一种萎缩芽孢杆菌E20303及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种萎缩芽孢杆菌E20303及其应用，所述的萎缩芽孢杆菌E20303已于2019年6月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:60695。该菌株可有效抑制马铃薯干腐病和马铃薯Y病毒病，是一种中度嗜盐菌，其从青海察尔汗盐湖湖水中分离纯化得到，为防治马铃薯干腐病和马铃薯Y病毒病提供了新的途径，可有效改善病原物因选择性抗性而不能达到防治作用，应用前景良好。

Bacillus atrophicus e220303 and its application

【技术实现步骤摘要】
一种萎缩芽孢杆菌E20303及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种萎缩芽孢杆菌E20303及其应用。
技术介绍
马铃薯是一年生栽培的草本茎块作物，有众多别称，原产地美洲。在我国是除玉米、小麦和水稻之外的又一主粮，可以同时作为粮食和蔬菜食用。2003年，联合国粮农组织统计显示，全球范围内马铃薯总栽培面积约为1900万公顷，仅中国马铃薯的种植面积就高达500万公顷。尽管我国马铃薯种植面积在不断扩大，但在其栽种的目前状况和未来出路上仍然存在着不多不利因素。随着我国种植马铃薯面积的日趋增加，并在同一田地上连续栽种，使马铃薯因重茬导致病害类型增多、侵害程度加剧，马铃薯干腐病是马铃薯窖藏期间主要的真菌性病害之一，是由茄病镰孢侵染块茎造成的病害，病原种类有9个种和变种。据调查，在我国马铃薯各个产区中，有的产地马铃薯块茎腐烂率高达63％。目前对马铃薯干腐病的防治通常采用物理预防和利用化学试剂，物理预防效果较差，使用化学试剂造成了农药残留和环境污染同时使菌株产生了抗药性等一系列问题。因此，对马铃薯干腐病的生物防治尤其是利用微生物源生防制剂的相关研究备受国内外的关注。目前为止，国内外已报道的关于马铃薯干腐病的生防制剂主要来源于放线菌Actinomycesbovis、芽孢杆菌Bacillussp.、木霉菌Trichodermasp.等生防菌株以及马铃薯非亲和菌株粉红单端孢Trichotheciumroseumsp.菌丝细胞壁萃取物和寡雄蛋白等微生物来源的次级代谢产物。这些具有广泛生防前景的微生物主要分离自根际或根际土壤、植株发病部位、植株内部以及虫体内腔等陆地资源中，这就使得从陆地资源中分离得到类似功能菌株及活性化合物的可能性增大，但会造成病原物选择性抗性而不能达到有效防治作用的后果。因此，从海洋、白酒酒糟和盐湖等特殊生境中分离新菌株及结构新；颖的天然产物的研究逐渐引起国内外学者的关注。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种同时用于抑制马铃薯干腐病病原真菌和马铃薯Y病毒的中度嗜盐菌E20303，同时提供了该菌株的培养基和培养条件，进一步提高了菌株E20303对马铃薯干腐病的抑制活性。本专利技术具体通过以下技术方案实现：本专利技术从青海察尔汗盐湖湖水中分离纯化得到一株中度嗜盐菌E20303，提取所述的菌株E20303的16SrDNA，扩增16SrDNA片段，测得的16S序列如SEQIDNO.1所示。将所测得的16S序列在美国国立生物信息中心(NCBI)数据库进行比对，E20303与GenBank中的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)的相似度最高，从而确定了E20303在分类上属于萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)。基于以上特征，本专利技术提供了一种萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)E20303，该菌株已进行保藏，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：中国广州市先烈中路一百号省微生物所实验楼五楼，保藏日期：2019年6月17日，保藏编号为GDMCCNo:60695。在本专利技术的另一方面，提供了所述的萎缩芽孢杆菌E20303的发酵培养基配方：淀粉10.72g/L、酵母粉23.60g/L、MgSO4·7H2O16g/L、CaCl2·2H2O1.14g/L、KCl8g/L和K2HPO416g/L。该发酵培养基可提高萎缩芽孢杆菌E20303对马铃薯干腐病病原菌的抑制率。进一步的，该发酵培养基的培养条件为：装液量102.9mL，pH8.6，温度28.7℃。