本发明专利技术提供用于以降低的脱靶效应进行基因沉默的UNA寡聚物。所述UNA寡聚物可以含有第一链和第二链，每条链长度为19‑29个单体，所述单体为UNA单体和不同的核酸单体。实施方案包括药物组合物和用于通过向对象施用UNA寡聚物来以降低的脱靶效应治疗或预防TTR相关淀粉样变性的方法。
Una oligomers with reduced Miss effect in gene silencing
【技术实现步骤摘要】
在基因沉默中具有降低的脱靶效应的UNA寡聚物
本专利技术涉及可由基因沉默操作的生物医药和治疗领域。更具体地，本专利技术涉及在基因沉默中具有降低的脱靶效应的活性剂的结构、组合物和用途。所述活性剂是可用于基因沉默，以及用于治疗转甲状腺素蛋白相关淀粉样变性的方法等中的UNA寡聚物。专利技术背景基因沉默技术如RNA干扰的主要缺点是脱靶效应的发生。脱靶效应发生于，当基因沉默药剂对于非其靶向的基因产物有影响并因此是有害的时候。脱靶效应逐渐成为发展基因沉默治疗剂的主要障碍之一。降低脱靶效应的一种方法是明智地设计基因沉默药剂的结构，以避免对除期望靶标之外的基因的影响。在一些情况中，可将基因沉默药剂混合，以使具有特定脱靶效应的药剂的浓度降低。在其它情况中，可以对基因沉默药剂进行化学修饰，以避免脱靶效应。这些常规方法已经能够降低脱靶效应，但是它们难以实施。需要的是，具有降低的脱靶效应的基因沉默药剂。对于避免或降低脱靶效应的通过RNA干扰操作来治疗性寡聚物的方法和组合物具有长期需求。专利技术概述本专利技术提供用于基因沉默的活性剂，以及使用所述活性剂治疗或预防疾病的方法。具体而言，所述活性剂是在基因沉默中具有降低的脱靶效应的UNA寡聚物。本专利技术的UNA寡聚物是以下详细描述的未锁的核单体活性剂(unlockednucleomonomeractiveagent)(UNA).本专利技术的UNA寡聚物可有效用于针对众多基因靶标以降低的脱靶效应进行基因沉默。在某些方面，本专利技术提供用于抑制ApoCIII表达的UNA寡聚物。在一些方面，本专利技术提供用于淀粉样变性的治疗。更具体而言，本专利技术涉及用在转甲状腺素蛋白的敲低中具有降低的脱靶效应的UNA寡聚物治疗转甲状腺素蛋白相关淀粉样变性的方法。在某些方面，本专利技术提供用于抑制TTR表达和V30MTTR表达的UNA寡聚物，其可用于以降低的脱靶效应治疗淀粉样变性。该UNA寡聚物可以含有第一链和第二链，各链长度为19-29个单体，所述单体为UNA单体和核酸单体。实施方案包括药物组合物和通过向对象施用UNA寡聚物来以降低的脱靶效应治疗或预防TTR相关淀粉样变性的方法。在某些方面，本专利技术的UNA寡聚物可以用于植物中进行基因沉默。本专利技术的实施方案包括下述：用于抑制靶基因表达的UNA寡聚物，所述寡聚物包含第一链和第二链，各链长度为19-29个单体，所述单体包括UNA单体和核酸单体，其中所述寡聚物具有长度为14至29个单体的双螺旋结构，并且其中与具有相同靶标的siRNA相比，所述寡聚物具有降低的脱靶效应。以上UNA寡聚物，其中所述第二链为用于RNA干扰的引导链(guidestrand)，以及所述第一链是用于RNA干扰的过客链(passengerstrand)。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物在所述第一链1端第一位点处含有UNA单体，在所述第一链3端最后两个位点中的一处或两处含有UNA单体，以及在所述第二链3端最后两个位点中的一处或两处含有UNA单体。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物在所述第一链1端第一位点处含有UNA单体，以及在所述第一链3端最后两个位点中的一处或两处含有UNA单体。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物在所述第一链1端第一位点处含有UNA单体，以及在所述第二链3端最后两个位点中的一处或两处含有UNA单体。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物在所述第一链1端第一位点处含有UNA单体。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物在所述第一链3端最后两个位点中的一处或两处含有UNA单体，以及在所述第二链3端最后两个位点中的一处或两处含有UNA单体。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物具有一个或两个悬突(overhang)。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物以降低的脱靶效应抑制TTR的表达。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物以降低的脱靶效应抑制载脂蛋白基因的表达。