一种复合微生物菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术属于猪饲料添加剂领域，尤其涉及一种复合微生物菌剂及其应用。所述复合微生物菌剂，包括以下菌株的液体菌种：芽孢菌、放线菌、乳酸菌、酵母菌、肠球菌、光合菌。所述复合微生物发酵菌剂用于制备猪饲料添加剂。本发明专利技术的复合微生物菌剂可增加育肥猪胃、结肠和盲肠的度，增加胃和结肠的乳酸菌属的丰度，同时减少以艰难梭菌为主的有害梭菌的增殖，维护肠道结构功能，保证菌群平衡，促进生产性能提升，可作为饲料添加剂在生产中应用。

A compound microbial agent and its application

【技术实现步骤摘要】
一种复合微生物菌剂及其应用
本专利技术属于猪饲料添加剂领域，尤其涉及一种复合微生物菌剂及其应用。
技术介绍
畜牧业生产中抗生素的滥用和超级耐药菌不断涌现，给畜牧业生产和我国食品安全带来很大危害。为促进畜牧业生产的发展和保障食品安全，应用微生物的功能性作用，开发具有安全高效的复合微生物菌剂，成为当前畜牧业生产的一种趋势。而依据猪的胃肠道微生物功能而开发的微生物菌剂，在生猪的养殖中应用广泛。很多的研究也证实添加微生物菌剂至饲料中，可明显减少哺乳仔猪、仔猪和育肥猪拉稀，同时可提高日增重并降低耗料增重比等。尽管之前的研究证实微生物菌剂不仅能改善断奶小猪的拉稀，还能改善育肥猪的生产性能。但实际生产中的应用还是较少。一方面是因为之前的研究添加菌剂相对单一，对生猪生产性能的改善相对有限，它的临床应用相对有限。另一方面，是因为微生物菌剂功能的发挥是多菌种相互配合的一个复杂系统，详细的作用机理尚待进一步揭示，这进一步限制了微生物菌剂在畜牧业生产中的应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种复合微生物菌剂及其应用，可显著改善育肥猪的生产性能，增加肠道有益菌，同时改善胃肠道绒毛结构。本专利技术是这样实现的：本专利技术首先提供了一种复合微生物菌剂，包括以下菌株的液体菌种：芽孢菌、放线菌、乳酸菌、酵母菌、肠球菌、光合菌。进一步地：所述复合微生物发酵菌剂中各菌株的菌数含量均为1.25×108cfu/g以上。所述芽孢菌包括苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。<br>所述放线菌包括衣氏放线菌、牛型放线菌、内氏放线菌。所述乳酸菌包括鼠李糖乳酸杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌。所述酵母菌包括酿酒酵母菌、产朊假丝酵母菌、毕赤酵母菌。所述肠球菌包括粪肠球菌。所述光合菌包括紫硫细菌、紫色非硫细菌、绿硫细菌。上述菌种可以由本领域技术人员通过常规菌种鉴定分离方法方便地从自然界分离得到的，或通过商业渠道公开购买。菌种根据现有常规方法培养。所述复合微生物菌剂还包括薏以仁，添加1-50g。薏苡仁，中药名。为禾本科植物薏苡Coixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁。本专利技术还提供了所述复合微生物发酵菌剂的应用，用于制备猪饲料添加剂。本专利技术具有如下优点：本专利技术的复合微生物菌剂可增加育肥猪胃、结肠和盲肠的度，增加胃和结肠的乳酸菌属的丰度，同时减少以艰难梭菌为主的有害梭菌的增殖，维护肠道结构功能，保证菌群平衡，促进生产性能提升，可作为饲料添加剂在生产中应用。附图说明下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的描述。图1为猪胃肠道结构及绒毛变化图。具体实施方式实施例11材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物育肥猪共300头，购自福建龙岩上杭某养殖公司，体重25±1.6kg。1.1.2复合微生物菌本实施例中的菌株采购自泉州华惠生物科技有限公司科技公司。根据现有常规方法培养，复合微生物菌剂是包括下述菌体并经发酵培养制成的液体菌剂，它包括1.25×108(cfu/g)以上的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、衣氏放线菌(Actinomycesisrae-lii)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、紫硫细菌，并在1L菌液中添加10g薏以仁。1.2试验方法1.2.1试验处理设置饲养地点在福建龙岩上杭某养殖公司进行在常规的水泥面养殖猪舍，平均气温22℃，养殖周期90d。育肥猪300头，随机分成2组，每组15个重复，每个重复10头。试验组饲喂添加复合微生物菌活菌饲料，对照组饲喂常规的饲料。