在本专利技术的另一方面，提供了所述的萎缩芽孢杆菌E20303在防治马铃薯Y病毒引起的病害中的应用。优选的，所述的萎缩芽孢杆菌E20303的发酵产物在防治马铃薯Y病毒引起的病害中的应用也在本专利技术的保护范围内。所述的马铃薯Y病毒引起的病害为马铃薯Y病毒病。在本专利技术的另一方面，提供了所述的萎缩芽孢杆菌E20303或其发酵产物在制备防治马铃薯Y病毒引起的病害生物制剂中的应用。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种萎缩芽孢杆菌E20303，并提供了其优化培养基，优化后菌株E20303对马铃薯干腐病病原菌的抑制率由优化前的46.51％增加到62.00％，优化力度为：15.49％。本专利技术萎缩芽孢杆菌E20303为防治马铃薯干腐病病原菌引起的病害提供了新的途径，可有效改善病原物因选择性抗性而不能达到防治作用，应用前景良好。附图说明图1是不同碳源对菌株E20303抑制病原真菌活性的影响；图2是不同氮源对菌株E20303抑制病原真菌活性的影响；图3是不同无机盐对菌株E20303抑制病原真菌活性的影响。具体实施方式下面将结合本专利技术具体的实施例，对本专利技术技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1菌株E20303的分离纯化从青海察尔汗盐湖中采集湖水样品，保存带回实验室。将采集的察尔汗盐湖湖水样品中的菌体进行富集：将滤膜分别装入滤器中，进行121℃灭菌30min，干燥。在无菌条件下，将水样混匀，用装有0.22μm孔径的滤膜的滤器过滤，在滤膜上富集菌体。用于富集的水样量达到30mL时，取下滤膜，放入装有3mL无菌海水的玻璃试管中，为10-1水样。振荡，并放置片刻。之后，将10-1水样依次梯度稀释为10-2水样及10-3水样，备用。吸取200μL上述样品，均匀涂布于培养基平板上，于培养箱中37℃静置培养，每天观察培养情况。待培养基平板上有菌落出现时，挑取单一，接种于新的培养基平板上。将平板纯化好的菌株接种至固体培养基斜面，进行斜面划线，待培养出菌体，加入无菌液体石蜡于4℃下恒温保存。实施例2菌株E20303的鉴定按照上海生工生物工程(上海)股份有限公司的柱式细菌DNA提取试剂盒的操作程序提取菌株16SrDNA。选取细菌16SrDNA通用引物F27和P1541进行PCR扩增。F27：agagtttgatcctggctcagg；P1541：aaggaggtggtgatccagccgca。PCR反应体系为(25μL)：10×Buffer2.5μL，模板DNA1μL，Taq酶(5U/μL)0.2μL，dNTPs(2.5mmol/μL)2μL，引物(10pmol/μL)各1μL，ddH2O17.3μL。反应条件为：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃80s，共30个循环；72℃10min。PCR扩增产物在1.0％的琼脂糖凝胶电泳上检测后，进行序列测定。所测序列结果如SEQIDNo.1。将所测得的16S序列在美国国立生物信息中心(NCBI)数据库进行比对，E20303与GenBank中的萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)的相似度最高本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种萎缩芽孢杆菌E20303，其特征在于，所述的萎缩芽孢杆菌E20303已于2019年6月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:60695。/n

【技术特征摘要】
1.一种萎缩芽孢杆菌E20303，其特征在于，所述的萎缩芽孢杆菌E20303已于2019年6月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:60695。


2.根据权利要求1所述的一种萎缩芽孢杆菌E20303，其特征在于，所述的萎缩芽孢杆菌E20303的16SrDNA核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.权利要求1所述的萎缩芽孢杆菌E20303的培养基，其特征在于，所述的培养基为：淀粉10.72g/L、酵母粉23.60g/L、MgSO4·7H2O16g/L、CaCl2·2H2O1.14g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈硕，李玮，王舰，
申请(专利权)人：青海省农林科学院，
类型：发明
国别省市：青海;63