拆分型SpCas9慢病毒载体及其在干细胞基因编辑中的应用制造技术

本发明专利技术涉及基因编辑技术领域，尤其涉及拆分型SpCas9慢病毒载体及其在干细胞基因编辑中的应用。本发明专利技术将SpCas9‑N‑Intein‑N和Intein‑C‑SpCas9‑C分别表达于两个慢病毒载体上，在侵染生物体后Intein‑N和Intein‑C互相识别形成完整的内含肽、进行自我剪切并把相邻的Cas9‑N和Cas9‑C连接成完整的Cas9，从而能够在体内实现对基因的编辑。实验表明，本发明专利技术的慢病毒载体可以有效感染人动员外周血来源的造血干细胞并对其进行基因编辑，编辑效率最高达50％。

Split spcas9 lentivirus vector and its application in stem cell gene editing

【技术实现步骤摘要】
拆分型SpCas9慢病毒载体及其在干细胞基因编辑中的应用
本专利技术涉及基因编辑
，尤其涉及拆分型SpCas9慢病毒载体及其在干细胞基因编辑中的应用。
技术介绍
CRISPR(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats)-Cas9(CRIPSRassociatedprotein9)系统已经被广泛应用于各个科研领域，比如基因修饰、基因表达调控和表观遗传修饰等。CRISPR-Cas9系统最大的优点在于其应用的简便性：在特异性的单个引导RNA(singleguideRNA,sgRNA)的引导下，Cas9几乎可以靶向人类基因组中的任何序列。但是，CRISPR-Cas9系统在人类疾病治疗方面的应用仍存在许多挑战，其中之一就是巨大的Cas9蛋白不便于病毒载体的运载。目前应用最广泛的Cas9蛋白是S.pyogenesCas9(SpCas9)。编码SpCas9蛋白的基因长约4kb(kilobasepair)，再加上sgRNA及标志蛋白(比如荧光蛋白和抗药蛋白)的编码基因和驱动这些基因表达的启动本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.拆分型SpCas9慢病毒载体，包括N端载体和C端载体：/n所述N端载体包括顺序连接的如下元件：HIV 5’LTR、HIV-1ψ、RRE、cPPT/CTS、Sv40 NLS、FLAG、Cas9-N、DnaEIntein-N、P2A、EGFP、酶切位点、U6promoter、3’LTR；/n所述C端载体包括顺序连接的如下元件：HIV 5’LTR、HIV-1ψ、RRE、cPPT/CTS、DnaEIntein-C、Cas9-C、HA、Sv40 NLS、P2A、mCherry、3’LTR。/n

【技术特征摘要】
1.拆分型SpCas9慢病毒载体，包括N端载体和C端载体：
所述N端载体包括顺序连接的如下元件：HIV5’LTR、HIV-1ψ、RRE、cPPT/CTS、Sv40NLS、FLAG、Cas9-N、DnaEIntein-N、P2A、EGFP、酶切位点、U6promoter、3’LTR；
所述C端载体包括顺序连接的如下元件：HIV5’LTR、HIV-1ψ、RRE、cPPT/CTS、DnaEIntein-C、Cas9-C、HA、Sv40NLS、P2A、mCherry、3’LTR。


2.根据权利要求1所述的拆分型SpCas9慢病毒载体，其特征在于，
所述Cas9-N的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；
所述Cas9-C的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；
所述DnaEIntein-N的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；
所述DnaEIntein-C的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。


3.根据权利要求1或2所述的拆分型SpCas9慢病毒载体，其特征在于，
所述3’LTR包括HIV3’LTR、MSCV3’LTR、HIV3’LT...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙志娟，刘德芳，罗天明，齐海龙，郭潇，年聚会，杨欢，孙忠杰，
申请(专利权)人：保定诺未科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13