一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法技术

本发明专利技术提供了一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法，涉及生物技术领域，所述制备方法包括以下步骤：(1)Drp1‑shRNA慢病毒载体的构建；(2)骨髓细胞的慢病毒体外感染；(3)感染细胞植入小鼠建立模型。本发明专利技术率先采用内眦静脉注射方法构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型，并对移植的骨髓细胞数目和病毒感染条件进行了优化，具有快速建模、成功率高、特异性好和经济成本低的优势。不仅为研究Drp1基因免疫学功能提供了动物模型，也为其他骨髓特异性基因模式动物的制备提供了新的依据。

A method of constructing a mouse model of drp1 gene specific knockdown in bone marrow cells

【技术实现步骤摘要】
一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法。
技术介绍
近年来，免疫与疾病的研究成为国际热点，尤其在肿瘤、二型糖尿病和心脑血管疾病等领域，有关免疫细胞功能的研究逐年增多。骨髓是机体内的造血组织，主要分布于长骨骨腔和骨松质内，可生成各种干细胞，对于维持造血和免疫功能有至关重要的作用。骨髓来源的免疫细胞主要包括，T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞等。其中，T淋巴细胞是来源于骨髓的多能干细胞，可在胸腺中发育成熟，进而具有对抗感染和击杀肿瘤细胞的功能。B细胞也是由骨髓造血干细胞分化而来，可通过分泌抗体对抗病毒感染。NK细胞属于自然杀伤细胞，发育成熟后可发挥免疫调节和击杀癌细胞的作用。单核细胞来源于骨髓造血干细胞，在血液循环中仍属于未发育完全细胞。而单核细胞一旦进入组织器官，便会进一步分化为巨噬细胞，是机体最重要的炎症效应细胞。这些骨髓来源的免疫细胞，不仅对于维持机体正常免疫功能意义重大，也在多数疾病进程中发挥关键作用。对于多数研究者来说，缺少骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)Drp1-shRNA慢病毒载体的构建/n特异性敲减Drp1基因的shRNA的引物设计如下：/nDrp1正向引物如SEQ ID No.1所示，/nDrp1反向引物如SEQ ID No.2所示，/n通过退火，产生双链shRNA，扩增后回收，并与特异性酶切载体连接获得重组质粒，包装所述重组质粒，获得Drp1-shRNA慢病毒；/n(2)骨髓细胞的慢病毒体外感染/n取分离的小鼠骨髓细胞，加入Drp1-shRNA慢病毒瞬时转染，并加入10ug/ml聚凝胺和10mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，静置10min后...

【技术特征摘要】
1.一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)Drp1-shRNA慢病毒载体的构建
特异性敲减Drp1基因的shRNA的引物设计如下：
Drp1正向引物如SEQIDNo.1所示，
Drp1反向引物如SEQIDNo.2所示，
通过退火，产生双链shRNA，扩增后回收，并与特异性酶切载体连接获得重组质粒，包装所述重组质粒，获得Drp1-shRNA慢病毒；
(2)骨髓细胞的慢病毒体外感染
取分离的小鼠骨髓细胞，加入Drp1-shRNA慢病毒瞬时转染，并加入10ug/ml聚凝胺和10mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，静置10min后，800g离心30min，弃上清，无菌PBS重悬细胞，得到Drp1-shRNA病...

【专利技术属性】
技术研发人员：于卫华，海春旭，闫文俊，王欣，李文丽，刘江正，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61