任选地被1至4个卤素取代；
其中RX1是C3-C8环烷基、杂芳基或杂环基，其中所述杂环基任选地被1至12个独立地选自以下的取代基取代：氘、卤素、-[C(RX1a)2]p-CN、-CF3、C1-C4烷基、-(CH2)p-OH、-[C(RX1a)2]p-OH、-[C(RX1a)2]p-O-C1-C4烷基、-NHCOC1-C4烷基、CONHC1-C4烷基、COH、-CO2H、-[C(RX1a)2]p-COO-C1-C4烷基、-(CH2)p-NH2、-[C(RX1a)2]p-NH2、-[C(RX1a)2]p-NH-C1-C4烷基、-[C(RX1a)2]p-N-(C1-C4烷基)2；其中p是0、1、2或3；
其中每个RX1a独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RX1a基团一起形成C3-C6环烷基；
每个RY独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RY基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；且
m是0、1或2。


35.权利要求1-18和20中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是式Ib的化合物：



或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中：
Q1是CH或N；
Q2是C或N；
Q3是C或N；
其中Q1、Q2和Q3中的至少一者是N；且条件是当Q1是CH且Q3是C时，Q2不是N；
R1选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NHC(O)R3a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R1a是C1-C4烷基；
R2选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)2、-NHC(O)R2a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R2a是C1-C4烷基；
R3选自氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烯基、C1-C4炔基、-CN、-OH、-O-C1-C4烷基、-NH2、-NHC(O)R3a和-S(O)2NH2；其中所述烷基任选地被1至3个独立地选自卤素和–OH的取代基取代；且其中R3a是C1-C4烷基；
Ar选自




和；其中Ar任选地被氘、卤素、烷基、烷氧基和CN取代；
每个Q6独立地选自CRQ6和N；其中CRQ6是氢、卤素、-CN、低级烷基或取代的烷基；
Q7选自S、O、CH2和NRQ7；其中RQ7是氢或任选地取代的C1-C4烷基；
-Z-W-X-Y-是-C(RZ)2-C(RW)2-N(RX)-C(RY)2-、-C(RZ)2-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-或-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-；
每个RZ独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RZ基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；
每个RW独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RW基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；
或者RZ和RW与它们所连接的碳一起形成C3-C6环烷基；
RX选自氢、RX1、-CORX1、-SO2RX1、-(C1-C4亚烷基)-RX1，且其中所述-(C1-C4亚烷基)-RX1在C1-C4亚烷基上任选地被1至4个卤素取代；
其中RX1是C3-C8环烷基、杂芳基或杂环基，其中所述杂环基任选地被1至12个独立地选自以下的取代基取代：氘、卤素、-[C(RX1a)2]p-CN、-CF3、C1-C4烷基、-(CH2)p-OH、-[C(RX1a)2]p-OH、-[C(RX1a)2]p-O-C1-C4烷基、-NHCOC1-C4烷基、CONHC1-C4烷基、COH、-CO2H、-[C(RX1a)2]p-COO-C1-C4烷基、-(CH2)p-NH2、-[C(RX1a)2]p-NH2、-[C(RX1a)2]p-NH-C1-C4烷基、-[C(RX1a)2]p-N-(C1-C4烷基)2；其中p是0、1、2或3；其中每个RX1a独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RX1a基团一起形成C3-C6环烷基；
每个RY独立地选自氢、氘、卤素和C1-C4烷基，或两个RY基团一起形成C3-C6环烷基或氧代；且m是0、1或2。


36.权利要求23-34中任一项的方法，其中Q1是CH；Q2是N；且Q3是C。


37.权利要求23-35中任一项的方法，其中Q1是N；Q2是C；且Q3是N。


38.权利要求23-35中任一项的方法，其中Q1是CH；Q2是C；且Q3是N。


39.权利要求23-35中任一项的方法，其中Q1是N；Q2是N；且Q3是C。


40.权利要求23-39中任一项的方法，其中R1是氢或卤素。


41.权利要求23-40中任一项的方法，其中R2是卤素。


42.权利要求23-40中任一项的方法，其中R2选自卤素、–CF3、-CN、-C≡CH、-NH2和-NHC(O)CH3。


43.权利要求23-42中任一项的方法，其中R3是氢或卤素。


44.权利要求23和25-43中任一项的方法，其中Ar是。


45.权利要求23-44中任一项的方法，其中-Z-W-X-Y-是-C(RZ)2-C(RW)2-N(RX)-C(RY)2-。


46.权利要求23-44中任一项的方法，其中-Z-W-X-Y-是-C(RZ)2-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-。