以上UNA寡聚物，其中所述寡聚物在体内抑制TTR的表达。以上UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物以降低的脱靶效应靶向抑制植物中的基因表达。以上UNA寡聚物，其包含碱基修饰的、糖修饰的或连接修饰的至少一个核酸单体。以上UNA寡聚物，其中所述寡聚物包含选自SEQIDNO：3-32的序列。以上UNA寡聚物，其中所述寡聚物在第二链5’端的第2-8位点中任何一处或多处包含UNA单体。药物组合物，其包含以上UNA寡聚物和药学可接受的载体。以上药物组合物，其中所述组合物能够局部或全身施用。以上药物组合物，其中所述组合物能够经静脉内、皮下、肺部、肌肉内、腹膜内、真皮或口服施用。以上药物组合物，其包含脂质制剂。以上药物组合物，其包含选自下述的一种或多种脂质：阳离子脂质、阴离子脂质、固醇、聚乙二醇化的脂质以及前述的任何组合。以上药物组合物，其中所述组合物基本不含脂质体。以上药物组合物，其中所述组合物含有脂质体。治疗或预防TTR相关淀粉样变性的方法，其包括向有需要的对象施用有效量的以上UNA寡聚物。以上方法，其中所述TTR相关淀粉样变性为ATTR。以上方法，其中所述对象为人。以上方法与对照相比，其中所述方法以降低的脱靶效应将对象中的TTR降低至少10％。以上方法，其中所述有效量为0.001至50.0mg/kg的剂量。以上方法，其中TTRmRNA的表达降低，持续至少5天。以上方法，其中所述方法减轻了对象中的周围神经病变或自主神经病变。抑制TTR基因在细胞中表达的方法，其包括用以上UNA寡聚物处理所述细胞。抑制TTR基因在哺乳动物中表达的方法，其包括向所述哺乳动物施用以上UNA寡聚物。抑制基因在植物中表达的方法，其包括向所述植物施用长度为10至1000个碱基对的UNA寡聚物。附图说明图1：图1显示，用PSICHECK-2载体(Promega)，在双荧光素酶报告基因分析中，UNA寡聚物证实了出人意料地降低对ApoCIIImRNA表达的脱靶活性。具体地，与在过客链中位于5’端位点不含有UNA单体的可比较的UNA寡聚物ATS98相比，在过客链中位于5’端的位点和位点以及在引导链中的位点含有UNA单体的UNA寡聚物ATX98大大降低了过客链(PSCM)的脱靶敲低活性。UNA寡聚物ATX98具有超过250倍降低的脱靶敲低。图2：图2显示，利用PSICHECK-2载体，在双荧光素酶报告基因分析中，UNA寡聚物证实了出人意料地降低了对ApoCIIImRNA的表达的脱靶活性。具体地，与在过客链中位于5’端位点不含有UNA单体的可比较的UNA寡聚物ATS100相比，在过客链位于5’端的位点和位点以及在引导链的位点含有UNA单体的UNA寡聚物ATX100大大降低了过客链(PSCM)的脱靶敲低活性。UNA寡聚物ATX100具有近乎100倍降低的脱靶敲低。图3：图3显示，对于TTRmRNA的表达，某些UN本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于抑制靶基因表达的UNA寡聚物，所述寡聚物包含第一链和第二链，每条链长度为19-29个单体，所述单体包括UNA单体和核酸单体，其中所述寡聚物具有长度为14至29个单体的双螺旋结构，并且其中与具有相同靶标的siRNA相比，所述寡聚物具有降低的脱靶效应，并且其中所述寡聚物包含选自以下的序列：/n
【技术特征摘要】
20140325 US 61/970,3201.用于抑制靶基因表达的UNA寡聚物，所述寡聚物包含第一链和第二链，每条链长度为19-29个单体，所述单体包括UNA单体和核酸单体，其中所述寡聚物具有长度为14至29个单体的双螺旋结构，并且其中与具有相同靶标的siRNA相比，所述寡聚物具有降低的脱靶效应，并且其中所述寡聚物包含选自以下的序列：
其中代表UNA-A，代表UNA-U，代表UNA-G，mU代表2’-O-甲基修饰的U核糖核苷酸，以及dT代表2’-脱氧T核苷酸。
2.如权利要求1所述的UNA寡聚物，其中所述第二链为用于RNA干扰的引导链，以及所述第一链为用于RNA干扰的过客链。
3.如权利要求1所述的UNA寡聚物，其中所述第一链和第二链相连，并在一端形成具有环的双螺旋区域。
4.如权利要求1所述的UNA寡聚物，其中所述UNA寡聚物以降低的脱靶效应抑制TTR的表达。
5.如权利要求1所述的UNA寡聚物，其中所述寡聚物抑制TTR的体内表达。
6.药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的UNA寡聚物以及药学可接受的载体。
7.如权利要求6所述的药物...
【专利技术属性】
技术研发人员：立川洁，约瑟夫·E·佩恩，帕德马纳巴·契吾库拉，
申请(专利权)人：阿克丘勒斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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