用于糖抗原72-4检测的样品稀释组合物、检测试剂和包含检测试剂的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医学检验领域，特别涉及用于糖抗原72‑4检测的样品稀释组合物、检测试剂以及包含检测试剂的试剂盒。试剂盒主要由包被CA72‑4抗体的磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液、校准品组成。本发明专利技术可用于胃癌、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌、宫颈癌等肿瘤疾病的辅助诊断和术后监测。本试剂盒检测耗费时间短，大大节省了检验人员的时间；本发明专利技术试剂盒采用双抗体夹心法，线性范围宽，在临床上实用性强；本发明专利技术试剂盒采用一种特有的样品稀释液，不仅可以消除新旧样本差异，而且有效地降低了HAMA引起的假阳性干扰，大大提高了CA72‑4的检测准确度；本试剂盒采用的是两步法，降低了临床上发生HOOK的风险。

Sample dilution composition, detection reagent and kit containing detection reagent for sugar antigen 72-4 detection

【技术实现步骤摘要】
用于糖抗原72-4检测的样品稀释组合物、检测试剂和包含检测试剂的试剂盒
本专利技术涉及医学检验领域，特别涉及用于糖抗原72-4检测的样品稀释组合物、检测试剂以及包含检测试剂的试剂盒。
技术介绍
糖类抗原CA72-4(carbohydrateantigen72-4,CA72-4)是一种高分子量的黏蛋白(分子量为220-400KD),由Colcher等人在1981年发现。因其可特异性的与两株单克隆抗体B72.3和CC49结合，故称为CA72-4。其抗原决定簇为唾液酸化的寡糖结构。在胃癌患者中有较高的阳性率。在一些结肠癌、粘液性卵巢癌也有表达。在多种恶性肿瘤疾病(包括胃癌、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌、胆囊癌、乳腺癌、宫颈癌等)发现CA72-4的血清水平有升高。CA72-4升高与疾病的分期有关系。外科手术后，CA72-4水平可迅速下降至正常值。如果肿瘤组织完全切除，CA72-4可持续维持在正常水平。在70％的复发病例中，CA72-4浓度首先升高，或在临床诊断为复发时也已升高。另外，血清CA72-4升高可见于以下良性疾病：胰腺炎、肝硬化、肺病、风湿病、妇科病卵巢良性疾病、卵巢囊肿、乳腺病和胃肠道良性功能紊乱等。与其他标志物相比，CA72-4对良性疾病的诊断特异性较高。糖抗原72-4检测实验室常用的检查方法主要为酶联免疫法(ELISA)和化学发光法(CLIA)，其中酶联免疫法的试剂盒存在灵敏度低和线性范围窄的缺点，而化学发光法的试剂盒每次实验操作都要使用校准品进行定标操作繁琐，反应时间较长。并且这种方法均为半自动操作，不利于实验室检验流水线化的提升。因此，提供一种用于糖抗原72-4检测的检测试剂以及包含检测试剂的试剂盒具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种用于糖抗原72-4检测的样品稀释组合物、检测试剂以及包含检测试剂的试剂盒。本专利技术试剂盒可实现CA72-4的自动化检测，操作简便，检测速度快(40min即可出检测结果)，检测范围宽，HOOK风险小，更便于临床使用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种用于糖抗原72-4(CA72-4)检测的样品稀释组合物，包括如下组分：所述蛋白质类稳定剂包括酪蛋白、鱼明胶或牛血清白蛋白中的一种或两者以上混合物；所述阻断剂为中和HAMA干扰的人抗鼠抗体。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述缓冲液包括Tris-NaCl、Bis-tris、PBS、MOPS、MES或Taps中的一种；所述防腐剂包括Proclin300、MIT、Bro、IPBC或NaN3中的一种或两者以上的混合物；所述EDTA为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾中的一种或两者的混合物；所述色素为胭脂红色素或果绿色素。在上述研究的基础上，本专利技术提供了所述的样品稀释组合物在制备用于糖抗原72-4(CA72-4)检测的试剂或试剂盒中的应用。此外，本专利技术还提供了所述的样品稀释组合物在制备用于肿瘤诊断或术后监测中的应用。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述肿瘤为胃癌、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌或宫颈癌。本专利技术还提供了用于糖抗原72-4(CA72-4)检测的试剂组合物，包括所述的样品稀释组合物、包被有CA72-4捕获抗体的磁珠混悬液、含有示踪标记物标记的CA72-4标记抗体的酶结合物溶液和含有梯度浓度的CA72-4抗原的校准品。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述包被有CA72-4捕获抗体的磁珠混悬液包括磁珠原液、CA72-4抗体和封保液；所述封保液包括如下组分：所述含有示踪标记物标记的CA72-4标记抗体的酶结合物溶液包括示踪标记物标记的CA72-4抗体和酶结合物稀释液，所述酶结合物稀释液包括如下组分：所述含有梯度浓度的CA72-4抗原的校准品包括CA72-4抗原和标准品稀释液，所述标准品稀释液包括如下组分：缓冲液0.01～0.1M防腐剂1～3‰(w/v)酪蛋白1～3‰(w/v)所述缓冲液包括Tris-NaCl、Bis-tris、PBS、MOPS、MES或Taps中的一种；所述防腐剂包括Proclin300、MIT、Bro、IPBC或NaN3中的一种或两者以上的混合物；所述包被有CA72-4捕获抗体的磁珠混悬液的制备方法为：取所述磁珠原液经PBS缓冲液洗涤、偶联剂活化、MES缓冲液洗涤后与所述CA72-4抗体混合，加入终止液终止，经所述封保液封闭；所述含有示踪标记物标记的CA72-4标记抗体的酶结合物溶液由所述示踪标记物标记的CA72-4抗体与所述酶结合物稀释液按照0.01％～0.2％(w/v)的比例稀释制成；所述含有梯度浓度的CA72-4抗原的校准品由所述CA72-4抗原按照1:200添加到所述校准品稀释液中，配制成浓度为300U/ml的校准品，再利用校准品稀释液分别稀释成150U/ml、50U/ml、15U/ml、5U/ml、0U/ml的校准品。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述示踪标记物为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯或者金刚烷中的至少一种。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述磁微粒为粒径在0.1～5μm之间、表层覆盖有高分子材料的Fe3O4或Fe2O3磁性粒子，在所述的磁微粒表面含有一种或多种活性功能集团。其中包被CA72-4捕获抗体的浓度为0.2～2.0μg/T。在上述研究的基础上，本专利技术还提供了所述的试剂组合物在制备用于糖抗原72-4(CA72-4)检测的试剂或试剂盒中的应用。本专利技术还提供了所述的试剂组合物在制备用于肿瘤诊断或术后监测中的应用；所述肿瘤为胃癌、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌或宫颈癌。本专利技术还提供了用于糖抗原72-4(CA72-4)检测的试剂盒，包括所述的试剂组合物或所述的试剂组合物以及可接受的助剂。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述试剂盒还包括定标卡，可通过定标卡自动获取测试所需的参数。本专利技术提供了一种用于糖抗原72-4(CA72-4)检测的样品稀释组合物，相较于目前市场上已公开产品，具有操作简单使用方便的特点，节省了人力物力；同时出结果快，为检验人员节省了大量时间；样本稀释液中添加了乙二胺四乙酸二钠或/和乙二胺四乙酸二钾，消除新旧样本差异；样本稀释液中添加了阻断剂，针对性的消除异嗜性抗体对检验结果的干扰，提高了检验结果的准确性；试剂盒线性范围宽，HOOK风险小，更加适合临床上的应用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1、图2示本专利技术试剂盒的线性范围考核结果；图3、图4示本专利技术试剂盒与对照试剂盒的相关性对比结果；图5、图6示本专利技术试剂盒的HOOK考核结果。具体实施方式本专利技术公开了一种用于糖抗原72-4检测的样品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于糖抗原72-4检测的样品稀释组合物，其特征在于，包括如下组分：/n

