miR159b在调控水稻白叶枯病抗性中的应用制造技术

本发明专利技术公开了miR159b在调控水稻白叶枯病抗性中的应用。本发明专利技术提供了一种RNA，即水稻miR159b，如序列表的序列1所示。本发明专利技术还提供了一种DNA分子，如序列表的序列3所示。本发明专利技术还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在植物中过表达所述RNA，得到抗病性提高的转基因植物。本发明专利技术还保护一种培育抗白叶枯病植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入所述DNA分子，得到白叶枯病抗性增强的转基因植物。本发明专利技术的发明专利技术人发现在水稻中过量表达miR159b能够提高显著提高水稻对白叶枯病的抗性。本发明专利技术可用于培育抗白叶枯病的水稻品种，具有良好的市场应用前景。

Application of mir159b in the regulation of rice bacterial blight resistance

【技术实现步骤摘要】
miR159b在调控水稻白叶枯病抗性中的应用
本专利技术属于植物基因工程领域，具体涉及miR159b在调控水稻白叶枯病抗性中的应用。
技术介绍
水稻(Oryzaesativa)是世界最重要的粮食作物之一，水稻安全生产关系到人类的生存大计。水稻白叶枯病是由革兰氏阴性黄单胞杆菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzae，Xoo)侵染所引起的世界上分布最广、破环性最严重的细菌性病害，可使水稻减产20-30％，严重时可达50％甚至绝收，并且会影响稻米品质和食用性。同时，水稻与Xoo的互作体系也是植物-微生物互作研究的重要模式系统。利用水稻自身抗源进行生物防治被认为是最为经济、安全和有效的防治手段。经典的水稻抗白叶枯病育种主要是利用亲本的主效抗病基因，简单地利用单一抗源培育抗病品种容易导致抗性丧失，抗谱较窄。抗病基因聚合则需较长的时间，也受到可利用基因数目的限制。因此，发掘新的水稻白叶枯病抗性相关基因或者利用新的功能性分子，对于水稻抗病育种具有重要的应用价值。miRNA是一类进化上保守的、长度介于21-24nt的非编码单链小分子RNA，在植物中的生物学功能主要是在转录后水平负调控靶基因的表达，可参与植物整个生命进程。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供miR159b在调控水稻白叶枯病抗性中的应用。本专利技术提供了一种RNA，即水稻miR159b，如序列表的序列1所示。本专利技术还提供了一种RNA，即水稻miR159b的前体RNA，如序列表的序列2所示。本专利技术还提供了一种DNA分子，即水稻miR159b基因的编码区，如序列表的序列3第295-482位核苷酸所示。本专利技术还提供了一种DNA分子，如序列表的序列3所示。本专利技术还保护以上任一所述RNA在培育抗白叶枯病植物中的应用。所述植物为禾本科植物。所述植物为稻属植物。所述植物为水稻。所述植物为粳稻，例如水稻台北309。本专利技术还保护以上任一所述RNA在调控植物白叶枯病抗病性中的应用。所述调控为正调控。所述正调控的含义为：RNA水平增高，白叶枯病抗病性提高。所述植物为禾本科植物。所述植物为稻属植物。所述植物为水稻。所述植物为粳稻，例如水稻台北309。本专利技术还保护以上任一所述DNA分子在培育抗白叶枯病植物中的应用。所述植物为禾本科植物。所述植物为稻属植物。所述植物为水稻。所述植物为粳稻，例如水稻台北309。本专利技术还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在植物中过表达以上任一所述RNA，得到白叶枯病抗性提高的转基因植物。所述植物为禾本科植物。所述植物为稻属植物。所述植物为水稻。所述植物为粳稻，例如水稻台北309。本专利技术还保护一种培育抗白叶枯病植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入以上任一所述DNA分子，得到白叶枯病抗性增强的转基因植物。所述DNA分子可通过植物表达载体导入受体植物并表达。所述植物表达载体可为载体pCAMBIA1300-Ubi。具体来说，在受体植物中导入DNA分子是通过在受体植物中导入重组质粒实现的。所述重组质粒可为：在载体pCAMBIA1300-Ubi的多克隆位点(例如SpeI和KpnI酶切位点之间)插入序列表的序列3所示的DNA分子得到的重组质粒。