【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术与诊断检测，更具体地，涉及一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测引物及其试剂盒。
技术介绍
1、鹅腺病毒(goose adenovirus)于1967年由csontos等首次从匈牙利鹅群中发现(csontos，1967)，随后该病毒在匈牙利及其周边地区蔓延。zsa等从匈牙利某2-4周龄发病雏鹅的肝脏和肠道中分离到7株goadv，并根据其限制性内切酶切割模式将其分为三种基因型(goadv-1、goadv-2和goadv-3)(zsa，1984)。kajan等对20世纪70年代自匈牙利某死亡雏鹅中分离的鹅腺病毒p29株进行全基因组序列测定，并根据病毒全基因组特征将其命名为鹅腺病毒4型(goadv-4)，国际病分类委员会将该毒株归类为腺病毒科、禽腺病毒属的鹅腺病毒a种(http://ictv.global/report/adenoviridae)。
2、2022年4月，本申请的专利技术人团队于国内首次从病死雏鹅中分离获得goadv-4，同时通过分子生物学手段获取了国内第一株goadv-4的全基因组序列(ch-fjzz-202201株，登录号：or842729)。goadv-4感感染鹅的发病死亡率高达10％～30％不等，感染宿主和日龄有不断扩大趋势，给我国养鹅业造成了较大威胁。因此建立一种准确、快速、灵敏的检测方法对其进行流行动态监测，保障养鹅业健康发展迫在眉睫。
3、目前对goadv-4的检测方法主要有传统的病毒分离、电镜观察等。传统方法对病毒样本浓度与纯度要求均较
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测引物及其试剂盒。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测引物，包括如seq id no.1所示的上游引物和如seq id no.2所示的下游引物。
4、本专利技术根据本团队上传至美国国家生物技术信息中心(national center ofbiotechnology information，ncbi)数据库的国内唯一1株鹅腺病毒4型(ch-fjzz-202201株，登录号：or842729)及国内外其它型腺病毒hexon基因序列信息，经比对分析，设计特异性检测鹅腺病毒4型的引物(seq id no.1和seq id no.2)，建立了sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测方法，可对鹅腺病毒4型感染快速鉴别诊断，节省了时间和成本，提高了准确性。
5、进一步地，本专利技术提供一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测试剂盒，包含上述的引物。
6、进一步地，所述试剂盒的扩增反应体系为premix ex taqtm 10μl，上游引物0.4μl，下游引物0.4μl，模板2μl，补充灭菌去离子水至终体积20μl。
7、优选地，所述上游引物、下游引物的浓度均为10μmol/l。
8、进一步地，所述试剂盒的扩增反应条件为：95℃预变性30s；95℃5s，60℃退火10s，72℃延伸15s，40个循环。
9、一种采用本专利技术所述的引物的鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
10、s1：提取待测样本基因组
11、s2：pcr反应
12、其中，扩增反应体系为：premix ex taqtm 10μl，上游引物0.4μl，下游引物0.4μl，模板2μl，剩余为灭菌去离子水，反应体系的总体积为20μl；
13、扩增反应条件为：95℃预变性30s；95℃5s，60℃退火10s，72℃延伸15s，40个循环；
14、s3：结果判定
15、若待测样本核酸浓度高于检测下限6.4×102拷贝/μl时，则判定为鹅腺病毒4型阳性，反之则为阴性。
16、本专利技术首次建立了特异性检测goadv-4的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测引物及其试剂盒。采用本专利技术的试剂盒，仅需将待检样品使用一对特异性引物进行pcr扩增后即可快速实现鹅腺病毒4型的定量检测，检测结果可直接通过电脑软件读出，简化实验步骤、节约检测时间。该检测试剂盒非常适用于临床大量样本的检测与监测。当前尚未见基于sybr greenⅰ检测鹅腺病毒4型的实时荧光定量pcr检测方法的研究报道，本专利技术为新发鹅腺病毒4型感染的诊断提供依据，对保障水禽养殖业的发展起到重要作用，具有很好的应用前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鹅腺病毒4型的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测引物，其特征在于，所述引物包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物和如SEQ ID NO.2所示的下游引物。
2.一种鹅腺病毒4型的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的PCR检测引物。
3.根据权利要求2所述的一种鹅腺病毒4型的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增反应体系为SYBR® Premix Ex Taq™ 10 μL，上游引物0.4 μL，下游引物0.4 μL，模板2 μL，补充灭菌去离子水至终体积20 μL。
4.根据权利要求3所述的一种鹅腺病毒4型的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物、下游引物的浓度均为10 μmol/L。
5.根据权利要求2所述的一种鹅腺病毒4型的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增反应条件为：95 ℃预变性30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃退火10
6.一种采用权利要求1所述的引物的鹅腺病毒4型的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测引物，其特征在于，所述引物包括如seq id no.1所示的上游引物和如seq id no.2所示的下游引物。
2.一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的pcr检测引物。
3.根据权利要求2所述的一种鹅腺病毒4型的sybr greenⅰ实时荧光定量pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增反应体系为sybr® premix ex taq™ 10 μl，上游引物0.4 μl，下游引物0.4 μl，模板2 μl，补充灭...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘荣昌，黄瑜，梁齐章，程龙飞，傅光华，陈红梅，万春和，傅秋玲，江南松，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。