递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法；通过将含有慢病毒载体基因组序列的质粒转染入病毒生产细胞，制备而得；所述基因组序列分别位于表达膜蛋白的质粒、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达形成RNP所需蛋白质的质粒和表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒上。在包装含RNP的慢病毒颗粒的过程中，补充慢病毒GagPol长链蛋白，减少了改造后的慢病毒GagPol长链蛋白所包含的外源RNA结合蛋白对病毒颗粒正常形态的负面影响，保证了慢病毒颗粒外壳的完整性和细胞感染活性的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法。
技术介绍
RNP在基因编辑、基因治疗、药物开发等领域具有重要的应用潜力。RNP的应用受到以下几个因素的限制，(1)RNP自身无法进入细胞，需要一套高效的载体系统；(2)RNA稳定较差，极易被环境中的核酸酶降解，而形成RNP之后，RNA变得更为稳定；(3)现有RNP递送技术如纳米金颗粒、脂质体、电转导等很难直接用于体内。目前，RNP的递送方案有电转、纳米金颗粒、脂质体以及经过改造的慢病毒颗粒。现有技术中存在利用改造后的慢病毒颗粒递送SaCas9(一种较短的Cas9)及其gRNA的RNP(Lu,B.,etal.,DeliveringSaCas9mRNAbylentivirus-likebionanoparticlesfortransientexpressionandefficientgenomeediting.NucleicAcidsRes,2019.47:p.e44.Lyu,P.,etal.,DeliveringCas本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种递送外源RNP的慢病毒载体，所述慢病毒载体是通过将含有慢病毒载体基因组序列的质粒转染入病毒生产细胞，制备而得；其特征在于，所述慢病毒载体基因组序列分别位于表达膜蛋白的质粒、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达形成RNP所需蛋白质的质粒和表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒上。/n

【技术特征摘要】
1.一种递送外源RNP的慢病毒载体，所述慢病毒载体是通过将含有慢病毒载体基因组序列的质粒转染入病毒生产细胞，制备而得；其特征在于，所述慢病毒载体基因组序列分别位于表达膜蛋白的质粒、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达形成RNP所需蛋白质的质粒和表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒上。


2.根据权利要求1所述的递送外源RNP的慢病毒载体，其特征在于，所述表达膜蛋白的质粒包括表达VSV-G、CD4识别蛋白、CD8识别蛋白、RD114或狒狒内源逆转录病毒膜蛋白的质粒。


3.根据权利要求1所述的递送外源RNP的慢病毒载体，其特征在于，所述表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒是将RNA结合蛋白整合至第三代慢病毒GagPol长链蛋白的N-端或C-端或者同时N-端和C-端；所述表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒序列为SEQIDNO.5、SEQIDNO.6或SEQIDNO.7所示。


4.根据权利要求1所述的递送外源RNP的慢病毒载体，其特征在于，所述表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒序列为SEQIDNO.2所示。


5.根据权利要求1所述的递送外源RNP的慢...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡宇伽，凌思凯，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31