【技术特征摘要】
1.用于糖抗原72-4检测的样品稀释组合物，其特征在于，包括如下组分：



所述蛋白质类稳定剂包括酪蛋白、鱼明胶或牛血清白蛋白中的一种或两者以上混合物；
所述阻断剂为中和HAMA干扰的人抗鼠抗体。


2.如权利要求1所述的样品稀释组合物，其特征在于，所述缓冲液包括Tris-NaCl、Bis-tris、PBS、MOPS、MES或Taps中的一种；
所述防腐剂包括Proclin300、MIT、Bro、IPBC或NaN3中的一种或两者以上的混合物；
所述EDTA为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾中的一种或两者的混合物；
所述色素为胭脂红色素或果绿色素。


3.如权利要求1或2所述的样品稀释组合物在制备用于糖抗原72-4检测的试剂或试剂盒中的应用。


4.如权利要求1或2所述的样品稀释组合物在制备用于肿瘤诊断或术后监测中的应用。


5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为胃癌、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌或宫颈癌。


6.用于糖抗原72-4检测的试剂组合物，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的样品稀释组合物、包被有CA72-4捕获抗体的磁珠混悬液、含有示踪标记物标记的CA72-4标记抗体的酶结合物溶液和含有梯度浓度的CA72-4抗原的校准品。


7.如权利要求6所述的试剂组合物，其特征在于，所述包被有CA72-4捕获抗体的磁珠混悬液包括磁珠原液、CA72-4抗体和封保液；所述封保液包括如下组分：



所述含有示踪标记物标记的CA72-4标记抗体的酶结合物溶液包括示踪标记物标记的CA72-4抗体和酶结合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树亮，史小芹，刘钊，崔小妞，付光宇，杨增利，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41