本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种慢性阻塞性肺病诊断试剂及试剂盒。所述慢性阻塞性肺病诊断试剂包含Plasmenyl‑PC 38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3‑脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA 20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4‑羟基二十二碳六烯酸。多个生物标记物联用更能提高检测的精度，减少慢性阻塞性肺病检测的假阳性率。
A diagnostic kit for COPD
【技术实现步骤摘要】
一种慢性阻塞性肺病诊断试剂及试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种慢性阻塞性肺病诊断试剂及试剂盒。
技术介绍
慢性阻塞性肺病(COPD)是不可逆的气流阻塞和气道炎症，其严重程度通常是渐进性的，并且与吸烟或生物质污染物暴露有关。近年来严重影响到了人类的身体健康，患病几率大，据我国调查显示慢阻肺的患病率高达8.2％；且并发症较多，比如高血压、肺癌、骨质疏松、抑郁等疾病；致死率高，到2020年将成为全球第3大致死疾病；经济负担加重，世界卫生组织有资料表明2020年慢阻肺将居全球疾病第5位经济负担，严重影响患者的生存质量。肺泡灌洗液是直接接触COPD病灶部位的生物样品，能真实反映COPD病理生理过程中肺部的代谢物变化，基于代谢组学的方法表征COPD模型大鼠肺泡灌洗液中的代谢物轮廓，筛选鉴定出潜在生物标志物，为临床诊断治疗COPD做出理论参考。目前，COPD的发病机制尚未完全阐明，现在普遍认为中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞引起的气道、肺实质及肺血管的慢性炎症使COPD的特征性改变。此外，蛋白酶-抗蛋白酶失衡、氧化应激等也与COPD的发生发展密切相关，故据此将COPD相关生物学标志物分为：(1)炎症性生物学标志物，包括炎症细胞及炎症因子，如中性粒细胞、巨噬细胞、白介素(interleukin，IL)家族等如IL-2，IL-4，IL-6等，这类标志物虽然敏感性较强，但特异性较差；(2)蛋白酶和抗蛋白酶生物学标志，如细胞外基质蛋白酶(MatrixMetalloproteinase，MMP)-8、MMP-9等；(3)肺源性标志物，如肺表面活性蛋白(surfactantprotein，SP)-D、Clara细胞蛋白(Claracellprotein，CC)16、趋化因子配体(CCChemokineLigand，CCL)-18等。后两类标志物在患者血清中和在肺泡灌洗液中检测结果差异较大，故有必要对COPD的标记物进行进一步的研究。因此，需要开发新的特异性好、稳定性好的新的标志物。
技术实现思路
本专利技术提供了一种慢性阻塞性肺病诊断试剂及试剂盒，慢性阻塞性肺病诊断试剂包含Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸，上述物质是特异性好、稳定性好的新的慢性阻塞性肺病诊断标志物。本专利技术的第一个目的是提供一种慢性阻塞性肺病诊断试剂，包含Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸。优选的，所述慢性阻塞性肺病诊断试剂，将Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸中任一物质或者11种物质联合使用作为慢性阻塞性肺病诊断的标志物。优选的，所述慢性阻塞性肺病诊断试剂，所述Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸存在于血清或者肺泡灌洗液中。优选的，所述慢性阻塞性肺病诊断试剂，采用LC-MS方法检测Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸含量；当Plasmenyl-PC38:4浓度为7.4～19.7nmol/mL、花生四烯酸浓度为96.5～156.4nmol/mL、丝氨酸浓度为48～62nmol/mL、3-脱氢左旋肉碱浓度为5.6～9.7nmol/mL、丙酰肉碱浓度为5.8～9.4nmol/mL、蛋氨酸浓度为19～30nmol/mL、FA20:1浓度为64～102nmol/mL、脂肪酸20:5浓度为57～98nmol/mL、神经鞘氨醇浓度为0.4～1.3nmol/mL、脂氧素A5浓度为2.7～6.3nmol/mL、4-羟基二十二碳六烯酸浓度为4.7～9.1nmol/mL时可诊断具有慢性阻塞性肺病。当上述物质的检测值均小于各自下限值则诊断为正常，若其中任一种或几中物质的检测值大于等于各自下限值则诊断具有慢性阻塞性肺病。