一种调控中性粒细胞活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种调控中性粒细胞活性的方法，通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。本发明专利技术填补了技术领域的空白，首次通过调节中性粒细胞或者靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的作用效果。

A method of regulating neutrophil activity

【技术实现步骤摘要】
一种调控中性粒细胞活性的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种调控中性粒细胞活性的方法。
技术介绍
中性粒细胞在人体免疫系统中有着重要的作用。目前，在药物研发以及如何使中性粒细胞作用于癌细胞的效果得以提升等问题上，缺少一个有效的参考依据和控制手段，基于此，如何调控中性粒细胞的活性就显得意义重大。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种调控中性粒细胞活性的方法，使得中性粒细胞作用于癌细胞的效果得以控制。为了实现上述目的或者其他目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术提供一种调控中性粒细胞活性的方法，通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。在一实施例中，所述通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性的过程具体包括：将带电荷颗粒制成电荷悬液，和/或将糖酵解通路抑制剂稀释成抑制剂悬液；将所述电荷悬液与中性粒细胞混合孵育，和/或将所述抑制剂悬液或所述电荷悬液与靶细胞混合孵育；通过所述电荷悬液调节中性粒细胞表面的电荷密度和/或通过所述抑制剂悬液或所述电荷悬液调节靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。在一实施例中，通过所述电荷悬液调节中性粒细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性的具体步骤包括：将所述电荷悬液与中性粒细胞混合孵育，获得调控后的中性粒细胞；将所述调控后的中性粒细胞作用于孵育在细胞培养板上的待测靶细胞；在所述细胞培养板中加入检测试剂；检测所述细胞培养板中吸光度的变化；根据所述吸光度的变化判断所述中性粒细胞的活性。在一实施例中，所述调控后的中性粒细胞与所述待测靶细胞之间的效靶比为(3-20):1。在一实施例中，通过所述抑制剂悬液或所述电荷悬液调节靶细胞表面的电荷来调控中性粒细胞的活性的具体步骤包括：提供培养板；在所述培养板上接种靶细胞；向所述培养板中加入所述抑制剂悬液或所述电荷悬液，获得调控后的靶细胞；将待测中性粒细胞加入到所述调控后的靶细胞中共孵育；向所述培养板中添加检测试剂；检测所述培养板中吸光度的变化；根据所述吸光度的变化判断所述待测中性粒细胞的活性。在一实施例中，所述带电荷颗粒为正电纳米颗粒或者负电纳米颗粒。在一实施例中，所述带电荷颗粒包括经过表面修饰的四氧化三铁颗粒、金颗粒、多孔硅颗粒、二氧化硅颗粒和硅量子点中的一种或多种组合。在一实施例中，所述电荷悬液的制备过程包括：将所述带电荷颗粒分散于磷酸盐缓冲溶液中，获得所述电荷悬液。在一实施例中，所述电荷悬液的浓度为0μg/mL-500μg/mL。在一实施例中，所述糖酵解通路抑制剂为3-溴丙酮酸或者二氯乙酸。在一实施例中，所述细胞培养板和所述培养板均为96细胞培养板。在一实施例中，所述检测试剂为细胞增殖/毒性检测试剂、噻唑蓝试剂或台盼蓝试剂中的一种。在本专利技术中，通过调节细胞表面的电荷强弱，从而调控中性粒细胞的作用效果。本专利技术对未来药物的研发以及使中性粒细胞作用于癌细胞的效果得以调控等方面提供新的思路、参考依据和控制手段。本专利技术填补了
的空白，首次通过调节中性粒细胞或者靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的作用效果，具有重要的意义。附图说明图1为本专利技术一实施例中通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性的流程示意图；图2为本专利技术一实施例中，利用不同浓度正电纳米颗粒屏蔽癌细胞表面负电荷后，中性粒细胞活性的变化；图3为本专利技术一实施例中，利用不同浓度负电纳米颗粒屏蔽中性粒细胞表面正电荷后，中性粒细胞活性的变化；图4为本专利技术一实施例中，不同浓度的糖酵解通路抑制剂(3-溴丙酮酸)对肺癌细胞A549存活率的影响；图5为本专利技术一实施例中，不同浓度3-溴丙酮酸对中性粒细胞作用于肺癌细胞A549效率的影响；图6为本专利技术一实施例中，不同浓度3-溴丙酮酸对正电纳米颗粒捕获肺癌细胞A549效率的影响；图7为本专利技术一实施例中，不同浓度的3-溴丙酮酸对肺癌细胞A549乳酸分泌量的影响。具体实施方式以下通过特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。本专利技术通过调节中性粒细胞或者靶细胞表面的电荷密度来调节中性粒细胞的活性，使得中性粒细胞作用于靶细胞的效果得以调控。如图1所述，本专利技术提供一种通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性的方法，具体过程包括：S1、将带电荷颗粒制成电荷悬液，和/或将糖酵解通路抑制剂稀释成抑制剂悬液；S2、将所述电荷悬液与中性粒细胞混合孵育，和/或将所述抑制剂悬液或所述电荷悬液与靶细胞混合孵育；S3、通过所述电荷悬液调节中性粒细胞表面的电荷密度和/或通过所述抑制剂悬液或所述电荷悬液调节靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。具体的，在S1步骤中，所述电荷悬液的制备过程包括：将所述带电荷颗粒分散于磷酸盐缓冲溶液中，获得所述电荷悬液。所述带电荷颗粒为正电纳米颗粒或者负电纳米颗粒。所述带电荷颗粒包括经过表面修饰的四氧化三铁颗粒、金颗粒、多孔硅颗粒、二氧化硅颗粒和硅量子点中的一种或多种组合。所述电荷悬液的浓度为0μg/mL-500μg/mL。所述糖酵解通路抑制剂例如为3-溴丙酮酸或者二氯乙酸；所述抑制剂悬液的制备过程为：称取糖酵解通路抑制剂粉末例如3-溴丙酮酸粉末，用细胞培养基稀释，获得所述抑制剂悬液，稀释浓度例如为0、20、40、80g/mL。具体的，在S2步骤中，获取中性粒细胞的步骤包括：配制若干组浓度梯度的淋巴细胞分离液；将所述若干组浓度梯度淋巴细胞分离液按照浓度从大到小的顺序加入到离心管中，使浓度最小的淋巴细胞分离液位于所述离心管的最上层；采集1-4ml外周血并稀释1-3倍，获得稀释后的外周血；取1-4ml所述稀释后的外周血加入到所述浓度最小的淋巴细胞分离液上；利用所述若干组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种调控中性粒细胞活性的方法，其特征在于，通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。/n

