Cas9介导的麻竹基因编辑载体和应用制造技术

本发明专利技术公开了Cas9介导的麻竹基因编辑载体及其应用。发明专利技术通过构建Crispr/Cas9麻竹表达载体，通过农杆菌（EHA105）转化的方式，将Cas9基因导入麻竹中，对麻竹PSY1基因进行定向编辑，首次提供一种能够定向编辑麻竹自身基因从而获得麻竹突变体的方法。证明了CRISPR/Cas9在竹子中的适用性，从而促进了未来竹子的研究和育种。

【技术实现步骤摘要】
Cas9介导的麻竹基因编辑载体和应用
本专利技术属于生物技术和遗传育种领域，具体涉及Cas9介导的麻竹基因编辑载体，还涉及该基因编辑载体的应用。
技术介绍
竹是一种特殊的草种，具有重要的经济价值和生态价值。约25亿人直接生产和消费竹子，2018年国际贸易额达到688亿美元(国际竹藤组织数据)。亚洲主要竹种之一是麻竹具有三个亚基因组的六倍体物种(2n=72,AABBCC)尽管竹子在农艺上很重要，但传统育种几乎不可能改变竹子的性状，因为竹子需要70多年才能开花。由于缺乏有效的基因操作工具，竹材的研究在很大程度上滞后。CRISPR(有规律的间隔短回文重复聚类)/Cas9为许多植物的基因组编辑提供了直接的方法，但从未在竹子中应用过。在这里，本专利技术利用CRISPR/Cas9技术通过靶向一个特定的拷贝或所有同源基因来产生竹子突变体。类胡萝卜素在植物当中有许多作用，同时与人类是生活也是息息相关。八氢番茄红素合成酶PSY1基因在番茄(SlPSY1和SlPSY2)等dicot植物和玉米(ZmPSY1-3)、水稻(OsPSY1-3)、高粱(Sb本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Cas9介导的改造麻竹八氢番茄红素合成酶PSY1基因的方法，其特征在于，针对麻竹基因组3个DlmPSY1等位基因座保守位点设计sgRNA1，并在3个DlmPSY1等位基因的间隔区选择了sgRNA2靶区包含2-3个单核苷酸多态性的位点，检测sgRNA错配的耐受性；所述sgRNA1和sgRNA2的序列如下：/nsgRNA1：gaggtccggccagcctcccccgg；/nsgRNA2：gcgcggcacctccaggtccttgg。/n

【技术特征摘要】
1.一种Cas9介导的改造麻竹八氢番茄红素合成酶PSY1基因的方法，其特征在于，针对麻竹基因组3个DlmPSY1等位基因座保守位点设计sgRNA1，并在3个DlmPSY1等位基因的间隔区选择了sgRNA2靶区包含2-3个单核苷酸多态性的位点，检测sgRNA错配的耐受性；所述sgRNA1和sgRNA2的序列如下：
sgRNA1：gaggtccggccagcctcccccgg；
sgRNA2：gcgcggcacctccaggtccttgg。


2.根据权利要求1所述一种Cas9介导的改造麻竹八氢番茄红素合成酶PSY1基因的方法，其特征在于，麻竹基因组PSY1基因的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。


3.一种麻竹定向编辑的CRISPR/Cas9表达载体，其特征在于：该载体Ubi启动子连接Cas9基因，由Osu6b启动子调节sgRNA，Ubi启动子序列如SEQIDNo.2所示；Osu6b启动子如...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱强，叶善汶，陈刚，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35