【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体公开了一种金纳米颗粒及其在肿瘤细胞焦亡诱导中的应用。
技术介绍
1、目前，癌症的治疗方法主要包括手术、化疗、放疗以及近年来新兴的免疫治疗和分子靶向治疗，但它们都存在一定的限制。手术治疗是最早出现和最常用的局部肿瘤治疗方式之一，对早期肿瘤效果良好，但对于转移性肿瘤则无法根治。化疗是一种全身性的治疗方法，利用化学药物的毒性来杀灭癌细胞，但也会对一些正常细胞造成损害。放疗则使用放射线辐射肿瘤细胞的dna，对于一些局部肿瘤和高放射敏感的肿瘤效果较好，但对于放射不敏感的肿瘤效果有限。免疫治疗和分子靶向治疗近年来取得了显著进展，具有较好的治疗效果和较小的毒副作用，但治疗费用高，而且不同患者的反应存在很大差异。
2、光动力学治疗(photodynamic therapy，pdt)是上个世纪七十年代末新兴的一种肿瘤治疗技术，曾被称为“第四大肿瘤治疗方式”。它的主要原理是利用光敏剂(photosensitizer，ps)在特定波长的光照射下产生活性氧自由基，从而对肿瘤细胞和组织造成损伤，以达到抑制肿瘤的效果。光动力学治疗的优势在于其选择性良好，美容效果明显，保护重要器官功能，毒性反应轻微，且没有耐药性等特点。
3、传统的光敏剂通常需要可见光来激发，其穿透深度有限(<3mm)，因此对于深层和实体肿瘤的治疗效果有限。解决这个问题的一种策略是使用近红外光(nir)激发的光敏剂，因为nir位于生物组织的光学窗口内，可以提供更深层(～2cm)的肿瘤治疗，同时降低对健康组织的光毒性。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种金纳米颗粒及其在肿瘤细胞焦亡诱导中的应用，即基于金纳米颗粒的双光子光动力诱发肿瘤细胞焦亡、进而诱发机体抗肿瘤免疫。解决目前肿瘤治疗方式的局限性、丰富金纳米颗粒的应用场景。
2、为了实现本专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术提供一种金纳米颗粒l-aunp@tmt，尺寸大于2nm，且具有如下任一项或几项特点：
4、1)在520nm处无吸收峰，不存在表面等离子体共振现象；
5、2)具有优异的光致发光现象，最适激发波长为467nm，和/或，荧光光谱为500—600nm；
6、优选的，l-aunp@tmt金核尺寸为2.75±0.47nm。本专利技术所使用的金纳米颗粒l-aunp@tmt，大于金纳米团簇(≤2nm)的尺寸，但具有类似金纳米团簇的性质。
7、本专利技术所述金纳米颗粒l-aunp@tmt的制备方法包括：
8、1)在避光条件下，将水合氯金酸的水溶液与(5-巯基-1，3，4-噻二唑-2-基硫代)乙酸的氢氧化钠水溶液进行混合，得到均匀的混合物；
9、2)将步骤1)得到的混合物于阳光下进行反应，得到(5-巯基-1，3，4-噻二唑-2-基硫代)乙酸保护的金纳米颗粒(简写为l-aunp@tmt)溶液。优选的，所述氯金酸、(5-巯基-1，3，4-噻二唑-2-基硫代)乙酸与氢氧化钠的摩尔比为1:2:10～12。
10、优选的，所述混合物中，氯金酸根离子浓度为0.98～1毫摩/升。
11、优选的，反应过程中，采用光致发光谱监测反应进程。
12、优选的，所述反应时间为65～75分钟。
13、优选的，反应所得金纳米颗粒溶液采用超纯水洗涤并离心后得到金纳米颗粒浓缩物。
14、优选的，将所述金纳米颗粒浓缩物冻干后避光保存。
15、本专利技术还提供颗粒尺度大于2nm的(5-巯基-1，3，4-噻二唑-2-基硫代)乙酸保护的金纳米颗粒。
16、优选的,所述金纳米颗粒无等离子共振吸收。
17、本专利技术还提供一种光敏剂，所述光敏剂为金纳米颗粒l-aunp@tmt；
18、优选的，所述光敏剂为所述金纳米颗粒l-aunp@tmt；
19、优选的，所述光敏剂用于光动力学治疗；
20、优选的，所述光敏剂为双光子光敏剂。本专利技术主要应用的是金纳米颗粒l-aunp@tmt的双光子性质。近红外光与可见光相比，组织穿透能力较强且光毒性小，双光子光敏剂在光子密度足够高时，可同时吸收两个波长较长、能量较低的光子而到达激发态。l-aunp@tmt是一种优异的双光子光敏剂。以本专利技术所述金纳米颗粒为光敏剂的双光子光动力学诱导肿瘤细胞焦亡，治疗系统安全性高。
21、本专利技术还提供一种试剂盒，包括所述金纳米颗粒l-aunp@tmt或所述光敏剂。
22、本专利技术还提供所述金纳米颗粒l-aunp@tmt、所述光敏剂或所述试剂盒在制备用于光动力学治疗的光敏剂中的应用。
