一种过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株及其构建方法，属于微藻基因工程技术领域。构建方法包括以下步骤：(1)取三角褐指藻，提取RNA，合成cDNA，利用引物PtTrxL‑F和引物PtTrxL‑R，PCR扩增，得到核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的目的基因；(2)将表达载体质粒酶切，纯化，与目的基因连接转化，构建重组质粒；(3)将培养至对数期的普通小球藻，离心，加入线性化的重组质粒，进行电击，培养，重悬，筛选，得过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株。有益效果：提供一种过表达三角褐指藻Thioredoxin‑like(TrxL)基因的转化藻株，为下一步PtTrxL参与小球藻叶绿体光合蛋白氧化调节的作用机制的研究奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微藻基因工程，具体涉及一种硫氧还蛋白超家族基因thioredoxin-like克隆、重组载体构建及遗传转化。

技术介绍

1、硫氧还蛋白超家族基因thioredoxin(trx)在生物体中广泛保守，可接收来自fdx和nadph的信号，利用巯基发生氧化还原反应形成二硫键改变蛋白质构象。植物体内trx可分为trx f、trx m、trx x、trx y、trx z、trx h、trx o等亚型，位于叶绿体中的是trx f、trxm、trx x、trx y、trx z，同时还存在一些trx-like蛋白。trx f与trx h属同工酶，trx f利用活性位点周围所带正电荷与叶绿体靶蛋白表面负电结合，参与光合碳固定。trx m亚型之间存在功能冗余，trx m1、trx m2、trx m4与psⅱ核心亚基发生互作，有助于cp47装备到psⅱ。trx y1、trx y2能有效激活促进二氧化碳(co2)与碳酸盐平衡的β-碳酸酐酶(β-ca)。trx-like能够将trx靶向蛋白的还原能力转移至h2o2。

2、nadph依赖型trxr(ntrs)作本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)目的基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)表达载体质粒为真核表达载体pHY21载体质粒。

4.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因PtTrxL的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)PCR扩增的条件为95℃3min预变性，95...

【技术特征摘要】

1.一种过表达硫氧还蛋白超家族基因pttrxl的藻株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因pttrxl的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)目的基因编码的氨基酸序列如seq id no:2所示。

3.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因pttrxl的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)表达载体质粒为真核表达载体phy21载体质粒。

4.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因pttrxl的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)pcr扩增的条件为95℃3min预变性，95℃15s，60℃15s，72℃15s，35个循环，72℃延伸5min。

5.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因pttrxl的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)连接转化的试剂盒为vazyme clonexpress multis one stepcloning kit。

6.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋白超家族基因pttrxl的藻株的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)电击：电压1500v，电容50μf，电阻400ω。

7.根据权利要求1所述的过表达硫氧还蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：马瑜晗，黄昌悦，李明浩，张信得，黄名苑，武文泉，孙莹，周心翊，吴丽芳，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：