47.权利要求45或46的方法，其中每个RZ独立地选自氢和卤素。


48.权利要求45或46的方法，其中两个RZ基团一起形成C3-C6环烷基。


49.权利要求23-46中任一项的方法，其中RZ和RW与它们所连接的碳一起形成C3-C6环烷基。


50.权利要求23-44中任一项的方法，其中-Z-W-X-Y-是-C(RW)2-CH(RX)-C(RY)2-。


51.权利要求23-50中任一项的方法，其中每个RW独立地选自氢和卤素。


52.权利要求23-50中任一项的方法，其中两个RW基团一起形成C3-C6环烷基。


53.权利要求23-52中任一项的方法，其中每个RY独立地选自氢和卤素。


54.权利要求23-52中任一项的方法，其中两个RY基团一起形成C3-C6环烷基。


55.权利要求34-54中任一项的方法，其中RX是RX1，其中RX1是杂芳基。


56.权利要求34-54中任一项的方法，其中RX是-CORX1。


57.权利要求34-54中任一项的方法，其中RX是-SO2RX1。


58.权利要求34-54中任一项的方法，其中RX是-(C1-C4亚烷基)-RX1。


59.权利要求56-58中任一项的方法，其中RX1是C3-C8环烷基。


60.权利要求56-58中任一项的方法，其中RX1是杂环基，其中所述杂环基任选地被1至12个作为卤素的取代基取代。


61.权利要求1-18和20中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂选自表6。


62.权利要求1-18和20中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂选自CHIR99021、LY2090314、AZD1080、GSK3抑制剂XXII、化合物I-6、化合物I-7和化合物I-12。


63.权利要求1-18和20中任一项的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂选自CHIR99021、LY2090314、AZD1080、GSK3抑制剂XXII、化合物I-6、化合物I-7和化合物I-12，且所述一种或多种Shh途径活化剂选自嘌吗啡胺、SAG、20-α羟基胆固醇和SAGHCl。


64.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是CHIR99021，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


65.权利要求64的方法，其中CHIR99021的浓度为约100nM至约10μM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


66.权利要求64的方法，其中CHIR99021的浓度为约100µM至约10mM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


67.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是CHIR99021，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


68.权利要求67的方法，其中CHIR99021的浓度为约100nM至约10μM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


69.权利要求67的方法，其中CHIR99021的浓度为约100µM至约10mM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


70.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是CHIR99021，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


71.权利要求70的方法，其中CHIR99021的浓度为约100nM至约10μM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


72.权利要求70的方法，其中CHIR99021的浓度为约100µM至约10mM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


73.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是CHIR99021，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


74.权利要求73的方法，其中CHIR99021的浓度为约100nM至约10μM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


75.权利要求73的方法，其中CHIR99021的浓度为约100µM至约10mM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


76.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是LY2090314，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


77.权利要求76的方法，其中LY2090314的浓度为约1nM至约100nM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


78.权利要求76的方法，其中LY2090314的浓度为约1µM至约100µM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


79.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是LY2090314，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


80.权利要求79的方法，其中LY2090314的浓度为约1nM至约100nM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


81.权利要求79的方法，其中LY2090314的浓度为约1µM至约100µM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


82.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是LY2090314，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


83.权利要求82的方法，其中LY2090314的浓度为约1nM至约100nM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


84.权利要求82的方法，其中LY2090314的浓度为约1µM至约100µM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


85.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是LY2090314，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


86.权利要求85的方法，其中LY2090314的浓度为约1nM至约100nM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


87.权利要求85的方法，其中LY2090314的浓度为约1µM至约100µM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


88.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是AZD1080，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


89.权利要求88的方法，其中AZD1080的浓度为约1µM至约100µM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


90.权利要求88的方法，其中AZD1080的浓度为约1mM至约100mM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


91.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是AZD1080，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


92.权利要求91的方法，其中AZD1080的浓度为约1µM至约100μM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


93.权利要求91的方法，其中AZD1080的浓度为约1mM至约100mM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


94.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是AZD1080，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


95.权利要求94的方法，其中AZD1080的浓度为约1µM至约100µM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


96.权利要求94的方法，其中AZD1080的浓度为约1mM至约100mM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


97.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是AZD1080，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


98.权利要求97的方法，其中AZD1080的浓度为约1µM至约100µM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


99.权利要求97的方法，其中AZD1080的浓度为约1mM至约100mM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


100.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是GSK3抑制剂XXII，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


