一种加快伤口愈合的组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种加快伤口愈合的组合物及其制备方法，属于伤口愈合技术领域。本发明专利技术提供了加快伤口愈合的组合物，其成分包括EGCG、乙酸钠、抗坏血酸、明胶和壳聚糖。所述加快伤口愈合组合物的制备方法包括：用乙酸钠缓冲液配制明胶缓冲溶液与壳聚糖缓冲溶液，膜过滤；将EGCG和抗坏血酸溶解于壳聚糖缓冲溶液中，再逐滴加入到明胶缓冲溶液中，搅拌、离心处理，取离心后的固体部分、冷冻干燥，得到所述的加快伤口愈合的组合物。本发明专利技术促进伤口愈合的组合物较EGCG水溶液可以显著促进糖尿病小鼠伤口的愈合，有很大的提高，具有极大的潜在伤口愈合的应用价值。

A composition for accelerating wound healing and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种加快伤口愈合的组合物及其制备方法
本专利技术属于伤口愈合的组合物
，涉及一种加快伤口愈合的组合物及其制备方法。
技术介绍
伤口愈合是一个复杂的生物学过程，有多种细胞和组织成分参与，包括成纤维细胞增殖、胶原分泌、新血管生成、表皮细胞增殖和伤口的再上皮化等。与非糖尿病人相比，糖尿病患者伤口部位的炎性反应细胞浸润相对较晚、浸润时间长且功能异常，使得伤口局部处于慢性炎症反应状态，难以向伤口愈合的后期过渡。糖尿病足是糖尿病的严重慢性并发症之一。糖尿病足的伤口难以愈合，这可能导致糖尿病患者截肢甚至死亡。因此，理想的伤口愈合组合物可以加速伤口愈合，减轻糖尿病患者的痛苦并降低治疗费用。EGCG（Epigallocatechingallate）即表没食子儿茶素没食子酸酯，是绿茶茶多酚的主要组成成分，是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用。但是EGCG本身容易受外界环境影响，在强酸、强碱、光照和高热条件下不稳定，这些因素限制了EGCG的应用。目前，虽然EGCG已被证明具有加速糖尿病伤口愈合的作用，但是EGCG的水溶液加速糖尿病伤口愈合的效率不高，其效率还有待提高。
技术实现思路
为了解决EGCG促伤口愈合效率不高，本专利技术提供一种加快伤口愈合的组合物，所述组合物的组分包括EGCG，乙酸钠、抗坏血酸、明胶和壳聚糖。本专利技术加快伤口愈合组合物的制备方法包括如下步骤：①制备浓度为0.1~0.3mol/L的乙酸钠溶液，并调整其pH为5.0~5.4，得到乙酸钠缓冲液。②用所述乙酸钠缓冲液配制0.1~0.3％明胶缓冲溶液与0.1~0.3％壳聚糖缓冲溶液，并用0.22~0.45μm的有机系滤膜除去两种溶液中不溶杂质。③按照EGCG含量3~4.5mg/mL，抗坏血酸含量0.02~0.03mg/mL的终浓度，将EGCG和抗坏血酸溶解于壳聚糖缓冲溶液中，得到混合溶液，完全溶解后将所述混合溶液按照体积比1:1的比例逐滴加入到所述0.1~0.3％明胶缓冲溶液中，两者混合均匀后搅拌处理，完全混合后得到悬浮液。④将所述悬浮液用低温高速离心机在4±2℃的条件下，以13000±2000r/min的条件离心20~60分钟，取离心后的固体部分。⑤将离心后的固体部分冷冻干燥，得到本专利技术所述的加快伤口愈合的组合物。其中，所述冷冻干燥的条件为在-70~-10℃的条件下常压冷冻干燥或真空冷冻干燥。其中，所述步骤③中搅拌处理具体是在转速为300±50r/min的条件下搅拌20~50min。其中，所述混合溶液按照1:1逐滴加入到所述0.1~0.3％明胶缓冲溶液中。其中，所述混合溶液逐滴加入的速度为0.5~1mL/min。其中，所述将EGCG和抗坏血酸溶解于壳聚糖缓冲溶液中具体采用超声辅助溶解。有益效果:我们通过离子交联制备了带正电的EV纳米粒，并在EVNPS中封装EGCG，得到本专利技术的促进伤口愈合的组合物，其中，EGCG的封装率为68.39±2.60％，而不加抗坏血酸，采用同样的方法，其EGCG的封装率只有不到30%，其促进伤口愈合的效果和纯品EGCG或者EGCG水溶液差不多。本专利技术制备的促进伤口愈合的组合物具有均匀的粒径，均匀的分布且没有明显的聚集。其中含有极少量的抗坏血酸，正是由于抗坏血酸的添加，显著提高了本专利技术促进伤口愈合的组合物中EGCG的封装率，也就提高了促进伤口愈合的效果。动物实验表明，本实施例制备的加快伤口愈合的组合物封装EGCG的封装率很高时，可以显著加快糖尿病小鼠伤口的愈合速度，封装率越低，其加速效果越差。而单独的抗坏血酸对糖尿病伤口愈合没有作用。分析本专利技术加快伤口愈合的机理，其可能是通过增加胶原蛋白的积累，促进血管生成和减少糖尿病小鼠伤口的炎性细胞浸润。