维管束组织特异性表达启动子、包含其的载体、转化体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种维管束组织特异性表达启动子包含其的载体、转化体及应用，所述启动子由甜菜心基因组获取，其核苷酸序列如SEQ ID:No 1所示，所述启动子能够明显促进报告基因GUS在拟南芥维管组织中表达，其在植物的维管束组织中具有特异性表达的作用，从而使由所述启动子驱动的抗病基因能够在植物维管束中表达，从而对抗枯萎病等病菌，为植物的抗病育种提供了一种新的途径。

Vascular bundle tissue-specific expression promoter, its carrier, transformant and its application

【技术实现步骤摘要】
维管束组织特异性表达启动子、包含其的载体、转化体及其应用
本专利技术属于植物基因工程
，具体地说涉及一种维管束组织特异性表达的pBrpHMA2启动子及其应用。
技术介绍
基因的表达受不同因素的调控，其中转录调控是基因表达的重要调控步骤。顺式作用元件和反式作用因子共同作用调控基因的转录表达，而启动子是一种重要的顺式作用元件，在基因的特异表达过程中发挥重要作用。启动子根据作用方式的不同被分为三大类：组成型启动子、诱导性启动子和组织特异性启动子。到目前为止，已有大量的组织或器官特异性启动子被分离出来，且相关研究表明，拟南芥HMA2基因，主要是在植物的根、茎和叶的维管束组织中观察到其所驱动的报告基因GUS的表达，在木质部和韧皮部都有表达，但是相关研究都没有进一步的对控制AtHMA2基因表达的启动子序列特性进行分析。pBrpHMA2启动子的序列和拟南芥HMA2基因的2000bp的启动子序列存在很大差异，序列比对发现只有40％相似，但都在植株的维管组织表现出很强的特异性。现在对在维管束特异表达的启动子的研究较少，但维管束病害却是农业生产上造成经济损失的一重要病害。比如棉花黄枯萎病、茄子黄萎病、马铃薯青枯病以及黄瓜、西瓜和苦瓜各种经济作物枯萎病。相关文献表明，由于病原菌寄生在维管阻碍水分和矿物质的运转使得植株不能进行正常生命活动，导致叶片枯萎甚至植株的死亡。棉花黄萎病是一种真菌侵染棉花根部，逐渐造成棉花叶片变黄然后脱落，严重的还会进一步造成植株的死亡，维管束病害严重影响棉花的品质，造成严重的经济损失。茄子的黄萎病，是半知菌亚门轮枝孢属大丽花轮枝菌从植株根部的伤口或者幼根表皮及根毛侵染植物体，而后在维管束内快速繁殖进而侵染整个植株。病菌会导致导管堵塞，影响植物对日常物质的吸收和正常的运输，有的还会分泌毒素导致植株叶缘、叶脉间变黄，然后是整叶变黄植株萎蔫。马铃薯青枯病又叫做细菌性枯萎症，是一种世界性的重大细菌性病害分布范围广，发病严重时会造成马铃薯产量的大大降低。青枯假单胞菌从植物的根部或者茎基部伤口侵入，也可透过导管侵入相邻的薄壁细胞导致茎部出现不规则的水浸状斑，是一种典型的维管束病害。但是对于维管束病害，目前并没有有效的化学药剂，因此，提供一种能够直接在植物维管束表达的启动子驱动的抗病基因从而在维管束中直接对抗病菌成为当前亟待解决的技术问题。
技术实现思路
为此，本专利技术正是要解决上述技术问题，从而提出一种维管束特异表达的启动子及其应用。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：本专利技术提供一种维管束组织特异性表达启动子，所述启动子由甜菜心基因组获取，其核苷酸序列如SEQID:No1所示。作为优选，所述启动子序列的克隆包括如下步骤：S1、获取BraHMA2基因并获取BraHMA2基因转录起始位点上游2000bp的核苷酸序列；S2、设计克隆引物；S3、以所述核苷酸序列为模板，用克隆引物扩增。作为优选，所述克隆引物包括：pBrpHMA2-F：TCTCTCAGGGGTAAAAGGCTTA；pBrpHMA2-R：TCTTATCGTTCTTGGACGCCAT。本专利技术还提供一种包含所述的启动子的载体，所述载体通过克隆甜菜心BrpHMA2基因转录起始位点前2000bp的片段构建而得。作为优选，所述载体由引物plp100-pBrpHMA2-F和plp100-pBrpHMA2-R与启动子序列经重组制得，所述引物plp100-pBrpHMA2-F为：GCCCTTTCGTCTTCAAGAATTCTCTCTCAGGGGTAAAAGGCTTA，所述引物plp100-pBrpHMA2-R为：GGGGATCCTCTAGAGTCGACTCTTATCGTTCTTGGACGCCAT。作为优选，重组后，还包括将构建的重组质粒plp100-pBrpHMA2-GUS转化到大肠杆菌DH5α中并通过正向引物、反向引物进行PCR鉴定的步骤，所述正向引物为：CTCTTTTTCGCCAAGTGTAG，反向引物为：CTGCCCAACCTTTCGGTATA。