101.权利要求100的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100nM至约10µM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


102.权利要求100的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100µM至约10mM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


103.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是GSK3抑制剂XXII，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


104.权利要求103的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100nM至约10μM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


105.权利要求103的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100µM至约10mM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


106.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是GSK3抑制剂XXII，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


107.权利要求106的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100nM至约10μM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


108.权利要求106的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100µM至约10mM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


109.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是GSK3抑制剂XXII，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


110.权利要求109的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100nM至约10µM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


111.权利要求109的方法，其中GSK3抑制剂XXII的浓度为约100µM至约10mM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


112.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-6，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


113.权利要求112的方法，其中化合物I-6的浓度为约1nM至约100nM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


114.权利要求112的方法，其中化合物I-6的浓度为约1µM至约100µM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


115.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-6，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


116.权利要求115的方法，其中化合物I-6的浓度为约1nM至约100nM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


117.权利要求115的方法，其中化合物I-6的浓度为约1µM至约100µM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


118.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-6，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


119.权利要求118的方法，其中化合物I-6的浓度为约1nM至约100nM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


120.权利要求118的方法，其中化合物I-6的浓度为约1µM至约100µM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


121.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-6，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


122.权利要求121的方法，其中化合物I-6的浓度为约1nM至约100nM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


123.权利要求121的方法，其中化合物I-6的浓度为约1µM至约100µM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


124.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-7，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


125.权利要求124的方法，其中化合物I-7的浓度为约1nM至约100nM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


126.权利要求124的方法，其中化合物I-7的浓度为约1µM至约100µM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


127.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-7，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


128.权利要求127的方法，其中化合物I-7的浓度为约1nM至约100nM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


129.权利要求127的方法，其中化合物I-7的浓度为约1µM至约100µM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


130.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-7，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


131.权利要求130的方法，其中化合物I-7的浓度为约1nM至约100nM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


132.权利要求130的方法，其中化合物I-7的浓度为约1µM至约100µM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


133.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-7，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


134.权利要求133的方法，其中化合物I-7的浓度为约1nM至约100nM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


135.权利要求133的方法，其中化合物I-7的浓度为约1µM至约100µM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


136.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-12，且所述一种或多种Shh途径活化剂是嘌吗啡胺。


137.权利要求136的方法，其中化合物I-12的浓度为约10nM至约1000nM，且嘌吗啡胺的浓度为约100nM至约10µM。


138.权利要求136的方法，其中化合物I-12的浓度为约10µM至约1000µM，且嘌吗啡胺的浓度为约100µM至约10mM。


139.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-12，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAG。


140.权利要求139的方法，化合物I-12的浓度为约10nM至约1000nM，且SAG的浓度为约1nM至约100nM。


141.权利要求139的方法，其中化合物I-12的浓度为约10µM至约1000µM，且SAG的浓度为约1µM至约100µM。


142.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-12，且所述一种或多种Shh途径活化剂是20-α羟基胆固醇。


143.权利要求142的方法，其中化合物I-12的浓度为约10nM至约1000nM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1µM至约100µM。


144.权利要求142的方法，其中化合物I-12的浓度为约10µM至约1000µM，且20-α羟基胆固醇的浓度为约1mM至约100mM。


145.权利要求63的方法，其中所述一种或多种Wnt激动剂是化合物I-12，且所述一种或多种Shh途径活化剂是SAGHCl。


146.权利要求145的方法，其中化合物I-12的浓度为约10nM至约1000nM，且SAGHCl的浓度为约10nM至约1µM。


147.权利要求145的方法，其中化合物I-12的浓度为约10µM至约1000µM，且SAGHCl的浓度为约10µM至约1mM。


148.权利要求1-147中任一项的方法，其中在毛囊中的Gli1、Krt15、CD34、Lgr5、Lgr6、Lrig1、Sox2、CD133、波形蛋白、多功能蛋白聚糖和/或碱性磷酸酶的表达增加。


149.药物组合物，所述药物组合物包含：药学上可接受的载体，和(i)Wnt激动剂，或其药学上可接受的盐，和(ii)SonicHedgehog(Shh)途径活化剂，或其药学上可接受的盐。


150.权利要求149的药物组合物，其中所述一种或多种Shh途径活化剂的浓度为有效体外Shh活化浓度的约5倍至约1000倍。


151.权利要求149或150的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：C卢斯，B泰特，R曼钱达，W麦克莱恩，MS哈里森，S斯特雷克，
申请(专利权)人：频率治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US