正式饲喂试验前7d进行预试验。饲喂管理按照自由采食方法进行，提供充足清洁饮水，每天一次猪舍清扫，定时观察记录猪的采食、体重、粪便、精神状况，常规疫苗接种。1.2.2饲料的基础日粮、营养成分及制备将复合菌液按1:12.5的体积比例添加至玉米粉，在25～38℃密闭发酵5-7d，得到发酵玉米。实验组按基础原料组成配方：发酵玉米16kg，玉米粉634kg，豆粕280kg，麦30kg，预混料40kg进行混匀饲喂。对照组则按基础原料组成配方：玉米粉650kg，豆粕280kg，麦30kg，预混料40kg混匀饲喂。试验饲料的原料基础日粮及其营养成分见表1。表1基础日粮及营养成分1.3生产性能指标测定试验前，对所有猪进行称重，然后添加复合菌饲养至170日龄，并分别在15、30、60、90d进行称重、统计采食量，并计算每日头均增重、头均耗料以及耗料增重比，分析复合菌对育肥猪生产性能的影响。1.4肠道绒毛结构测定饲喂试验结束后，选择36头体重相近且生长状况良好、未发生过消化道疾病的育肥猪，空腹处死，取0.25cm的胃、结肠、盲肠，放入多聚甲醛固定，经酒精脱水，二甲苯透明，然后将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中浸蜡、包埋；再将包埋好的组织块切片，然后脱蜡、至水、染色；染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明；将已透明的切片滴上树胶，盖上盖玻片封固；待树胶略干后镜检。1.516SrRNA基因测序1.5.1微生物组总DNA提取和目标片段PCR扩增实验中和实验结束时，通过安乐死处理实验组和对照组猪，分别取处死猪的胃和结肠粘液进行微生物组总DNA提取，然后通过1％琼脂糖凝胶电泳验证提取DNA的纯度，同时运用紫外分光光度方法对提取的胃和结肠的粘液的DNA进行定量。接着再根据肠道微生物序列中的保守片段设计一对引物，对肠道微生物的基因可变区(单个或连续的多个)或特定基因片段进行PCR扩增。1.5.2扩增产物纯化和定量PCR扩增产物通过2％琼脂糖凝胶电泳进行检测，并对目标片段进行切胶回收，回收采用AXYGEN公司的凝胶回收试剂盒。参照电泳初步定量结果，将PCR扩增回收产物进行荧光定量，荧光试剂为Quant-iTPicoGreendsDNAAssayKit，定量仪器为Microplatereader(BioTek，FLx800)。根据荧光定量结果，按照每个样本的测序量需求，对各样本按相应比例进行混合。1.5.3测序文库制备和高通量测序采用Illumina公司的TruSeqNanoDNALTLibraryPrepKit试剂盒制备测序的基因文库。将验证合格的测序文库进行梯度稀释，根据按相应比例混合文库，混合后再采用碱变性为单链进行上机测序；使用MiSeqReagentKitV3(600cycles)和MiSeq测序仪进行2×300bp的双端测序。1.6数据的分析首先进行初步筛查高通量测序的原始下机数据的序列质量；再按照引物和Barcode信息，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合微生物菌剂，其特征在于：包括以下菌株的液体菌种：芽孢菌、放线菌、乳酸菌、酵母菌、肠球菌、光合菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种复合微生物菌剂，其特征在于：包括以下菌株的液体菌种：芽孢菌、放线菌、乳酸菌、酵母菌、肠球菌、光合菌。


2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物发酵菌剂中各菌株的菌数含量均为1.25×108cfu/g以上。


3.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述芽孢菌包括苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。


4.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述放线菌包括衣氏放线菌、牛型放线菌、内氏放线菌。


5.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述乳酸菌包括鼠李糖乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兆龙，黄义祥，李世荣，黄种杰，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，泉州华惠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35