优选的，所述慢性阻塞性肺病诊断试剂，LC-MS方法检测的条件如下：色谱条件：仪器采用ThermoUltimate3000设备，使用ACQUITYHSST31.8μm的色谱柱，正离子流动相为0.1ml/100ml甲酸水-0.1ml/100ml甲酸乙腈，负离子流动相为0.1ml/100ml甲酸铵水-乙腈；以8℃的自动进样器温度，0.25mL/min的流速，40℃的柱温，进样5μL进行梯度洗脱；质谱条件：仪器采用ThermoQExactiveFocus设备，正负离子电离模式，电喷雾离子源，正离子喷雾电压为3.80kV，负离子喷雾电压为2.50kV，鞘气45bar，辅助气15bar，毛细管温度为325℃，碰撞电压为30eV，以分辨率700进行全扫描，Mass的扫描范围为81～1000，并采用HCD进行二级裂解，同时采用动态排除去除无必要的MS/MS信息。本专利技术的第二个目的是提供一种所述的慢性阻塞性肺病诊断试剂在制备慢性阻塞性肺病诊断试剂盒中的应用。与现有技术相比，本专利技术提供的一种慢性阻塞性肺病诊断试剂及试剂盒，至少具有以下有益效果：本专利技术用LC-MS联用技术并结合SIMCA软件进行主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)分析方法研究了正常空白大鼠和COPD模型大鼠肺泡灌洗液的代谢轮廓。从结果来看，共筛选出45个潜在的生物标志物，并列出空白组与模型组BALF中相对含量变化显著的30种代谢物，这30种代谢物可分为磷脂及脂肪酸类和小分子氨基酸类，说明COPD模型的病理生理代谢变化与磷脂及脂肪酸代谢和氨基酸代谢的紊乱有很大的关联。我们还采用SPSS数据分析及代谢物ROC曲线面积验证，确定Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸(20:5)、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸为生物标志物，上述11种物质联合使用作为慢性阻塞性肺病诊断标志物时精度最高。该方法的优点：1LC-MS方法检测样本具有高通量，高精度等特点，能够大大提高检测样本的效率并降低检测成本；2多个生物标记物联用更能提高检测的精度，减少慢性阻塞性肺病检测的假阳性率。附图说明图1是本专利技术实施例构建的COPD模型相关炎症因子检测结果；图2是肺泡灌洗液样品的正离子流图；图3是肺泡灌洗液样品的负离子流图；图4是QC样本的PCA得分图；图4A为正离子模式下的得分图，图4B为负离子模式下的得分图；图5是BALF样本本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种慢性阻塞性肺病诊断试剂，其特征在于，包含Plasmenyl-PC 38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA 20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸。/n
【技术特征摘要】
1.一种慢性阻塞性肺病诊断试剂，其特征在于，包含Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸。
2.根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病诊断试剂，其特征在于，将Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸中任一物质或者11种物质联合使用作为慢性阻塞性肺病诊断的标志物。
3.根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病诊断试剂，其特征在于，所述Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸存在于血清或者肺泡灌洗液中。
4.根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病诊断试剂，其特征在于，采用LC-MS方法检测Plasmenyl-PC38:4、花生四烯酸、丝氨酸、3-脱氢左旋肉碱、丙酰肉碱、蛋氨酸、FA20:1、脂肪酸20:5、神经鞘氨醇、脂氧素A5、4-羟基二十二碳六烯酸含量；当Plasmenyl-PC38:4浓度为7.4～19.7nmol/mL、花生四烯酸浓度为96.5～156.4nmol/mL、丝氨酸浓度为48～62nmol/mL、3-脱氢左旋肉碱浓度为5.6～9....
【专利技术属性】
技术研发人员：黄海英，赵鹏，杜燕，刘学芳，冯素香，李建生，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。