本专利技术还提供一种包含所述的启动子的转化体，所述转化体的宿主为植物。作为优选，所述植物为拟南芥。本专利技术还提供一种所述的启动子在拟南芥幼苗根、茎、叶的维管束组织特异性表达中的应用。本专利技术的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：本专利技术所述的维管束组织特异性表达启动子，所述启动子由甜菜心基因组获取，其核苷酸序列如SEQID:No1所示，所述启动子能够明显促进报告基因GUS在拟南芥维管组织中表达，其在植物的维管束组织中具有特异性表达的作用，从而使由所述启动子驱动的抗病基因能够在植物维管束中表达，从而对抗枯萎病等病菌，为植物的抗病育种提供了一种新的途径。附图说明为了使本专利技术的内容更容易被清楚的理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中图1是本专利技术实施例所述的pBrpHMA2启动子的克隆的PCR电泳图；图2是本专利技术实施例所述的包含所述的启动子的载体的结构示意图；图3是本专利技术实施例所述的plp100-pBrpHMA2菌落的PCR电泳图；图4是本专利技术实施例中pBrpHMA2-GUS转基因T0代植株的鉴定结果图；图5是本专利技术实施例中pBrpHMA2-GUS转基因T1代植株的鉴定结果图；图6是本专利技术实施例中pBrpHMA2-GUS幼苗染色的示意图。具体实施方式若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1本实施例提供一种维管束组织特异性表达启动子，所述启动子由甜菜心基因组中获取，其核苷酸序列如SEQID:No1所示：tctctcaggggtaaaaggcttaaaaagcaaagattaaaagaaagattactttctagtagaaagtttctattgttaccgccatcgacaacaacaaaaattatgtggccaagttgggccaagtcttgggtttgactctggttagtggtcccattactttgtgtatgtgaatgtgatggttttaacttttaactagcactcttctatgataaaaatcctttgatgctccttattgtataatatgtgttcgagtttacagaggtgagtatcgcggcttgtaatagttatgttagtttggtggccaaatcaaactccttaaggagttagacattacaaaaagcaaggaacggaagcaataaagaaactcaatctctaaatagccatcaaaattgattagatgaagtcaattttgtaaacaacgtctaggtgactagaaagctaagaattaaatgaatcggtagcttgaattttggtgagataacatatgttgctctctcgcc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种维管束组织特异性表达启动子，其特征在于，所述启动子由甜菜心基因组获取，其核苷酸序列如SEQ ID:No 1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种维管束组织特异性表达启动子，其特征在于，所述启动子由甜菜心基因组获取，其核苷酸序列如SEQID:No1所示。


2.根据权利要求1所述的维管束组织特异性表达启动子，其特征在于，所述启动子序列的克隆包括如下步骤：
S1、获取BraHMA2基因并获取BraHMA2基因转录起始位点上游2000bp的核苷酸序列；
S2、设计克隆引物；
S3、以所述核苷酸序列为模板，用克隆引物扩增。


3.根据权利要求2所述的维管束组织特异性表达启动子，其特征在于，所述克隆引物包括：
pBrpHMA2-F：TCTCTCAGGGGTAAAAGGCTTA；
pBrpHMA2-R：TCTTATCGTTCTTGGACGCCAT。


4.一种包含如权利要求1-3任一项所述的启动子的载体，其特征在于，所述载体通过克隆甜菜心BrpHMA2基因转录起始位点前2000bp的片段构建而得。


5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体由引物plp100-pBrpHMA2-F和plp10...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐玉林，邓艳午，刘帅，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44