检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物，包括PEDV‑ΔORF3‑F1和PEDV‑ΔORF3‑R1，核苷酸序列如SEQ ID NO.1、2所示。检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒，包括上述特异性引物。一种检测猪流行性腹泻病毒野毒株的方法：提取待检测样品组织中的病毒RNA，反转录为cDNA，利用上述特异性引物或试剂盒对cDNA进行PCR扩增；结果判断：若有扩增产物，则为阳性，若无扩增产物，则为阴性。本发明专利技术的特异性引物，试剂盒，及检测方法，具有高度的特异性与专一性，并且扩增效率高，灵敏度好，准确率高，重现性好，检测周期短，具有很高的可行性与应用前景。

Specific primers, kits and methods for detection of wild strains of porcine epidemic diarrhea virus

【技术实现步骤摘要】
检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物、试剂盒及方法
本专利技术涉及一种检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物、试剂盒及方法，属于分子生物学

技术介绍
猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)引起的一种猪的急性、高度接触性肠道传染病。不同年龄阶段的猪只均可感染，本病对哺乳仔猪的危害最大，7日龄以内的仔猪感染后死亡率可高达100％。近年来，由PEDV变异毒株导致的PED再度流行，给世界养猪业造成了巨大经济损失。未经传代致弱的PEDV野毒株ORF3包含675个核苷酸，编码含224个氨基酸残基的多肽，而致弱的疫苗毒株ORF3基因会出现部分片段缺失。根据基因序列差异，可以在此处设计鉴别引物，用于猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗毒株的区分。荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光探针，对PCR产物进行标记跟踪，利用荧光信号的积累实时监测PCR进程。当前关于PEDV荧光定量检测方法报道较多，然而借助染料法荧光定量PCR来特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物，其特征在于：包括PEDV-ΔORF3-F1和PEDV-ΔORF3-R1，核苷酸序列如下所示：/nPEDV-ΔORF3-F1：GCCCACTTTTATATTACTG；/nPEDV-ΔORF3-R1：CTGCCAATAAGTGTGCAAC。/n

【技术特征摘要】
1.检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物，其特征在于：包括PEDV-ΔORF3-F1和PEDV-ΔORF3-R1，核苷酸序列如下所示：
PEDV-ΔORF3-F1：GCCCACTTTTATATTACTG；
PEDV-ΔORF3-R1：CTGCCAATAAGTGTGCAAC。


2.权利要求1所述的检测猪流行性腹泻病毒野毒株的特异性引物在制备检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒中的应用。


3.一种检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的特异性引物，以及检测所必须的试剂。


4.根据权利要求3所述的检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒，其特征在于：所述检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒中还包括：猪流行性腹泻病毒野毒株阳性对照品，猪流行性腹泻病毒疫苗毒株阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。


5.根据权利要求3所述的检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒，其特征在于：所述检测所必须的试剂包括2×M5HIPerSYBRPremixEsTap、cDNA模板和双蒸水。


6.权利要求3或4或5所述的检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒在检测猪流行性腹泻病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭效珍，于克戬，黄兵，吴家强，胡峰，刘存霞，于可响，马秀丽，李玉峰，亓丽红，宋玲玲，
申请(专利权)人：山东省农业科学院家禽研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37