【技术特征摘要】
1.一种调控中性粒细胞活性的方法，其特征在于，通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。


2.根据权利要求1所述的一种调控中性粒细胞活性的方法，其特征在于，所述通过调节中性粒细胞和/或靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性的过程具体包括：
将带电荷颗粒制成电荷悬液，和/或
将糖酵解通路抑制剂稀释成抑制剂悬液；
将所述电荷悬液与中性粒细胞混合孵育，和/或
将所述抑制剂悬液或所述电荷悬液与靶细胞混合孵育；
通过所述电荷悬液调节中性粒细胞表面的电荷密度和/或通过所述抑制剂悬液或所述电荷悬液调节靶细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性。


3.根据权利要求2所述的一种调控中性粒细胞活性的方法，其特征在于，通过所述电荷悬液调节中性粒细胞表面的电荷密度来调控中性粒细胞的活性的具体步骤包括：
将所述电荷悬液与中性粒细胞混合孵育，获得调控后的中性粒细胞；
将所述调控后的中性粒细胞作用于孵育在细胞培养板上的待测靶细胞；
在所述细胞培养板中加入检测试剂；
检测所述细胞培养板中吸光度的变化；
根据所述吸光度的变化判断所述中性粒细胞的活性。


4.根据权利要求3所述的一种调控中性粒细胞活性的方法，其特征在于，所述调控后的中性粒细胞与所述待测靶细胞之间的效靶比为(3-20):1。


5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈炳地，黄鑫，乐文俊，崔征，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：上海;31