长链非编码RNA XLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种长链非编码RNA XLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用。本发明专利技术检通过基因工程技术外源合成lncRNA XLOC_025806的超表达载体和沉默试剂lncRNA XLOC_025806 Silencer，检测超表达/沉默lncRNA XLOC_025806后人脐静脉内皮细胞的增殖、凋亡情况，结果证实了lncRNA XLOC_025806能够参与抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进内皮细胞体外小管的形成，进一步说明lncRNA XLOC_025806通过调控人脐静脉内皮细胞的功能参与血管新生过程。

Long-chain non coding RNA xloc_andits application in human umbilical vein endothelial cells

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNAXLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用
本专利技术属于细胞工程和基因工程
，具体涉及一种长链非编码RNAXLOC_025806及其在人脐静脉内皮细胞中的应用。
技术介绍
血管新生(Angiogenesis)指的是新生的血管从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而来，主要包括血管内皮细胞的增殖、出芽和迁移，它是一种十分复杂的生物过程，这个过程取决于基因表达的微妙调节，也需要多种因子共同参与。人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilicalVeinEndothelialCells，HUVECs)是由一层扁平细胞所组成的专门上皮细胞，它可形成血管的内壁。内皮细胞具有多种生物学功能，其中包括血管再生、动脉硬化、控制血管收缩和舒张等等。内皮细胞具有干细胞的潜能，理论上可传50～60代，与血管新生具有十分重要的联系，即内皮细胞的自我增殖能力可直接影响血管新生，因此它是研究血管形成的理想细胞。长链非编码RNA(Longnon-codingRNA，lncRNA)是一类长度超过200nt的非编码RNA。研究表明，lncRNA广泛参与生物过程，可以从表观修饰水平，转录水平和转录后水平参与基因的表达调控，进而在细胞的增殖、分化、存活和转移过程产生重要作用。但目前国内外尚无关于lncRNAXLOC_025806的表达变化对人脐静脉内皮细胞功能调节的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种长链非编码RNAXLOC_025806。本专利技术的另一目的在于提供一种抑制lncRNAXLOC_025806功能的沉默试剂。本专利技术的再一目的在于提供所述的长链非编码RNAXLOC_025806或抑制lncRNAXLOC_025806功能的沉默试剂在人脐静脉内皮细胞中的应用。通过基因工程技术改变lncRNAXLOC_025806在人脐静脉内皮细胞中的表达量，确定其在调控人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及血管形成中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种长链非编码RNAXLOC_025806(lncRNAXLOC_025806)，其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。一种抑制所述长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂，为lncRNAXLOC_025806Silencer，其核苷酸序列如下所示(SEQIDNO：2)：GAGACGAATTATCAAATACCACTTGGATTGAACACTGATGAAGCAAGCATGGATTGACTTCAGCCACAGCAACCCAGACCATTTTCTTTCACCCACCAACCCTAGCCTTTACTGACC。一种含有所述长链非编码RNAXLOC_025806的重组表达载体。一种重组细胞，为将上述重组表达载体或上述抑制长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂转染至人脐静脉内皮细胞中。所述的长链非编码RNAXLOC_025806或所述的抑制所述长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂在人脐静脉内皮细胞中的应用，所述应用的环境为体外环境。所述的长链非编码RNAXLOC_025806抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管，lncRNAXLOC_025806通过调控人脐静脉内皮细胞的功能参与血管新生过程。所述的抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管为通过增加外源性长链非编码RNAXLOC_025806的方式实现。所述的增加外源性长链非编码RNAXLOC_025806通过如下方式实现：将长链非编码RNAXLOC_025806连接到pcDNA3.1(-)载体上，构建长链非编码RNAXLOC_025806的超表达载体，然后将其转染到人脐静脉内皮细胞中。所述的长链非编码RNAXLOC_025806的超表达载体优选为通过如下方法构建得到：以人脐静脉内皮细胞cDNA为模板，以lncRNA-F和lncRNA-R为引物进行PCR扩增，得到lncRNAXLOC_025806；然后用KpnI和NheI酶进行双酶切，回收、连接到pcDNA3.1(-)载体上，得到长链非编码RNAXLOC_025806的超表达载体；其中，lncRNA-F和lncRNA-R的核苷酸序列如下所示：lncRNA-F：CTAGCTAGCTAGCAATGCTAGATCTTTAACCCACTGA；lncRNA-R：CGGGGTACCCCGATGGATCCTTTAATCAATTGCCTGG。所述的抑制长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管。所述的促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管为通过转入外源性lncRNAXLOC_025806Silencer的方式实现，即直接将lncRNAXLOC_025806Silencer转染到人脐静脉内皮细胞中。所述的长链非编码RNAXLOC_025806在抑制促进人脐静脉内皮细胞的增殖，促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，和/或促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管的药物中的应用。所述的药物中含有长链非编码RNAXLOC_025806的序列和/或含有重组表达载体。所述的重组表达载体含有长链非编码RNAXLOC_025806的序列，且能在人脐静脉内皮细胞中表达长链非编码RNAXLOC_025806；优选为通过如下方法构建得到：以人脐静脉内皮细胞cDNA为模板，以lncRNA-F和lncRNA-R为引物进行PCR扩增，得到lncRNAXLOC_025806；然后用KpnI和NheI酶进行双酶切，回收、并连接到pcDNA3.1(-)载体上，得到重组表达载体；其中，lncRNA-F和lncRNA-R的核苷酸序列如下所示：lncRNA-F：CTAGCTAGCTAGCAATGCTAGATCTTTAACCCACTGA；lncRNA-R：CGGGGTACCCCGATGGATCCTTTAATCAATTGCCTGG。所述的抑制长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂在制备促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，和/或抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管的药物中的应用。所述的药物中含有lncRNAXLOC_025806Silencer的序列，且能在人脐静脉内皮细胞中抑制长链非编码RNAXLOC_025806的表达。本专利技术的验证结果如下：1、本专利技术通过EdU法检测人脐静脉内皮细胞的增殖情况，发现超表达lncRNAXLOC_025806后，与对照组(pcDNA3.1)相比，人脐静脉内皮细胞的增殖率显著降低(P<0.05)(图1)。沉默lncRNAXLOC_025806后，与对照组(NC)相比，人本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长链非编码RNA XLOC_025806，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNAXLOC_025806，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。


2.一种抑制权利要求1所述长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂，其特征在于：所述的沉默试剂为lncRNAXLOC_025806Silencer，其核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。


3.一种含有权利要求1所述的长链非编码RNAXLOC_025806的重组表达载体。


4.一种重组细胞，其特征在于：为将权利要求3所述的重组表达载体或权利要求2所述的沉默试剂转染至人脐静脉内皮细胞中。


5.权利要求1所述的长链非编码RNAXLOC_025806或权利要求2所述的抑制长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂在人脐静脉内皮细胞中的应用，其特征在于：
所述应用的环境为体外环境；
所述的长链非编码RNAXLOC_025806抑制人脐静脉内皮细胞的增殖、促进人脐静脉内皮细胞的凋亡，并促进人脐静脉内皮细胞形成体外小管；
所述的抑制长链非编码RNAXLOC_025806功能的沉默试剂促进人脐静脉内皮细胞的增殖，抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡，并抑制人脐静脉内皮细胞形成体外小管。


6.根据权利要求5所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：张豪，王希龙，袁晓龙，潘金春，李加琪，龚宝勇，张哲，高洪彬，唐龙龙，谭伟江，李丽莹，梁十，
申请(专利权)人：华南农业大学，广东省实验动物监测所，
类型：发明
国别省市：广东;44