23、本专利技术还提供所述金纳米颗粒l-aunp@tmt、所述光敏剂或所述试剂盒的使用方法，包括利用飞秒脉冲激光照射金纳米颗粒l-aunp@tmt；
24、优选的，利用790±2nm飞秒脉冲激光照射；
25、进一步优选的，利用利用790±1nm飞秒脉冲激光照射；
26、优选的，790nm飞秒脉冲激光照射下双光子吸收截面可达2.05×105gm；
27、优选的，790nm的飞秒脉冲激光组织穿透能力强，穿透性可达到2cm；
28、优选的，功率密度为6.5-6.7w/cm2，进一步优选为6.6w/cm2。
29、本专利技术还提供所述金纳米颗粒l-aunp@tmt、所述光敏剂或所述试剂盒在以下任一项中的应用：
30、1)治疗肿瘤；
31、2)杀伤肿瘤细胞；
32、3)抑制肿瘤的生长或复发；
33、优选的，所述肿瘤是指肝、肺、呼吸道、胃肠道、颅内、眼或膀胱等部位的肿瘤；
34、优选的，细胞杀伤通过双光子光动力学诱导；
35、优选的，细胞的死亡方式为细胞焦亡；
36、优选的，用于活体小鼠；
37、优选的，通过控制飞秒脉冲的功率密度、l-aunp@tmt浓度、激光照射时间中的一种或几种来控制对细胞的杀伤能力。本专利技术的治疗肿瘤结果好，tp-pdt组的肿瘤体积与其它对照组相比，降低80％，且治疗组约50％的肿瘤达到治愈的效果，且不再复发。
38、本专利技术还提供所述金纳米颗粒l-aunp@tmt、所述光敏剂或所述试剂盒在产生活性氧自由基(ros)中的应用；
39、优选的，产生ros的机制为ⅰ、ⅱ型；
40、优选的，在有氧和/或无氧条件下产生ros；
41、优选的，l-aunp@tmt在790nm激光照射下，产生大量的活性氧自由基。
42、本专利技术还提供所述金纳米颗粒l-aunp@本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种金纳米颗粒L-AuNP@TMT，其特征在于，尺寸大于2nm，且具有如下任一项或几项特点：
2.一种光敏剂，其特征在于，所述光敏剂为金纳米颗粒L-AuNP@TMT；
3.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT或权利要求2所述光敏剂。
4.权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒在制备用于光动力学治疗的光敏剂中的应用。
5.权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括利用飞秒脉冲激光照射金纳米颗粒L-AuNP@TMT；
6.权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒在以下任一项中的应用：
7.权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒在产生活性氧自由基(ROS)中的应用；
8.权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT、权利要求2所述光敏剂或权利要求
9.权利要求1所述金纳米颗粒L-AuNP@TMT、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒在以下任一项或几项中的应用：
10.根据权利要求5所述的使用方法、或权利要求6-9任一项所述的应用，其特征在于，用于非疾病诊断或治疗领域。
...【技术特征摘要】
1.一种金纳米颗粒l-aunp@tmt，其特征在于，尺寸大于2nm，且具有如下任一项或几项特点：
2.一种光敏剂，其特征在于，所述光敏剂为金纳米颗粒l-aunp@tmt；
3.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述金纳米颗粒l-aunp@tmt或权利要求2所述光敏剂。
4.权利要求1所述金纳米颗粒l-aunp@tmt、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒在制备用于光动力学治疗的光敏剂中的应用。
5.权利要求1所述金纳米颗粒l-aunp@tmt、权利要求2所述光敏剂或权利要求3所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括利用飞秒脉冲激光照射金纳米颗粒l-aunp@tmt；
...
【专利技术属性】
技术研发人员：降雨强，韩荣成，燕飞虹，李瑞渊，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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