本专利技术促进伤口愈合的组合物对糖尿病小鼠伤口愈合的作用显著优于空载组和EGCG组。本专利技术促进伤口愈合的组合物可以显著促进糖尿病小鼠伤口的愈合，具有极大的潜在伤口愈合的应用价值。该组合物具有缓释作用，使得EGCG发挥作用的时间变长，而EGCG溶液容易受外界环境的影响变化。附图说明：图1不同组小鼠在不同日期伤口愈合的图像。图2不同组不同时间小鼠的伤口愈合率柱状图。图3第五天和第十天各组皮肤伤口的HE染色的代表性图像。图4第五天和第十天各组Masson皮肤三色染色的代表性图像。图5第五天和第十天各组的免疫组织化学染色图像。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明，实施例中EGCG购买自江苏徳和生物科技有限公司，纯度98%以上，其他试剂均为分析纯。实施例1本实施例提供了一种加快伤口愈合的组合物，其主要成分包括乙酸钠、抗坏血酸、明胶和壳聚糖，其制备方法如下：1、用无水乙酸钠溶解于超纯水中，制备成0.2mol/L的乙酸钠溶液，并用盐酸或氢氧化钠将乙酸钠溶液的pH调整为5.4，得到乙酸钠缓冲液。2、分别将明胶与壳聚糖溶解于酸钠缓冲液中，配制成0.1％明胶缓冲溶液与0.1％壳聚糖缓冲溶液，并用0.45μm有机系滤膜除去两种溶液中不溶杂质。3、分别称取30mg的EGCG和0.2mg抗坏血酸，超声溶解于10mL的0.1％壳聚糖缓冲溶液中，待完全溶解后缓慢滴入10mL的0.1％明胶缓冲溶液中，滴加速度在0.5~1mL/min之间。两者混合均匀后继续磁力搅拌30min,转速为300r/min，完全混合后得到悬浮液。其中，超声功率在20~40kHz范围内。4、将所述悬浮液用低温高速离心机在4±2℃的条件下，以13000r/min的条件离心30分钟，取离心后的固体部分。5、将离心后的固体部分在-18℃的条件下冷冻干燥，得到本专利技术所述的加快伤口愈合的组合物。专利技术人对上述组合物做了动物实验，具体方法如下。1)糖尿病模型的建立雄性ICR小鼠30只，体重28-30克，八周龄，由浙江维通利华有限责任公司提供。安置在SPF级动物房，环境温度25±2℃，相对湿度为70-80%，12小时光照，12小时黑暗条件适应性饲养一周。于实验前一天晚上禁食不禁水12小时。测体重及空腹血糖，单次腹腔注射STZ溶液（120mg/kg）。空白对照组按体重注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。确定糖尿病模型前晚上禁食不禁水12小时。血糖值超过11.1mmol/L的小鼠视为造糖尿病模型成功。将造模成功的小鼠随机分组稳定两天后进行皮肤伤口的造模。2)建立皮肤伤口模型将小鼠分为五组，分别是：空白对照组（Control）、模型组（Model）、空载组（No-loadNPS）、EGCG组（EGCG）、本实施例组合物组（EVNPS）。空白对照组：采用的小鼠为非糖尿病正常小鼠，用0.9%生理盐水擦拭伤口。模型组：采用的小鼠为患有糖尿病的小鼠，用0.9%生理盐水擦拭伤口。空载组：采用的小鼠为患本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种加快伤口愈合的组合物，其特征在于：所述组合物的组分包括EGCG，乙酸钠、抗坏血酸、明胶和壳聚糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种加快伤口愈合的组合物，其特征在于：所述组合物的组分包括EGCG，乙酸钠、抗坏血酸、明胶和壳聚糖。


2.一种权利要求1所述的加快伤口愈合组合物的制备方法，其特征在于：所述加快伤口愈合组合物的制备方法包括如下步骤：
①制备浓度为0.1~0.3mol/L的乙酸钠溶液，并调整其pH为5.0~5.4，得到乙酸钠缓冲液；
②用所述乙酸钠缓冲液配制0.1~0.3％明胶缓冲溶液与0.1~0.3％壳聚糖缓冲溶液，并用0.22~0.45μm有机系滤膜除去两种溶液中不溶杂质；
③按照EGCG含量3~4.5mg/mL，抗坏血酸含量0.02~0.03mg/mL的终浓度，将EGCG和抗坏血酸溶解于壳聚糖缓冲溶液中，得到混合溶液，完全溶解后将所述混合溶液逐滴加入到所述0.1~0.3％明胶缓冲溶液中，两者混合均匀后搅拌处理，完全混合后得到悬浮液；
④将所述悬浮液在4±2℃的条件下，以13000±2000r/min的条件离心20~60分钟，取离心后的固体部分；
⑤将离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐燕，孙明慧，蔡吓强，刘增辉，解千金，董旭，汪莹，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34