所述受体植物为禾本科植物。所述受体植物为稻属植物。所述受体植物为水稻。所述受体植物为粳稻，例如水稻台北309。本专利技术还保护以上任一所述方法在植物育种中的应用。所述育种的目的为获得白叶枯病抗性提高的植物。所述植物为禾本科植物。所述植物为稻属植物。所述植物为水稻。所述植物为粳稻，例如水稻台北309。以上任一所述水稻白叶枯病具体可为黄单胞杆菌引起的。以上任一所述水稻白叶枯病具体可为黄单胞杆菌水稻致病变种引起的。以上任一所述水稻白叶枯病具体可为菲律宾白叶枯病菌生理小种PXO86引起的。本专利技术的专利技术人发现在水稻中过量表达miR159b能够提高显著提高水稻对白叶枯病的抗性。本专利技术提供的与水稻白叶枯病抗性相关的miR159b可用于水稻种质资源的改良及遗传育种领域，还可用于培育抗白叶枯病的水稻品种，具有良好的市场应用前景。miRNA的发现补充了研究人员对水稻基因调控机制的理解，展现了细胞内基因表达多层次、多方位的调控系统。深入了解miRNA对水稻白叶枯病的调控作用，为提高水稻产量和培育新的种质资源提供线索和思路。附图说明图1为实施例1中miR159b基因的相对表达水平的结果。图2为实施例2中miR159b基因的相对表达水平的结果。图3为实施例2中表型鉴定的结果；比例尺为1.5cm，**表示与WT表达量相比t检验差异显著水平P值达0.01。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，如无特殊说明，均设置三次重复实验，结果取平均值。水稻台北309(用TP309或WT表示)，又称Taipei309或野生型水稻，属于粳稻。记载于如下文献：SongWY,WangGL,ChenLL,KimHS,PiLY,HolstenT,GardnerJ,WangB,ZhaiWX,ZhuLH,FauquetC,RonaldP.(1995).Areceptorkinase-likeproteinencodedbythericediseaseresistancegene,Xa21.Science270,1804-1806.水稻IRBB5，属于籼稻，水稻白叶枯病抗病品种。记载于如下文献：JiangGH,XiaZH,ZhouYL,WanJ,LiDY,ChenRS,ZhaiWXandZhuLH.Testifyingthericebacterialblightresistancegenexa5initsfunctionandfurtheranalyzingxa5(Xa5)bycomparingwithit’shomologTFIIAγ1.MolGenGenomics.2006,275(4):354-366.水稻IR24，属于籼稻，水稻白叶枯病感病品种。记载于如下文献：JiangGH,XiaZH,ZhouYL,WanJ,LiDY,ChenRS,ZhaiWXandZhuLH.Testifyingthericebacterialblightresistancegenexa5initsfunctionandfurtheranalyzingxa5(Xa5)bycomparingwithit’shomologTFIIAγ1.MolGenGenomics.2006,275(4):354-366.实施例中所用的水稻白叶枯病菌为菲律宾白叶枯病菌生理小种PXO86。载体pCAMBIA1300-Ubi，在文献中的记载为“pCAMBIA1300drivenbymaizeubiquitinpromoter”。记载于如下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA，如序列表的序列1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种RNA，如序列表的序列1所示。


2.一种RNA，如序列表的序列2所示。


3.一种DNA分子，如序列表的序列3第295-482位核苷酸所示。


4.一种DNA分子，如序列表的序列3所示。


5.权利要求1所述RNA或权利要求2所述RNA在培育抗白叶枯病植物中的应用。


6.权利要求1所述RNA或权利要求2所述RNA在调控植物白叶枯病抗病性中的应用。


7...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟文学，贾彦凤，江光怀，李春荣，刘真真，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11